Топ база праймер последовательность: Топ и база — какая очередность? Пошаговая инструкция по маникюру.

Топ база праймер последовательность: Топ и база — какая очередность? Пошаговая инструкция по маникюру.

23.12.2020

Содержание

Праймер, база, топ, в каком порядке? — Вопросы и ответы

Анна Черемных

Всё именно в таком порядке и наносится)
Сначала сделайте маникюр, уберите кутикулу, бафом снимите натур. глянец с ногтя обезжирьте ногтевую пластину после маникюра приступайте к покрытию.
Нанесите на ноготь праймер, подождите около 30 секунд, наносите базу выравнивая ногтевую пластину после в лампу, далее если нужно наносите цвет, просушиваете в лампе и завершаете топом. После того, как топ просохнет подождите около 20-30 секунд чтобы ногти остыли и можно снимать липкий слой.
И вуаля маникюр Готов!Масяня2

Всего 2 ответа.

Другие интересные вопросы и ответы

Что знает каждая девушка, о чём парни даже и не догадываются?

Владислав Кузнецов7

Источник: kosmetista.ru

Немного о том, что по факту должно волновать только девушек, поэтому вы этого, скорее всего и не знаете. 

Этого не знают даже некоторые девушки, но нельзя “раз**ать” вагину. Не существует “раз**аных” вагин, ширина влагалища никак не коррелируется с количеством половых партнеров девушки. Это миф из серии “если много мастурбировать, можно стереть член и он будет меньше” Влагалище — это элластичные и упругие мышцы, которые обычно  сжаты и находятся в состоянии “покоя”, а, когда девушка возбуждается, вагина расширяется для последующего коитуса. Чем больше возбуждена девушка — тем расслабленнее мышцы. Поэтому, если вы сношаетемь с девушкой и ощущаете “карандаш в стакане”, знайте — она просто рада вас видеть. 

Не знаю, уместны ли тут жизненные истории. Как-то поссорилась с парнем, он мне за один вечер заявил сначала: “ты раз**ебаная шлюха, я вообще ничего не чувствовал”, а потом “у тебя такая узкая, что я вообще с трудом вошел”. Так и не смог определиться 

Также вагина может вернуться в практически девственное состояние за полгода отсутствия секса 

То, что просто абсолютно  необходимо знать всем и каждому (нет). Девственная плева — не совсем плева. Это скорее “кольцо” на входе во влагалище, пленка с дыркой посередине. Поэтому в некоторых странах сейчас подумывают над переименованием ее в “вагинальную корону” 

Надежда Фауль206Всего 7 ответов.

здравствуйте, хочу посоветоваться, что конкретно надо иметь для наращивания гелем? и можно ли праймеры использовать другой фирмы (не такой как база и топ)?

Гость4

Источник: wlooks.ru

Абсолютно все может быть самых разных фирм.
Для наращивания нужна кисть для геля
Праймер бескислотный
База для гель лака (на которой хорошо держится гель лак)
Гель
Пилка
Инструменты для маникюра (кусачки, аппарат, фрезы, пушер)
Формы для наращивания
Топ (любой, можно для гель лака)Анастасия Черных5

Всего 1 ответ.

Последовательность нанесения гель-лака?

Как правильно и в какой последовательности наносить средства маникюра с гель-лаком?

Магистр1Источник: on-woman.com

Я использую такой порядок при создании маникюра с помощью гель-лаков и Шеллака:

  1. Сначала делаем то же, что и при обычном маникюре. Придаем ногтям нужную форму, срезаем заусенцы, огрубевшую кожу, отодвигаем или обрезаем кутикулу.
  2. Немного шкурим поверхность ногтя баффиком, чтобы поверхность была шероховатая, лучше была сцепка с липкими веществами и лак дольше держался.
  3. Обезжириваем поверхность ногтя с помощью безворсовой салфетки. Можно просто спиртом или водкой, можно спецсоставами.
  4. Если есть специальная база или грунтовка, наносим ее перед основным маникюром, ждем 1 минуту. Сушить под лампой не нужно. Можно обойтись и без праймера.
  5. Наносим базу в один тонкий слой. Сушим 1-2 минуты, смотря какая база, лампа и ногти. У меня иногда и за 30 секунд высыхает.
  6. Наносим гель-лак тонким слоем. Сушим 1 минуту. При необходимости процедуру повторить. Я обычно наношу в 2-3 слоя, иногда даже в 4 (не рекомендуется!), последние 2 слоя сушу по 2 минуты. Люблю яркие, насыщенные цвета ногтей и чтобы не было полос и неравномерностей цвета.
  7. Наносим топовое покрытие, сушим 1-2 минуты.
  8. Тем же обезжиривающим веществом и салфеткой снимаем с ногтей липкий слой, который выделяется после сушки топа под лампой. Есть гель-лаки, которые не дают липкого слоя.

После нанесения гель-лака нельзя мочить руки хотя бы 2 часа, так как лак продолжает полимеризоваться. Лучше в этот день не мыть голову, посуду. Ну или в перчатках.

Завтра как раз займусь очередным нанесением гель-лака:) Вот такого красивого бордового цвета. Получаю от этого процесса эстетическое и медитативное удовольствие! На носу стильная осень!

mirdo­bra1Всего 2 ответа.

Какой самый хороший праймер и база для гель лака? Подскажите пж

Купила фирму тнл. Сделала маникюр как положенно. Подпилила ногти, Сняла глянец, потом праймер кислотный, база, 2 слоя гель лака и топ. А на вечер ногти уже стали отслаиваться. В чем причина. Расстроилась прям ( подскажите может другой фирмы надо праймер и база?Гость2

Источник: www.photohistory.ruВсего 1 ответ.

применение с гель-лаком и без него

Как выбрать топ и базу

Чтобы базовый состав и финиш полностью выполняли свои функции, а значит — продлили жизнь маникюру, защитили натуральный ноготь, нужно потрудиться их правильно выбрать, в соответствии с маркой гель-лака. Если вы предпочитаете шеллак, тоже надо подобрать соответствующие средства. Вам помогут общие правила и знание нескольких нюансов:

  1. Если вы пользуетесь шеллаком, подойдет фирма Коди, Блюскай или CND – они «дружат» практически со всеми гель-лаками. Средство какой-либо другой фирмы может конфликтовать.
  2. Базу и топ предпочтительнее купить одной фирмы и соответственно гель-лак.
  3. Если вы несколько ограничены в средствах, купите цветной лак по дешевле, но на топе и базе экономить не стоит. Дело в том, что, как мы выяснили, именно они отвечают за стойкость и блеск маникюра.
  4. Мастера утверждают, что все дополнительные проверенные жидкости средней и высокой ценовой категории обладают более-менее неплохими характеристиками. Однако некоторые могут иметь дополнительные свойства. Например, иногда их обогащают гидролизированным кератином. Это даст вам преимущество в виде дополнительного ухода за пластинами и продления стойкости маникюра за счет повышенной приобретенной монолитности. В случае, если у вас тонкие ногти, подобное средство для укрепления рекомендуют наносить самостоятельно.
  5. Если пластины неровные, поврежденные, имеет смысл использовать более густую базу для лучшего укрепления.
  6. Если пластины тонкие, используем густой топ. Что касается конкретных производителей и названий продукта, то тут ориентируйтесь на то, подходит ли средство вашему гель-лаку. Это можно уточнить у продавца, на официальных сайтах, в инструкции. Более-менее универсальными считаются средства от Kodi и Блюскай.
  7. Немаловажную роль играет и удобство использования конкретного средства. Флакон должен быть удлиненным, чтобы большое количество средства не оставалось на дне из-за невозможности его быстро достать кистью. Он должен быть устойчивым. Сама кисть должна быть плотной, густой, ровно или слегка закругленно срезанной, ворсинки не должны топорщиться, ручка должна хорошо ложиться в руку. Ведь надо наносить быстро и аккуратно.

Заменить базу и топ нельзя ничем, вместо них не подойдет никакое средство, и отличаются они очень сильно, так что выбор делать придется. И не факт, что он сразу будет правильный.

В любом случае нужно проконсультироваться с мастером или грамотным продавцом, либо консультантом. Или запомните наши рекомендации и потом отправляйтесь за удачными покупками.

Укрепление ногтей акриловой пудрой под гель лак

Акриловой пудрой можно укрепить ногти, чтобы придать им здоровый натуральный вид, а можно провести процедуру укрепления акриловой пудрой под гель лак. Эти две техники не имеют между собой кардинальных различий, лишь несколько нюансов. Сама же процедура столь проста, что каждый, у кого есть навыки по созданию гелевого маникюра, справится с ней без проблем.

Фото с сайта: mailbusiness.ru

Рассмотрим, как правильно укреплять ногти акриловой пудрой поэтапно:

  1. Как всегда, в начале любой процедуры необходимо провести гигиенический маникюр и придать форму ногтям.
  2. Следует тщательно очистить ногтевую пластину от птеригия (пренебрежение этим моментом – самая распространенная причина отслоения любого покрытия с ногтей)
  3. Далее необходимо тщательно зашлифовать ногтевую пластину (но без фанатизма, нужно снять лишь глянец) и очистить ногти от образовавшейся пыли.
  4. Необходимо обработать ногти антисептиком.

Важно

Никогда не пренебрегайте антисептическими мероприятиями! Гелевое покрытие, или же укрепление ногтей искусственными материалами держится на ногтях длительное время, а любая инфекция в виде грибка, оказавшаяся надолго запертая плотным покрытием – отличная среда для развития патогенных микроорганизмов.

Нанесение праймера. Он сделает поверхность ногтей более пористой и улучшит сцепление натурального кератина с искусственным материалом.
Нанесение базового геля. Для процедуры по укреплению ногтей акриловой пудрой желательно выбирать силиконовые густые консистенции, например, такие как у базы «KODI».

На непросохшую базу наносится акриловый порошок. Порошок может быть бесцветным (в том случае если на ногти не будет наноситься декоративное покрытие), а можно использовать и цветной порошок (в случае если производится укрепление ногтей акриловой пудрой под гель, цвет акриловой пудры не принципиален, все равно он перекроется пигментом, выбранного лака)

Важно покрыть ноготь плотным слоем акрила, чтобы не осталось пустот.
После покрытия ногтей акрилом их следует сушить в UF-лампе в течение 2 – 3 мин.
После полимеризации, следует тщательно снять остатки акриловой пудры с ногтей при помощи щеточки для ногтей.
В случае если акрил был нанесен неравномерно и местами образовались бугорки или выемки, следует зашлифовать пластину, до образования ровного слоя.

Далее, если не планируется дальнейший декор ногтей, поверх акрила наносится топовый слой геля. Он необходим для придания ногтям гладкой поверхности и красивого глянца

Топ просушивается в лампе, а потом снимается липкий слой. Если же поверх акрила будет наноситься декоративное покрытие, то топ или базу лучше не наносить, а сразу покрывать их цветным гель-лаком. За счет шероховатой поверхности акрила, цветной гель-лак лучше схватится с поверхностью пластины. Цветные слои гель-лака обязательно следует просушить в лампе.
После того как будут нанесены все слои цветного гель-лака, и выполнены все декоративные работы, наносится финишное покрытие, которое просушивается в лампе.
На завершающем этапе проводят снятие липкого слоя и нанесение масла или крема для кутикулы.

Фото с сайта: manikurpro.ru

Кстати, совсем не обязательно покрывать акриловой пудрой всю ногтевую пластину. Достаточно укрепить лишь стрессовые зоны – свободный край ногтя и боковые грани возле ногтевого ложе. Затем с помощью пилочки останется только выровнять границы акрилового слоя, а дополнительным слоем базы сгладить переходы.

Естественно, что по мере отрастания ногтей, граница пластины, укрепленного акрилом, будет явно бросаться в глаза. Однако ее коррекция более проста, нежели чем при наращивании ногтей гелем. Достаточно снять привычным способом верхние слои гель лака. Затем следует тщательно отшлифовать акриловое покрытие, не снимая его до конца и выровнять те участки где акрил был не нанесен или же отошел. Снова нанести на ногти базовый гель, включая и те участки, где он не был нанесен, и покрыть равномерно акриловой пудрой. Все – ногти снова крепкие и готовы к новому декоративному покрытию.

Дополнительное украшение ваших ноготков

При правильной последовательности покрытия ногтей гель-лаком ваш маникюр будет радовать долгие дни. Поэтому часто хочется чего-нибудь «этакого» для яркого акцента или оригинального вида. В качестве дополнительного декора поверхности ногтя чаще всего используют следующие материалы.

Блестящие тонкие клейкие ленты, которыми удобно создавать полосатый маникюр. Это может быть одна наклеенная линия или шеренга, переплетение полос. Удобны такие ленты тем, что имеют липкое основание, удобны в работе и отлично дополняют любой фон. Приклеиваются они на просушенный цветной слой лака и сверху покрываются слоем топа.

Стразы любых размеров и цветов. Ими можно выкладывать различные композиции, которые на солнце будут переливаться всеми цветами радуги. Некоторые мастера для надежности используют специальный клей для надежной фиксации. Несмотря на свой объемный вид, удобны в процессе носки.

Наклейки и аппликации на водяной или клеевой основе. Это отличная альтернатива рисованию кисточками. Достаточно удобно, когда за пару секунд на ногте уже готовый рисунок. Наклейки хорошего качества отличаются четкостью изображения, вплоть до реалистичного вида. Последовательность нанесения — на гель-лак и под топовое покрытие.

Трафареты под покраску, когда вы используете лак отличного от фонового цвета. Бывают многоразовые и одноразовые, но суть от этого не меняется. Вам не придется прорисовывать каждый элемент узора, тем самым вы экономите время и свои нервы.

Постоянно появляется в ассортименте что-то новое и интересное для украшения вашего маникюра. Поэтому, если вам интересна тема дизайна ногтей, старайтесь отслеживать новинки и тенденции моды.

Состав средства

Производители праймеров для ресниц используют для их изготовления различные компоненты. Чаще всего в состав средства входят следующие ингредиенты:

  • вода – это основа;
  • этанол – входит в состав этилового спирта, отлично очищает и обезжиривает, подсушивает любые поверхности;
  • аллантоин – улучшает регенеративные способности организма.


Выбранный вами праймер может иметь легкий спиртовой аромат, выдающий наличие этанола В составе могут присутствовать витамины А, Е, В – все зависит от того, какие цели преследует производитель. Если праймер предназначен для ухода за ресницами и улучшения их роста, то скорее всего в составе обнаружится витамин А. В случае необходимости восстановления ресниц, их укрепления и избавления от ломкости нужно средство с витамином Е в составе. А третий указанный компонент предназначен для общего ухода за волосками.

Рациональный выбор

Чтобы подобрать акриловую пудру, задайтесь вопросом, зачем она вам:

  • Чтобы поверхность ногтя была ровной, возьмите и используйте камуфлирующий состав. Только постарайтесь его подобрать по цвету ногтя.
  • Если вам предстоит укрепление, или коррекция форм кончиков, тогда берите прозрачную акриловую пудру под гель-лаки, даже для французских видов маникюра.
  • Для яркого нейл-арта подойдут средства с блестками, либо цветные. Можете фантазировать с видами маникюров в этих случаях, сколько хотите. Варианты можно посмотреть на фото.

Нейл — арт с блестками

Что нужно знать о достоинствах и минусах этого средства

Задачи, которые ставятся перед акриловой пудрой, нарастить ногти. Она также занимается укреплением ногтевых пластин. Только нужно не забывать корректировать длину ноготков.

Здесь много разных оттенков. Текстура тоже может быть разнообразной. Можно сделать объемный узор, с вязальной структурой, французский. Акриловый лак на водной основе для дерева как наносить?

И для этого вам понадобится только такой порошок.

Салонные такие процедуры не занимают много времени. Здесь роль играет полимеризация. Если средство быстро застывает, то дальнейшие действия происходят очень быстро.

Можете попросить у мастера акрил с названием high speed.

Акриловая пудра розового цвета

Насчет минусов, ничего нельзя сказать. Просто, в отзывах, поклонницы говорят о том, что необходимо правильно им пользоваться, четко по инструкции.

Хотите укрепить ногти в домашних условиях, не посещая салона? Укрепление ногтей должно быть пошаговым, в соответствии инструкции. А, так все возможно.

Как пользоваться акриловой пудрой

Для начала посмотрите видео по мастер-классу. Даже для начинающих это будет сделать нетрудно.

Если у вас тонкие ногти и гель лак держится недолго, необходимы следующие процедуры. На нашем сайте есть пошаговые уроки и для начинающих, в том числе.

Вот один из мастер-классов:

  • Для начала ногти очищаются от лаковых покрытий, пилочкой равняются края, убирается кутикула. Каждый ноготок должен почувствовать прикосновение мягкого бафа.
  • Устроив такую подготовку, далее, подключить обезжиривание или дегидрацию, не забывая про торцы.
  • После сушки, нужно нанести на ногти ультрабонд или праймер. Использовать всю площадь и длину. Заметьте, что на внутренние структуры ногтевой пластины, такие средства не влияют. Они только способствуют механической прочности и устойчивости ногтей. То есть, натуральные ногти лучше сцепливаются с покрытиями.
  • Дальше необходимо покрыть поверхность базой. Не просушивая базу под лампой, принимаемся за укрепление. Щедро посыпаем ноготки акриловой пудрой, с помощью кисти или лопаткой для маникюра. Старайтесь это делать над посудой, где лежит порошок. Чтобы излишки ссыпались туда же. При этом, обязательно поворачиваем ноготки, так, чтобы средство покрывало всю базу.
  • Струшиваем лишнюю акриловую пудру и отправляем на полимеризацию. После сушки хорошенько ноготки обрабатываем, маникюрной щеточкой. Чтобы наверняка удалились с пластин излишки незатвердевшей акриловой пудры. Нанесение акриловой пудры на гель лак пошаговая инструкция? Кисточкой такого эффекта не добьетесь. Даже в инструкции этот момент присутствует. Если ногтевые пластины сильно ослаблены, требуется повторение такой процедуры.

Цвет акриловой пудры совершенно не влияет, после укрепления, на завершение маникюра с помощью лаков-гелей. Если у вас прозрачная пудра, то можно нанести слой базы и топа. В итоге, вы получите аккуратные и укрепленные ногти.

Разные цвета лака под акрил

Со второй рукой, все повторяется в том же порядке, ничего не меняя. Как видите, мастер класс ничего сложного вам не предложил. Если вы все сделали правильно, прослушав урок, то у вас вышло достаточно ровное покрытие после гель-лака.

Только для укрепления используйте качественные материалы.

Существует два варианта завершения процедуры
  • Снова покрываются ногти базой.
  • Наносятся гели-лаки на зафиксированную пудру.

Мастера советуют пользоваться вторым вариантом. Ведь, благодаря шероховатой поверхности, гель-лаки не будут растекаться и сжиматься.

Применение акриловой пудры

Как снимаются такие покрытия
  • Для начала, необходимо снять гель-лак. Берется ватный диск и наносится на него средство для снятия гель — лака.
  • Пальчики заворачиваются в фольгу.
  • Через 10 минут, прокручивающимися движениями, снимается фольга.
  • То, что осталось от средства укрепления ногтей, легко снимается апельсиновой палочкой.

Вот так пошагово проводятся процедуры, по укреплению ногтей акриловой пудрой под гель-лак.

Праймер для ногтей

Что из себя представляет праймер для ногтей и чем его при необходимости можно заменить?

Текст: Редакция Makeup.ru 21 декабря 2016

iStock

Праймер для ногтей обезжиривает ногтевую пластину и приподнимает чешуйки верхнего слоя ногтя, тем самым подготавливая ее к нанесению долгосрочного покрытия (гель-лаком или шеллаком) или к наращиванию ногтей.

Не путайте праймер для ногтей с базой под гель-лак. Праймер, в отличие от базы, не является покрытием, которое требует сушки в лампе.

Праймер не только обезжиривает ногти, но и улучшает сцепление ногтевой пластины с покрытием. Также он обладает антибактериальным действием, тем самым выполняет защитную функцию и не дает возможным микробам размножаться под покрытием. Существует два основных вида праймеров: кислотный и бескислотный (чем они отличаются, мы уже выяснили в этой статье).

Чем можно заменить праймер для ногтей?

  • Вместо праймера можно использовать обычный уксус. Он отлично справляется с функцией обезжиривания ногтей.
  • Можно попробовать использовать также спирт или одеколон.

Помните, что ни одно альтернативное средство не способно справится с задачей так же хорошо, как и праймер для ногтей. Так что равнозначной замены не существует: лучше все-таки пользоваться специальным средством.

Жидкость для снятия лака с ацетоном сушит ногтевую пластину и немного приподнимает чешуйки верхнего слоя ногтевой пластины, тем самым обеспечивая хорошее сцепление с покрытием. Единственное, в состав жидкости не должны входить масла. Это не обезжирит ногти, а только добавит невидимую маслянистую пленку. В результате покрытие может оказаться не таким долгосрочным, как хотелось бы.

А вы пользуетесь праймером для ногтей? 

Про базы под макияж, основы, праймеры, грунтовки+ Макияжный лайфхак. | Блогер Ricardadada на сайте SPLETNIK.RU 16 декабря 2015

Базы, праймеры, основы.

ПОСТ ПОЛУЧИЛСЯ ДЛИННЫЙ

ПОЭТОМУ

ИЩИТЕ ТО, ЧТО ПОЛЕЗНО ИМЕННО ВАМ.

База — это продукт, который наносится на чистую кожу перед тональным кремом, для того чтобы, улучшить конечный результат макияжа, и относится он к декоративной косметике (а не к уходовой, как иногда может показаться). Базу еще называют грунтовкой или таким словом, как «праймер».

 

 

— Базы не обязательны, но они создают узконаправленный эффект, который возможно другой продукт не в состоянии создать. Такие эффекты например как: матирование, сияние, выравнивание, и т.д.

 

Как они выглядят:

Примерно как крем

 

— Основы без тонального крема могут действовать, но не долго, так как не имеют достаточную плотность, могут испариться частично, стереться, и в итоге исчезнуть с лица вместе с нужным эффектом, поэтому ими пользоваться нужно только под тональный крем, если необходим нужный эффект.

— Базы не маскируют и не устраняют проблемы кожи, они лишь подготавливают кожу перед нанесением тонального крема. И весь результат действия базы нужно рассматривать после нанесения последнего продукта на лицо, то есть пудры или тонального крема.

— Нанесение Базы — это  начальный этап макияжа, который стоит соблюдать, чтобы добиться и создать прекрасный результат.

__

Какую выбрать?

Внимание ! Если вы уже нашли свой любимый праймер,  прекрасно понимаете, для чего он вам нужен, то данный отрезок текста можете спокойно пропустить)

База бывает:

(в примерах по три продукта

 масс-маркет, профессиональный, люксовый

1- Матирующая

(масс-маркет)

 Lumene Beauty Base Matifying Primer

 

 

(профессиональный) Гель матирующий для 15мл T Zone Gel Atelier.

 Estee Lauder База под макияжматирующая Primers (люкс)

 

2- Выравнивающая  (очень похожа на первую),

L`OREAL SMOOTH MAGIQUE (масс-маркет)

Smashbox Photo Finish Foundation Primer oil-free (проф)

Diorskin Glow Maximizer Dior (люкс)

3- Подсвечивающая,  она же жемчужная / база для придания сияния лицу

Lumene база  с эффектом сияния (масс-маркет)

MakeUp Atelier, Rouges à Lèvres Palettes. Жемчужная база (проф)

Guerlain База под макияж с корректирующими жемчужинамиMeteorites Perles (люкс)

(Люкс) Основа под макияж Le blanc de Chanel
 

4- Меняющая цвет кожи, самые популярные цвета- розовый, лавандовый, персиковый, фисташковый

Серии

 

База под макияж Pupa (масс-маркет)

make up forever (проф)

База под макияж Givenchy Actimine (люкс)

 

4- Увлажняющая

 

Праймер увлажняющий под макияж e.l.f. Studio Hydrating (масс-маркет)

MAC Prep+Prime Moisture Infusion —Увлажняющая сыворотка для лица (проф)

Hydraglow Увлажняющая база под макияж Ланком (люкс)

 

5- База – закрепитель, закрепляющая макияж/тени/тон/помаду (чаще всего для век), в ней можно найти маленькие блестки или похожие на блестки закрепляющие частицы.

Фиксирующая база под тени для векVivienne Sabo Fixateur Fixing Eyeshadow  (масс-маркет)

Праймер для век Benefit. (проф)

База под тени База под тени ESTEELAUDER Double Wear Stay-in-Place  (люкс)

 

6 — Лифтинг основы. Они либо подтягивающие сыворотки, либо силиконовые, заполняющие поры на лице и морщины, например в уголках глаз, либо увлажняющие, либо подсвечивающие и чаще всего с нежно розоватым оттенком.

Сыворотка с эффектом моментальноголифтинга Lumene Time Freeze (масс-маркет)

Увлажняющая база с эффектом LIFTING(LMX)  (проф)

Lancome LANCOME База под макияж La Base Pro (люкс)

Текстуры основ:

Текстуры бывают разными:

силиконовая (прозрачная или нет)

 

цветная

как лосьон

кремовая

сыворотка (впитывается в кожу почти полностью)

 база-хайлайтер (жемчужная масса)

 твердый крем в виде базы под тени (пастообразная масса – пластилинообразная масса).

Базы в большей или меньшей мере

— препятствуют проникновению и окислению тонального крема на коже

Пример окисления 

— совсем немного улучшают состояние кожи на вид

Пример как матирующая база уменьшает видимость морщинок.

— закрепляют тональное покрытие на лице, другим словами уплотняют  относительно — и возможно продлевают покрытие тонального крема, то есть не дают ему провалиться в поры, вбиваться в морщинки.

Когда тональный провалился в поры

Если на базе написано более 3-4 функций, то стоит задуматься и проанализировать, какая функция будет на самом деле проявляться, а какая нет. Пример

 

 

Основы по типу кожи (ВСЕ примеры можно найти выше):

— Праймеры для проблемной кожи — чаще всего они либо лечат кожу и выглядят как  крем, либо устраняют блеск (матирующая база) — на вид подобная база может выглядеть как прозрачный гель.

Для такой кожи

топ средств для любого бюджета

Многие девушки не обращают внимания на состояние, особенности, потребности и тип своей кожи, а зря! Результат от нанесения косметических средств во многом зависит от того, насколько правильно вы подобрали для себя уходовую и декоративную косметику. Естественно, одной косметикой не решить всех проблем, но возможно сократить их число. В данной статье мы постараемся разобраться в тонкостях выбора праймера для жирной кожи.

Что мы знаем о праймерах



Праймер/база/основа – дополнительное, но немаловажное средство. Нельзя отнести этот продукт только к средствам для макияжа, также как и нельзя отнести его только к средствам по уходу за лицом. База – незаменимое, уникальное средство, которое помогает сделать лицо более гладким, сузить расширенные поры, улучшить цвет лица, увлажнить, матировать, сделать макияж более стойким и не дать декоративной косметике забить вам поры и ухудшить состояние кожи.

Праймеры, разработанные специально для жирной кожи, помогут вам отрегулировать выделение себума (кожного сала), заматировать жирный блеск, сузить расширенные поры, а также, по мере необходимости, помогут в борьбе с акне и постакне, ну и, конечно же, продлят стойкость вашего макияжа и сделают его безупречным. Как правило, базы для жирной кожи обладают ещё и антибактериальным эффектом, позволяющим бороться с воспалениями.

В каких случаях необходимо использовать

На самом деле, праймер нужен всем. Однако есть определенные особенности, при которых использование базы становится необходимостью. Итак, вам необходим праймер, если:

  • у вас жирная кожа
  • с жирным блеском не справляется ни одно тональное средство или пудра
  • имеются морщины
  • есть покраснения или другие цветовые проблемы кожи
  • у вас расширенные поры
  • текстура лица неровная, бугристая
  • чувствительная кожа
  • неоднородный цвет лица с пигментными пятнами
  • вы хотите, чтобы ваш макияж держался максимально долго

Виды праймеров

Данный косметический продукт разнится не только по назначению и свойствам, но и по своему составу. Базы бывают нескольких видов:

 

Содержат в своем составе силикон, благодаря чему прекрасно выравнивают текстуру лица и заполняют поры, тем самым минимизируя их. Также это отличный праймер от морщин.

Созданы на основе минеральных компонентов. Помогают матировать лицо, а также скрывать покраснения и цветовые несовершенства, благодаря своей легкой пигментации.

  • На водной основе

Такой вид не содержит в себе никаких масел, а значит не закупоривает поры, матирует и повышает стойкость макияжа.

Консистенция данных продуктов тоже бывает разной. Обычно они делятся на следующие категории:

  1. Гелевые. Обладают легкой текстурой, благодаря чему обеспечивают лучшее скольжение тонального крема и всех последующих кремовых и жидких продуктов.
  2. Кремовые. На вид как обычный крем для лица. Прекрасно увлажняют и питают, но могут перегружать лицо.
  3. В виде спрея. Удобный и быстрый в нанесении продукт. Такие праймеры обычно идут на водной основе и предназначены для повышения стойкости макияжа и матирования.
  4. Эмульсионные. Что-то среднее между гелевой и кремовой консистенцией.

При выборе средства стоит обратить внимание на его свойства: в первую очередь вас должны интересовать матирующие основы, так как именно они призваны помочь обладательницам жирной кожи скрыть блеск. Помимо этого на жирной коже благотворно скажется наличие каолина в составе базы под макияж.

Выбор вида, текстуры и консистенции зависит от ваших личных предпочтений и целей. Например, если вы боретесь с постакне, то стоит присмотреться к минеральным праймерам, так как они обладают наиболее ярко выраженными лечебными свойствами.

Помимо праймеров для жирной кожи лица, существуют специальные средства для жирных век. Они призваны помочь вам в тех случаях, когда обычные базы для теней не справляются с излишком вырабатываемого жира и тени начинают скатываться. Если эта проблема вам знакома, то стоит обратить внимание на такие специализированные продукты.

Условием успешного использования праймера для жирной кожи является маркировка “oil-free” на продукте, что говорит нам об отсутствии масел в их составе.

Особенности нанесения

Наносить праймер достаточно легко, однако и здесь есть несколько нюансов, которые помогут вам добиться максимального эффекта от продукта:

  1. Наносится база всегда на чистое, увлажненное лицо до макияжа и никак не после!
  2. Для использования вам необходимо количество средства с горошинку – не меньше и не больше. При использовании большего количества, есть вероятность того, что тональный крем и все последующие средства могут скататься или лечь пятнами.
  3. Базу можно (а в некоторых конкретных случаях нужно) наносить точечно на определенные проблемы. Если вы используете праймер для сужения пор, то наносите его на проблемные зоны (обычно это подбородок, лоб, нос и зона вокруг носа).
  4. Наносится праймер исключительно вбивающими, похлапывающими или растирающими движениями. Старайтесь не растягивать кожу во время данного процесса, поскольку это может привести к преждевременным морщинам (особенно вокруг рта, глаз и носа).
  5. После того, как вы втушевали данный бьюти-продукт, подождите пару минут пока он впитается, а затем можете смело приступать к последующим шагам вашего макияжа.
  6. Для нанесения базы подойдут синтетические кисти, спонжи и пальцы. Главное, перед нанесением праймера на лицо, выдавить необходимое количество сначала на тыльную сторону ладони. Таким образом средство немного согреется и его будет легче распределить по коже.

Использование праймера не отменяет тональный крем, консилер и пудру. Вы не можете заменить одно средство другим.

Топ-20 праймеров для жирной кожи

Хоть большая часть девушек и не знакома с праймерами, на рынке бьюти-продуктов их огромное количество. При выборе разбегаются глаза, поэтому мы собрали самые лучшие праймеры для жирной кожи и разделили их на разные ценовые категории.

Бюджетные средства

Дешево – не означает плохо, и данные продукты это доказали!

Baby Skin Instant Pore Eraser от Maybelline New York

Прекрасно подойдет для новичка, который хочет ознакомиться с базами, но не хочет тратить много денег. Обладает гелевой текстурой, сужает поры и матирует.

 

Silky Smooth Balm Egg Pore от Tony Moly

Специально предназначен для жирной кожи с расширенными порами. Уменьшает акне, сужает поры и матирует

Bio Helix от Markell Cosmetics

Представитель белорусской косметики создан для того, чтобы матировать, а также продлевать стойкость вашего макияжа.

Nyx Pore Filler

Праймер для визуального уменьшения пор отлично выравнивает текстуру кожи и придает стойкость макияжу.

 

Magix Face Perfector Primer SPF 20 от Avon

Прекрасный бюджетный продукт, матирует и сужает поры.

 

Very Me Prep Me Perfect от Oriflame

Как и свой предшественник отлично справляется с особенностями жирной кожи.

 

 

Angel Veil Skin Perfecting Primer от NYX

Замечательный бюджетный праймер для жирной кожи. Матирует, заполняет поры, делает макияж более стойким, а также помогает избавиться от существующих прыщиков и не дает появиться новым.

Nordic Chic Mattifying & Pore Smoothing Primer от Lumene

Поможет выровнять рельеф и матировать. При этом база абсолютно некомедогенна, что позволяет не переживать о появлении высыпаний.

Studio Secrets Primer от L’oreal Paris

Создает абсолютно матовое покрытие на лице, продлевает стойкость макияжа, а также заполняет морщинки.

 

 

Люксовые и профессиональные

Отзывы на одну и ту же базу самые разные. Тем не менее, мы смогли подобрать для вас несколько продуктов в этой ценовой категории, о каждом из которых можно сказать, что это лучший праймер.

Superprimer Face Primer от Clinique

Потрясающая матирующая основа, существует в разных цветовых вариациях для корректировки тона.

The PoreFessional от Benefit

Скрывает мелкие недостатки, заполняет поры и матирует.

Finish Foundation Primer от Smashbox

Богат на витамины, увлажняет, матирует кожу и выравнивает её рельеф.

Mister Mat от Givenchy

Матирующий густой гель, который устраняет неровности, уменьшает поры и морщинки.

Redness Solutions SPF 15 от Clinique

Помогает не только придать лицу матовость, но и устраняет красноту, а также помогает справляться с высыпаниями.

High Definition Primer от Make Up Forever

Незаменимый помощник в макияже для жирной кожи. Устраняет жирный блеск, высыпания, неровности, расширенные поры, прекрасно увлажняет и держится до 12 часов.

Prep+Prime Skin Zone от MAC

Наносится легким слоем, матирует, но при этом не пересушивает кожу.

 

Pore & Shine Control Primer от NARS

Убирает излишки себума, матирует, сужает поры, уменьшает количество угрей и черных точек, борется с имеющимися воспалениями, а также обладает антибактериальными свойствами.

Stay Flawless от Benefit

Суперстойкий праймер, который специально создан для уменьшения пор. Будет держаться весь день даже на супержирной коже.

 Instant Smooth Perfecting Touch от Clarins

Делает лицо бархатным, не позволяет образовываться жирному блеску и сужает поры.

Праймер поможет улучшить вашу кожу и свести употребление последующих продуктов к минимуму. Существует миф, что базы подходят исключительного для сухого типа кожи, но это не так и мы надеемся, что убедили вас в этом!

 

 

Как выбрать базу под макияж?

  • 776
  • Профессиональные визажисты утверждают, что идеальной базой под макияж является праймер. Праймер — косметическое средство, используемое для защиты кожи от прочей косметики и вместе с тем способствующее лучшей фиксации на лице макияжа. Праймер служит основой для дальнейшего нанесения мейкапа и поэтому обязателен для использования в любое время года.

    Назначение базы под макияж

    С недавних пор база под макияж стала не просто дополнительным средством для создания идеального мейкапа, а необходимостью. Праймеры обрели невероятную популярность среди профессионалов своего дела и, соответственно, у девушек, которые следят за состоянием своей кожи. Это обусловлено универсальностью и многофункциональностью средства.

    База под макияж способствует:

    • Равномерному распределению тональной основы;
    • Увеличению стойкости последующих средств;
    • Усилению насыщенности цветов в макияже;
    • Улучшению вида и состояния кожи;
    • Предотвращает смешение оттенков косметики;
    • Выравниваю цвета лица и рельеф эпидермы;
    • Матированию кожи и устранению жирного блеска;
    • Корректировке тусклости кожи и увлажнению;
    • Защите от вредного воздействия УФ-лучей.

    В соответствии с потребностями, типом кожи, имеющимися дефектами и несовершенствами лица девушки выбирают наиболее подходящие виды праймеров, помогающих сделать красивый макияж без особых усилий.

    Правила выбора основы под макияж

    Выбор основы под макияж напрямую зависит от типа кожи, так как у каждого из них имеются свои потребности в уходе. В некоторых случаях праймер может заменить тональную основу, ВВ-крем, а иногда даже консилер.

    Для жирной кожи подойдёт матирующий праймер, способный скрыть блеск и расширенный поры. Также он защитит от воздействия солнечный лучшей и продлит стойкость макияжа. Не менее подходящая — иллюминирующая база под макияж и с блюр-эффектом. Использование праймера для жирной кожи может полностью заменить тональное средство.

    Для сухого типа кожи подобрать основу под макияж сложнее всего. В данном случае подойдёт праймер с перламутром и кремовой текстурой. Он придаёт лицу лёгкий эффект мерцания, вместе с тем увлажняя кожу.

    Для нормальной кожи подойдёт практически любая база под макияж. В зависимости от назначения мейкапа можно выбрать праймер с сияющим финишем или матовым. Лучшим решением будет использование разных видов для корректировки проблемных зон.

    Помимо прочего праймер является идеальным средством для зрелой кожи, особенно матовый вариант, не содержащий дополнительных пигментов. Средство заполняет мелкие морщинки, скрывая их, и делает поверхность кожи более упругой.

    Виды

    Существует множество видов основы под макияж, которые ориентируются на тип кожи, имеющиеся недостатки, время года и методы нанесения.

    По способам нанесения и зонам база под макияж бывает:

    • Для лица, скрывающая несовершенства кожи и подготавливающая к дальнейшему нанесению косметических средств;
    • Для губ, убирающая шероховатости и заполняющая трещинки;
    • Для век, фиксирующая и выравнивающая тон теней;
    • Для бровей и ресниц, удерживающая форму и придающая объём.

    По структуре праймер для лица бывает: гелевым, кремовым, жидким, плотным и в виде эмульсии. Данная классификация является основной, из которой исходит разделение на другие подвиды.

    Выделяют базы по типу кожи:

    • Гелеобразный вариант — основа под макияж для жирной и пористой кожи;
    • Мерцающая эмульсия подойдёт в качестве базы под макияж для сухой кожи;
    • Жидкая форма считается идеальной выравнивающей основы под макияж для кожи с небольшими дефектами;
    • Кремообразное средство выступит в роли консилера для любой кожи;
    • Компактный плотный праймер поможет поддержать баланс жидкости у нормального типа кожи.

    Цвета

    Основу под макияж можно легко подобрать в соответствии с оттенком кожи, зачастую это розовые или бежевые нюансы, самый распространённый — универсальный белый. Однако существуют цветные праймеры, помогающие бороться с недостатками кожи лица не хуже консилеров.

    Цветные базы под макияж:

    • Белая для осветления тона лица и маскировки пигментных пятен;
    • Голубая, освежающая лицо и скрывающая веснушки;
    • Фиолетовая выравнивает тон после неудачного загара и устраняет желтизну;
    • Зелёная скрывает покраснения и воспаления на коже;
    • Жёлтая — против кругов под глазами и синяков;
    • Розовая, помогающая спрятать следы усталости на лице.

    Праймер недостаточно плотный для маскировки прыщей и камедонов, он подходит исключительно для пятен, морщин, синяков, сосудистых звёздочек и небольших шрамов. Наносят любой цветной праймер необходимо зонально, то есть на дефект, который нужно скрыть, и немного вокруг, а затем слегка растушёвывают границы.

    Матирующая или перламутровая?

    Многие девушки задаются вопросом: с каким финишем лучше выбрать праймер? Конечно, в первую очередь, следует ориентировать на тип кожи, а во вторую — обратить внимание на предназначение макияжа.

    Использование матирующей базы под макияж помогает добиться идеального повседневного образа. Многие привыкли, что ровная матовая кожа — залог любого красивого мейкапа. Однако немного мягкого блеска не повредит даже в дневном макияже.

    Сияющая база под макияж больше подходит девушкам с сухой кожей, а также отлично смотрится под вечерним мейкапом. Тем не менее, немного блеска в лице не повредит даже при повседневном макияже, так как он значительно освежает кожу.

    При нанесении праймера с перламутром важно не переборщить, чтобы на лице присутствовал лёгкое загадочное свечение, но не более того. Данную основу можно использовать даже вместо хайлайтера.

    Как наносить базу под макияж?

    Базу под макияж необходимо наносить в несколько этапов, которые гарантируют, что косметика ляжет ровно, не будет скатываться и собираться на лице, не создаст ощущение маски или искусственной плёнки.

    1 этап — очищение. Сначала нужно умыться, используя специальные средства. Затем протереть кожу ватным диском, смоченным в тонике или мицеллярной воде. Рекомендуется использовать тоник с матирующим эффектом.

    2 этап — нанесение основы. Осторожно мягкими движениями точечно наносят праймер, предпочтительно белого, бежевого или розового оттенка, который является основой для последующего макияжа.

    3 этап — цветная база. На данном этапе используем широкую кисточку или кончиком пальца точечно наносим цветные праймеры. Делается при по необходимости скрыть мелкие недостатки кожи.

    4 этап — растушёвка. Нанесённые цветные праймеры необходимо тщательно растушевать. Сделать это можно той же кистью или с помощью специального спонжа для растушёвки.

    5 этап — тональное средство. Кисточкой аккуратно наносим тональную основу или ВВ-крем. Также можно поверх нанести консилер или корректор по необходимости. Все средства мягко растушёвываем по лицу, создавая плавный переход к области шеи.

    6 этап — использование пудры. Кистью или специально предназначенным спонжем наносим на лицо пудру. Идеальным вариантом считается использование белой рассыпчатой пудры с минералами.

    На этом подготовка лица к дальнейшему макияжу считается завершённой. Позволяется использовать румяна или бронзатор в зависимости от оттенка кожи. Затем следует макияж глаз и губ, а также корректировка бровей.

    Топ 5 лучших основ под макияж по мнению визажистов

    По мнению профессиональных визажистов лучшая база под макияж должна маскировать незначительные дефекты кожи, увлажнять и защищать лицо. Они выделяют топ 5 качественных основ для макияжа, отвечающих всем требованиям по уходу, в зависимости от типа кожи и возраста.

    Для зрелой кожи и против морщинок идеально подойдёт гиалуроновый праймер от Libredram. Среди несомненных плюсов использования средства выделяют:

    • Выравнивание тона лица;
    • Матирующий эффект;
    • Маскировка небольших недостатков кожи;
    • Сглаживание пор и морщинок.

    Данная основа не забивает поры и довольно экономична. База сочетает в себе прекрасное качество и приемлемую стоимость, за что и стала одним из фаворитов большинства девушек.

    Лидер среди праймеров для чувствительной, проблемной и жирной кожи — известная марка Smashbox и основа Photo Finish Foundation Primer Light. Он содержит витамин С и необходимые для регулировки подкожного сала пептиды. Плюсы основы:

    • Освежающий эффект;
    • Ровный тон при нанесении;
    • Возможность использовать, как самостоятельное средство.

    Многие визажисты отдельно выделяют праймер от известного бренда Givenchy — Аctimine. Она представлена в шести вариантах, предназначенных для достижения различных эффектов. Виды и назначение основы под макияж:

    • Белый — для отбеливая с освежающим эффектом;
    • Розовый — для сияния кожи;
    • Зелёный — от покраснений;
    • Голубой — от желтых пятен;
    • Манго — для смуглой кожи;
    • Персиковый — универсальный.

    Довольно популярен профессиональный праймер от Pupa — Smoothing Foundation Primer. Внешне он напоминает тональную основу, тем не менее является отличной базой для дальнейшего макияжа. Преимущества средства:

    • Выравнивание и разглаживание морщинок;
    • Придание сияния тусклой и уставшей коже;
    • Улучшение стойкости макияжа;
    • Приятная бархатистая текстура.

    Последний в списке, но не по качеству, основа от ARTDECO — Instant Skin Perfector. Это средство идеально для молодой кожи благодаря лёгкой текстуре и консистенции. Оно включает в себя качества праймера и ВВ-крема. Плюсы использования:

    • Выравнивание тона лица;
    • Сужение пор;
    • Улучшение кожного покрова;
    • Визуальное уменьшение мимических морщин;
    • Обогащение кожи витамином Е и минералами.

    Primer Design Tutorial | Geneious Prime

    Упражнение 5: Дизайн пар праймеров для ПЦР

    В этом упражнении мы воспользуемся инструментом Primers → Design New Primers… для создания праймеров для ПЦР для амплификации части гена COX1 из генома мамонта.

    Щелкните митохондрию NC_007596 — Mammuthus primigenius (шерстистый мамонт), полный геном и найдите ген COX1. Если у вас возникли проблемы с поиском COX1, откройте вкладку Annotations and Tracks справа от средства просмотра последовательности и введите COX1 в поле фильтра.

    Выбрав аннотацию COX1, нажмите кнопку Primers и выберите Design New Primers… .

    В этом диалоговом окне вы можете указать, где вы хотите разместить праймеры, какой размер продукта ПЦР вы хотите вернуть, а также такие характеристики, как размер и температура плавления. В Task выберите Generic и установите флажок Included Region . Это указывает, где будут располагаться праймеры, поэтому должно быть установлено значение от 5,331 до 6 878 — пары оснований, которые охватывает ген COX1.Если есть определенная часть гена, которую вы хотите амплифицировать в ПЦР, установите это в Target Region. В этом примере у нас нет конкретной области COX1, которую мы хотим амплифицировать, но мы хотим, чтобы наши продукты ПЦР имели длину менее 300 п.н., чтобы праймеры работали с деградированной ДНК. Поэтому снимите отметку с поля Target Region и установите размер продукта от 200 до 300 bp с оптимальным размером 250 bp . Установите Число пар для создания равным 1.

    В разделе «Расчет Tm » приведены подробные сведения о формуле, используемой для расчета точки плавления олигонуклеотидов.Вы можете оставить это значение по умолчанию.

    Разверните раздел Характеристики . Здесь вы можете установить требуемые свойства праймеров, такие как длина праймера, оптимальная температура плавления (Tm) и штрафы для шпилек и праймеров-димеров. Для многих приложений настройки по умолчанию будут работать нормально, но вам может потребоваться отрегулировать их, если подходящие праймеры с настройками по умолчанию не найдены, например, если у вас есть особенно богатая целевая последовательность GC или AT или необходимость в более длинных праймерах.Для праймеров, которые мы здесь разрабатываем, мы можем использовать значения по умолчанию для большинства этих параметров, за исключением Max Tm Difference . Установите значение 2, чтобы ограничить разницу Tm между праймерами F и R и гарантировать, что они будут работать в одной реакции ПЦР.

    Окно «Новые праймеры вашего дизайна» должно теперь выглядеть следующим образом:

    Щелкните OK , и Geneious обновит последовательность с помощью подходящих праймеров, отображаемых в виде аннотаций. Выберите аннотацию COX1 и увеличьте ее, используя кнопку масштабирования справа от средства просмотра последовательности.Теперь вы должны увидеть аннотации праймеров, названные по базовому номеру, с которого они начинаются (если вы их не видите, убедитесь, что вы удалили COX1 из поля фильтра на вкладке «Аннотации и треки»). Щелкните Save , чтобы сохранить аннотации праймеров в последовательности.

    Наведите указатель мыши на аннотацию праймера, и вы увидите всплывающую подсказку, содержащую характеристики праймера и продукта для ПЦР. Из этого видно, что эти праймеры должны амплифицировать продукт длиной 250 п.н. и что Tm для обоих праймеров составляет 60 ° C.

    Щелкните аннотацию каждого праймера, чтобы выбрать его, затем нажмите Extract , чтобы извлечь праймеры в таблицу документа. Дайте букварам понятные имена — например, «Мамонт COX1_F» и «Мамонт COX1_R». Затем они будут доступны для использования в других функциях Geneious.

    Руководство по выбору праймеров

    : хорошие праймеры, важные для ПЦР и автоматического секвенирования

    Синтез ДНК

    — это производство коротких одноцепочечных молекул ДНК (называемых праймерами или олигонуклеотидами), часто используемых в полимеразной цепной реакции (ПЦР) и амплификации ДНК для приложений секвенирования по Сэнгеру.Область амплификации ДНК определяется точным совпадением праймера с его дополнительными основаниями на данной цепи ДНК. Последовательности праймеров определяются на основе известной последовательности, поскольку должно быть совпадение с областью ДНК, подлежащей амплификации.

    Для амплификации

    PCR требуется 2 праймера, которые определяют область последовательности, амплифицированной в прямом и обратном направлении. Прямой праймер создается вдоль одной нити в направлении обратного праймера. Точно так же обратный праймер конструируется из дополнительной цепи.ПЦР — это экспоненциальная амплификация, при которой вновь сгенерированный фрагмент ПЦР из одного цикла также действует как матрица для следующего цикла (рис. 1А).

    Амплификация ДНК для секвенирования по Сэнгеру отличается от ПЦР тем, что используется один праймер. Амплификация — это воспроизведение одной нити с использованием дополнения из исходной нити. Вновь созданные фрагменты ПЦР являются одноцепочечными и не содержат дополнительных цепей, которые могли бы выступать в качестве матрицы для дополнительной амплификации (рис. 1В).

    Различия в амплификации между ПЦР и секвенированием по Сэнгеру обсуждались ранее (сравнение амплификации секвенирования по Сэнгеру с базовой ПЦР).

    Простое конструирование последовательности праймера на основе известной последовательности не гарантирует, что праймер отожжется в желаемой области и инициирует амплификацию. Грунтовка должна быть разработана в соответствии с набором заданных стандартов, повышающих шансы на успех. Руководства по созданию праймеров, используемых в ПЦР и секвенировании, довольно похожи.Праймеры сконструированы в направлении от 5 ’к 3’, чтобы дополнять направление амплификации.

    Для тех, кто использует ПЦР и секвенирование по Сэнгеру в повседневных задачах, разработка праймеров может показаться вчерашней новостью. Однако мы по-прежнему считаем, что обзор хороших руководств по созданию праймеров полезен для любого исследователя, занимающегося генетическими исследованиями.

    Руководство по проектированию грунтовки

    G1. Длина грунтовки должна быть в пределах от 18 до 22 оснований. Праймеры с количеством оснований менее 18 будут иметь низкую температуру плавления (значения Tm) и могут не отжигаться с шаблоном.Существует некоторая гибкость в разработке праймеров длиной более 18 оснований. Более длинные праймеры часто конструируют из областей матрицы, которые богаты AT и нуждаются в дополнительных основаниях для увеличения значения Tm.

    G2. Грунтовка должна иметь содержание GC от 50% до 55%. Это эквивалент 9 или 10 оснований GC, включенных в праймер из 18 оснований. Иногда в шаблоне есть области, содержащие AT-код, что не позволяет выполнить это правило. В таких случаях рекомендуется создать грунтовку длиной более 18 баз.

    G3. Праймеры должны иметь фиксатор GC на 3-м конце. GC-lock разработан, когда 2 из последних 3 оснований являются G или C. Основание 3 ’всегда должно быть G или C.

    G4. Температура плавления любой хорошей грунтовки должна находиться в диапазоне от 50 0 ° C до 55 0 ° C. Однако рекомендации, особенно касающиеся значения Tm, имеют некоторую гибкость. Температуры плавления напрямую связаны с температурой отжига цикла ПЦР. Слишком низкие значения Tm могут плохо отжигаться во время ПЦР.Высокие значения могут быть слишком жесткими, что затрудняет поиск правильного места отжига на шаблоне.

    G5. Грунтовка не должна включать полиосновные области. Это когда 4 и более баз подряд совпадают. Эти рекомендации помогают предотвратить возможное соскальзывание, при котором праймер смещается из отожженного положения.

    G6. Следует избегать использования четырех или более оснований, дополняющих любое направление грунтовки. Это предотвращает отжиг праймера с самим собой и образование того, что называется димером праймера.Праймеры-димеры обладают способностью амплифицировать сам праймер, вызывая короткую вторичную последовательность.

    Особые рекомендации по ПЦР

    G7. Прямой и обратный праймеры, используемые в ПЦР-амплификации, должны иметь одинаковые температуры плавления (+/- 2 O C). Это допускает разницу в общей температуре плавления в 4 0 ° C. Исследователи, участвующие в использовании ПЦР-амплификации, будут использовать значения Tm праймеров, чтобы оптимизировать циклы ПЦР. Сходные значения Tm для прямого и обратного праймеров помогают усилиям по оптимизации.Приложения мультиплексной ПЦР с использованием нескольких пар праймеров должны иметь одинаковые значения Tm. Широкий диапазон температур плавления праймера затрудняет оптимизацию ПЦР.

    G8. Прямой и обратный праймеры не должны иметь области 4 или более оснований, которые дополняют друг друга. Так же, как праймер, используемый при секвенировании по Сэнгеру, прямой и обратный праймеры, используемые в ПЦР, могут отжигаться друг с другом и образовывать димеры праймеров.

    G9. Значения Tm для праймеров с хвостовиками должны включать хвост при расчете температуры плавления.Да, температуры плавления будут выше, чем 55 O C. Однако дополнительные основания в хвосте добавятся к амплифицированному фрагменту ПЦР и станут частью сайта праймирования. Хвостатые праймеры часто используются для добавления сайтов рестрикции к амплифицированному продукту.

    Дизайн праймера — важный аспект, относящийся ко многим формам ПЦР, включая базовую ПЦР, анализ фрагментов, количественный анализ и секвенирование по Сэнгеру. Ниже приведена ссылка, которая предлагает бесплатное программное обеспечение для разработки праймеров…

    http: // frodo.wi.mit.edu/

    Мы приветствуем любые дополнительные рекомендации или комментарии, которые могут быть полезны как опытным исследователям, так и тем, кто плохо знаком с дизайном праймеров.

    Пожалуйста, перейдите сюда, если вы хотите загрузить

    перепечатка статьи в формате pdf

    Нравится:

    Нравится Загрузка …

    Связанные

    Советы по эффективному процессу

    Праймеры

    необходимы для инициирования амплификации ДНК, будь то в целях обнаружения, клонирования или секвенирования.Таким образом, очень важно понимать, как успешно создавать праймеры. Вот четыре совета по эффективному дизайну грунтовки и управлению грунтовкой.

    Понимание основных правил проектирования грунтовки

    Разработанный вами праймер влияет на весь процесс амплификации ДНК. ДНК-полимеразы, ферменты, катализирующие репликацию ДНК, могут инициировать процесс репликации только путем добавления нуклеотидов к праймерам. Чтобы получить желаемую последовательность ДНК, вы должны начать с правильного праймера.Таким образом, для успешной амплификации ДНК необходим правильный дизайн праймера. Вот 14 основных рекомендаций по созданию праймеров:

    • Грунтовки всегда указываются от 5 до 3 футов, слева направо. Убедитесь, что ваши праймеры разработаны и заказаны в правильной ориентации.
    • Праймеры для ПЦР и секвенирования должны иметь длину от 18 до 25 нуклеотидов.
    • Праймеры для ПЦР и секвенирования должны иметь содержание GC от 40 до 60%, причем 3 ‘праймера заканчивается на C или G, чтобы способствовать связыванию.
    • 3′-конец праймера должен точно совпадать с ДНК-матрицей, потому что удлинение ДНК-полимеразой во время ПЦР зависит от хорошего совпадения на 3′-конце.
    • Убедитесь, что на последних 5 основаниях на 3′-конце грунтовки есть не менее 2 оснований G или C (зажим GC). Пары оснований G-C имеют более прочную связь, чем пары оснований A-T (3 водородные связи против 2).
    • Если сайт рестрикции был добавлен на конец праймера, обычно 5-6 нуклеотидов добавляются к 5 ’сайту рестрикционного фермента (также известному как« лидерная последовательность ») в праймере, чтобы обеспечить эффективное разрезание.
    • Старайтесь избегать запусков из 4 или более одного основания или динуклеотидных повторов (например, ACCCC или ATATATAT), так как это может привести к ошибочному запуску праймера.
    • Избегайте участков вторичной структуры; а именно гомологию внутри праймера (более 3 оснований, которые дополняют праймер) или гомологию между праймерами (прямой и обратный праймеры, имеющие комплементарные последовательности). Эти обстоятельства могут привести к самодимерам / шпилькам или димерам праймеров вместо отжига с желаемыми последовательностями ДНК. Таким образом обеспечивается сбалансированное распределение доменов с богатым GC и AT.Такие инструменты, как IDT Oligo Analyzer, могут помочь вам обнаружить вторичную структуру.
    • Как правило, значение ΔG для анализа димеров должно составлять от 0 до -9 ккал / моль для оптимального проектирования. Более отрицательные значения могут отрицательно повлиять на реакции ПЦР.
    • Для шпильки температура плавления (Tm) шпильки должна быть ниже температуры отжига для реакции; в среднем она должна находиться в диапазоне от 55 ° C до 65 ° C. Tm для самой прочной шпильки должна быть не менее 50 ° C и ниже температуры отжига.Если Tm вашего праймера очень низкая, попробуйте найти последовательность с большим содержанием GC или немного увеличьте длину праймера.
    • Пары праймеров
    • должны иметь одинаковую температуру плавления с максимальной разницей в 5 ° C и не должны дополнять друг друга.
    • Если вы используете праймеры для мутагенеза, постарайтесь расположить несоответствующие основания ближе к середине праймера.
    • Проверьте специфичность ваших праймеров, чтобы они не связывались с другими геномными областями, с помощью NCBI Primer BLAST или UCSC in-silico PCR.
    • Чтобы проверить Tm, попробуйте реакцию ПЦР в градиенте температуры отжига, чтобы найти оптимальную Tm в соответствии с вашим праймером и ферментом.

    Используйте правильные инструменты

    На платформе Genome Compiler есть много полезных инструментов, которые позволяют уникальным образом разрабатывать праймеры в соответствии с вашими конкретными потребностями. Благодаря встроенным в программное обеспечение алгоритмам Primer3, возможности варьируются от автоматического конструирования праймеров для обнаружения, клонирования праймеров и праймеров для скорейшего секвенирования до адаптации дизайна ваших собственных праймеров с помощью функции ручного создания праймеров Genome Compiler.Кроме того, Genome Compiler имеет пошаговых мастеров, помогающих с дизайном праймеров и олигонуклеотидов для лигирования рестрикции и сборки Гибсона. На протяжении всего процесса проектирования Genome Compiler также будет компилировать любые ошибки проектирования, такие как слишком высокое или слишком низкое содержание GC, или нежелательная Tm и т. Д., С прямым подключением к олигоанализатору IDT для проверки образования гетеро / гомодимеров. Использование этих полезных инструментов упростит процесс разработки праймеров и снизит риск ошибок.

    Организация — это ключ!

    После того, как вы спроектировали свои грунтовки, важно правильно их хранить, чтобы использовать их наилучшим образом.Лучше всего хранить праймеры в библиотеках праймеров, новой функции Genome Compiler. Эта новая функция позволяет:

    • Импортируйте праймеры, сохраненные в виде файлов на вашем компьютере, в библиотеку праймеров программы.
    • Найдите в библиотеках ранее разработанные праймеры, которые будут отжигаться с вашей текущей последовательностью, а затем «присоединить» их.
    • Создайте в программе новые праймеры и сохраните их в своей библиотеке для дальнейшего использования.

    Таким образом, сохранив все свои праймеры в библиотеке, вы избежите ненужного изменения дизайна и повторного заказа праймеров, сэкономив время и деньги.Библиотеки праймеров делают лабораторию более организованной и, следовательно, более эффективной.

    Используйте возможности совместного использования

    Благодаря функции библиотеки праймеров Genome Compiler не только все ваши ранее созданные праймеры сохраняются и легко доступны, они также могут быть переданы другим пользователям. Целыми папками библиотеки праймеров можно удобно поделиться с коллегами в вашей лаборатории или где-либо еще, просто введя их электронные письма с помощью функции «Совместное использование». Кроме того, вы можете выбрать, предоставлять ли права на редактирование или только на чтение.Все общие праймеры будут доступны как вам, так и вашим коллегам в любое время, а изменения, внесенные кем-либо, можно отслеживать. Эта функция делает сотрудничество невероятно простым, поощряя партнерство и совместные инновации.

    Хороший дизайн праймеров незаменим для хорошего эксперимента, поэтому помните об этом совете во время следующего проекта генетических исследований. Дополнительная информация о дизайне праймеров и функциях библиотеки праймеров в Genome Compiler доступна в нашем руководстве пользователя.

    Рэйчел Люстбейдер

    Последовательности праймеров PowerPlex 16

    Национальный институт стандартов и технологий
    • ДОМ
    • ОБНОВЛЕНИЯ
    • ИНФОРМАЦИЯ
      • Назначение
      • STRBase Paper (PDF)
      • Публикации и презентации
        • Публикации
          • 2018
          • 2017
          • 2016
          • 2015
          • 2014
          • 2013
          • 2012
          • 2011
          • 2010
          • 2009
          • 2008
          • 2007
          • 2006
          • 2005
          • 2004
          • 2003
          • 2002
          • 2001
          • 2000
        • Презентации
          • 2018
          • 2017
          • 2016
          • 2015
          • 2014
          • 2013
          • 2012
          • 2011
          • 2010
          • 2009
          • 2008
          • 2007
          • 2006
          • 2005
          • 2004
          • 2003
          • 2002
          • 2001
          • 2000
      • Проекты, финансируемые NIJ
      • Учебные материалы
      • Связанные веб-сайты
        • Организации
        • Журналы
        • Институты
        • Коммерческий
        • Лаборатории генетической генеалогии
        • Лаборатории тестирования родителей
        • Юридические сайты / Судебная ДНК
        • Другое
      • Глоссарий терминов
    • STR человека
      • STRs 101
      • FBI CODIS / Core STRs
      • Все основные STR
      • STR Информационные бюллетени
      • Комплекты Multiplex STR
      • Ссылки последовательностей STR
      • Отчеты по всем вариантам
      • Трехаллельные узоры
      • Частота мутаций
      • Опубликованные праймеры для ПЦР
      • STRs Y-хромосомы
      • Низкоматричная ДНК
      • Интерпретация смеси
      • Анализ родства
      • МиниСТР
      • Нулевые аллели
      • STR Номер ссылки
    • Маркеры прочие
      • Амелогенин
      • Sex-Typing
      • Криминалистические SNP
      • Митохондрии (мтДНК)
      • Cat STR
      • Собака STR
      • КРС STR
      • Лошадь STR
    • ресурса
      • Авторы
      • Учебные материалы
      • STR Аллельное секвенирование
      • Данные о населении NIST
      • Прочие данные о населении
      • Программное обеспечение NIST
        • AutoDimer
        • Multiplex_QA
        • смесьSTR
        • Virtual MixtureMaker
        • STR_ConvertFormats
        • STR_MatchSamples
        • STR_AlleleFreq
        • STR_Genotype

    Праймеры и условия для ПЦР

    Опубликованные праймеры для ПЦР для амплификации STR-локусов


    Полимеразная цепная реакция (ПЦР) основана на связывании характеристики олигонуклеотидных праймеров, используемых для определения целевая область ДНК.Часто требуется много усилий разработать праймеры, которые специфически связываются с областью представляющих интерес и которые не образуют димеры праймеров (т. е. связываются с самих себя). Поскольку положения праймеров определяют размер Для продуктов ПЦР праймеры иногда модифицируют при получении мультиплексов STR. Разные группы часто конструировали уникальные праймеры для одних и тех же STR-локусов. В информационных бюллетенях STR это учитывается учет, перечислив каждый набор праймеров с последующей ПЦР размеры изделия.Здесь мы разделили опубликованные праймеры для ПЦР. на две группы.

    Британская служба судебной медицины Грунтовки

    Caskey / Promega / Другие грунтовки

    Коммерческий набор последовательностей праймеров

    Комплекты Promega PowerPlex 1.1 и 1.2, Комплект PowerPlex 16

    Прикладные биосистемы считает свои последовательности праймеров собственностью и не публиковала их

    ВЕРНУТЬСЯ НА ГЛАВНУЮ

    Присылайте комментарии или предложения по этой базе данных команде STRBase по адресу strbase @ nist.губ.


    Заявление об ограничении ответственности

    Мы приложили и будем продолжать прилагать большие усилия для обеспечения точности и полноты данных, включенных в эту базу данных STR. Информация будет добавляться время от времени, чтобы поддерживать этот сайт в актуальном состоянии. Национальный институт стандартов и технологий (NIST) никоим образом не несет ответственности за информацию, предоставляемую через этот сайт, включая гиперссылки на коммерческие источники материалов. Некоторые коммерческие поставщики указаны на этом веб-сайте, чтобы помочь сообществу специалистов по типированию ДНК.Ни в коем случае такая идентификация не подразумевает рекомендацию или одобрение NIST и не подразумевает, что идентифицированный материал, инструмент или оборудование обязательно являются лучшими из доступных для тестирования личности человека.

    Все пользователи соглашаются с тем, что любой доступ и использование этого веб-сайта и любых сайтов, связанных с этим сайтом, и их содержание осуществляется на их страх и риск. Ни NIST, ни веб-мастер интернет-базы данных STR DNA не несут ответственности за содержание страниц за пределами этого веб-сайта.

    Наш веб-сайт содержит ссылки на различные другие федеральные агентства и частные организации. После того, как вы перейдете по ссылке на другой сайт, вы подпадете под действие политики конфиденциальности нового сайта. Всегда полезно прочитать Политику конфиденциальности любого сайта, который вы посещаете. Заявление о конфиденциальности NIST см. В разделе.

    PrimerX Documentation

    I. Содержание

    1. Содержание
    2. Введение
    3. Дизайн грунтовки
      1. Дизайн праймера на основе последовательности ДНК
      2. Дизайн праймера
      3. на основе последовательности белка
      4. Вывод считывания
    4. Описание грунтовки
    5. О разработчиках
    6. О хосте
    7. Информация об авторских правах
    8. Заявление об ограничении ответственности

    II.Введение

    PrimerX — это веб-программа, предназначенная для автоматизации дизайна мутагенных праймеров ПЦР для сайт-направленного мутагенеза.

    Сайт-направленный мутагенез, иногда называемый сайт-специфическим мутагенезом, представляет собой основанный на ПЦР метод, посредством которого специфические мутации вводятся в последовательность ДНК. Это достигается путем ПЦР-амплификации с использованием мутагенных олигонуклеотидных праймеров, которые уже содержат желаемую мутацию. Поскольку мутагенные праймеры включаются в каждую новую копию матричной ДНК во время ПЦР, результатом является амплификация новой мутированной последовательности ДНК.Однако, поскольку, в отличие от праймеров в обычной ПЦР, мутагенные праймеры не идеально отжигаются с матричной ДНК, необходимо учитывать особенности их конструкции. PrimerX разработан, чтобы помочь вам с этой задачей.

    Для того, чтобы PrimerX генерировал мутагенные праймеры, необходимы две последовательности. Первый — это часть неизмененной матричной последовательности ДНК, содержащая целевой сайт для мутации. Вторая — это соответствующая последовательность ДНК или белка, которую вы хотите создать, уже содержащую желаемую мутацию.На основе этих последовательностей PrimerX сгенерирует список всех возможных пар праймеров, которые кодируют желаемую мутацию, и соблюдает набор ограничений, которые вы предоставляете.

    PrimerX может генерировать праймеры на основе двух типов данных о последовательности. Вы можете выбрать прямой ввод мутированной последовательности ДНК, включая вставки, делеции или замены желаемых пар оснований. Это рекомендуется для создания небольших базовых замен, вставок и удалений. Но настоящая сила PrimerX заключается в его способности генерировать праймеры на основе мутированной белковой последовательности.Используя эту опцию, вы можете вносить изменения в последовательность белка, кодируемую введенным шаблоном ДНК. Затем PrimerX генерирует праймеры на основе всех возможных последовательностей ДНК, которые могут кодировать желаемое изменение с учетом вырожденности кодонов. Это рекомендуется для генерации мутаций в генах, особенно когда намереваются заменить одну аминокислоту на другую или вставить стоп-кодон.

    PrimerX также позволяет задавать спецификации для прямого и обратного праймеров отдельно, что позволяет легко конструировать пары праймеров для очень широкого спектра протоколов.Вам также предоставляется контроль над такими переменными, как содержание GC, температура плавления, длина областей, фланкирующих мутацию, и общую длину праймера. Кроме того, он может автоматически генерировать праймеры для трех коммерчески доступных протоколов мутагенеза: QuikChange ™ и ExSite ™ Site-Directed Mutagenesis Kits от Stratagene®; и система сайт-направленного мутагенеза GeneTailor ™ от Invitrogen ™.

    Наконец, PrimerX включает простое приложение, которое может характеризовать созданные вами мутагенные праймеры.С помощью этого инструмента все, что вам нужно сделать, это ввести последовательность мутагенного праймера и количество несовпадающих оснований, и PrimerX сообщит его длину, температуру плавления, содержание GC и т. Д.

    К началу


    III. Праймер Дизайн

    A. Дизайн праймера на основе последовательности ДНК

    Шаг 1:

    На этом этапе вы просто должны ввести часть последовательности ДНК-шаблона. PrimerX требует только, чтобы эта последовательность содержала целевой сайт для мутации, фланкированный последовательностью матрицы достаточной длины.В большинстве случаев 50 п.н. с целевым сайтом в центре более чем достаточно.

    У вас есть два варианта ввода последовательности ДНК-шаблона. Во-первых, вы можете загрузить файл, нажав «Обзор», чтобы открыть меню загрузки файла. Это позволяет вам найти и выбрать текстовый файл, содержащий последовательность ДНК-шаблона. Во-вторых, вы можете напрямую ввести или вставить последовательность шаблонов в текстовую область под областью загрузки файлов. В обоих случаях вы можете ввести необработанную последовательность ДНК или последовательность в формате Fasta.

    PrimerX нечувствителен к регистру; ввод «GCATGAG» аналогичен вводу «gcatgag». Кроме того, хотя PrimerX может принимать последовательности ДНК в формате Fasta и автоматически удаляет однострочный заголовок, начинающийся с «>», он также удаляет последовательность ДНК любого символа, который не принадлежит. Другими словами, любая буква, отличная от C, G, A или T в вашей последовательности ДНК-шаблона, будет автоматически удалена, как и любое число, пробел или специальный символ. Это означает, что вы можете вставлять последовательности в других форматах, таких как часть последовательности файла GenBank (после строки ORIGIN), и PrimerX автоматически удалит числа и пробелы.

    Шаг 2:

    Здесь вас попросят ввести простой код, идентифицирующий желаемую мутацию. Этот шаг не является обязательным; если вы пропустите этот шаг, вы можете позже вручную ввести желаемую мутацию в последовательность шаблона. Однако это может быть утомительно, особенно если вы ввели длинную последовательность. Ввод простого кода мутации на этом этапе может сэкономить вам немного хлопот.

    Код мутации, который вы должны ввести, представляет собой упрощенный вариант номенклатуры, предложенной ден Данненом и Антонаракисом для описания вариаций последовательностей на уровне белка (Hum Genet 109 (1): 121-124, 2001).Мы разработали этот вариант отчасти потому, что любому новичку в PrimerX будет легко изучить его.

    Код мутации состоит из последовательности одной или нескольких букв, числа и, наконец, одной или нескольких дополнительных букв. Первая часть обозначает базу (и), которую вы хотите изменить, путем замены на другую базу, удаления или вставки другой базы в эту позицию, чтобы она была перемещена в более позднюю позицию. Число обозначает числовую позицию этой базы в предоставленной вами последовательности шаблонов.Последняя последовательность букв обозначает изменение, которое вы хотите внести. Если вы желаете замены, она должна состоять из базовых элементов, которые вы хотите заменить исходными. Если вы хотите произвести удаление, это должны быть буквы «del». Если требуется вставка, она должна состоять из букв «ins», за которыми следует основание (и), которое вы хотите вставить. Примеры приведены ниже.

    Тип мутации Код мутации Описание
    Замена C15G Заменяет букву «С» в позиции 15 на букву «G».
    CG15AT Заменяет «CG» в позициях 15–16 на «AT».
    Удаление C15del Удаляет букву «C» в позиции 15.
    CG15del Удаляет «CG» в позициях 15-16.
    Вставка C15insG Вставляет букву «G» в позицию 15, сдвигая «C» в позицию 16.
    CG15insAT Вставляет «AT» в позиции 15-16, перемещая «CG» в позиции 17-18.

    Код мутации нечувствителен к регистру, не имеет значения, вводятся ли основания или аффиксы «del» или «ins» в верхнем или нижнем регистре. Однако мы рекомендуем использовать формат, показанный в примере выше, для облегчения интерпретации. Если вы допустили ошибку при вводе кода мутации и он не может быть интерпретирован программой, сообщение об ошибке появится позже при идентификации ошибки.

    Шаг 3:

    На этом этапе вас просят ввести протокол мутагенеза, для которого вы хотите разработать мутагенные праймеры. Во всех случаях будут предоставлены параметры по умолчанию, однако вы можете изменить их по своему усмотрению. Возможны следующие варианты:

    Определяется пользователем (базовый)
    Выбор этого позволит вам вручную указать простые спецификации, описывающие тип грунтовки, который вам нужен. Параметры, которые вам будет предложено ввести, будет легко понять, однако вы не сможете определить прямой и обратный праймеры отдельно.Любая пара праймеров, созданная таким образом, будет либо комплементарной, либо перекрывающейся и симметричной.
    Определяется пользователем (расширенный)
    Эта опция также позволит вам создать желаемую пару праймеров. Вы сможете установить параметры для вашего прямого и обратного праймеров отдельно. Кроме того, вы сможете установить расстояние обратного праймера от мутации; обратный праймер не обязательно будет содержать мутацию.
    Набор для сайт-направленного мутагенеза QuikChange ™ от Stratagene®
    Параметры по умолчанию, соответствующие этому протоколу, будут введены за вас.Праймеры будут дополнительными, с мутацией в центре.
    Набор для сайт-направленного мутагенеза ExSite ™ от Stratagene®
    Параметры по умолчанию, соответствующие этому протоколу, будут введены за вас. Праймеры не будут перекрываться; мутация будет на 5′-конце прямого праймера.
    Система сайт-направленного мутагенеза GeneTailor ™ от Invitrogen ™
    Параметры по умолчанию, соответствующие этому протоколу, будут введены за вас.Праймеры будут перекрываться, при этом мутация будет происходить только в прямом праймере.

    Шаг 4:

    Ваша задача на этом шаге будет зависеть от того, решили ли вы ввести код мутации на шаге 2. Если да, то вам просто нужно будет проверить, является ли мутированная последовательность, сгенерированная программой на основе вашего кода мутации. что вы желаете. Если это действительно ваша желаемая последовательность, вам нужно только перейти к шагу 5. Но если последовательность, сгенерированная программой, неверна, нажмите кнопку «Назад» в вашем браузере и повторно введите код мутации.

    Однако, если вы пропустили шаг 2, просто измените последовательность шаблонов в текстовой области на ту, которую вы хотите создать. Например, если вы хотите заменить «..GCGTGCG ..» на «..GCGAGCG ..», просто удалите букву T и введите вместо нее букву A. Однако при вводе мутации следует помнить о нескольких вещах:

    • Вы должны ввести только желаемую мутацию. Больше ничего не меняйте, иначе PrimerX решит, что это часть желаемой мутации, и может столкнуться с вычислительными ошибками.
    • Введите только вставки, удаления, замены ИЛИ; не вводите комбинации из трех. Например, не вставляйте G, а затем заменяйте соседний C другим G. (например, «..CCC ..» -> «..CGGC ..») Поскольку база была добавлена, PrimerX интерпретирует это как вставка только одной базы и соответствующие вычисления.
    • Не вводите мутацию более чем в один сайт в последовательности. Например, не производите замену в одном сайте, а затем другую замену пятью парами оснований ниже по течению.PrimerX будет интерпретировать всю последовательность между ними как часть мутации.

    В некоторых случаях в текстовой области для этого шага может отображаться сообщение, а не последовательность ДНК. В сообщении будет указана ошибка, которую вы могли сделать на предыдущем шаге. Затем вам просто нужно нажать кнопку «Назад» в браузере и исправить ошибку.

    Шаг 5:

    На этом последнем этапе вас просят ввести набор параметров, описывающих желаемую пару праймеров.Список отображаемых параметров будет зависеть от протокола, который вы выбрали на шаге 3. Например, если вы выбрали «Пользовательский (базовый)», вы увидите здесь один список параметров, позволяющий вам определять прямой и обратный праймеры вместе. . Но если вы выберете «Указанный пользователем (расширенный)», вы увидите здесь два отдельных списка: один для настройки прямого праймера, а другой — для настройки обратного праймера. Если вы выбрали один из трех коммерческих протоколов, значения по умолчанию, отображаемые здесь, будут теми, которые рекомендуются для желаемого протокола.

    Большинство этих параметров требуют от вас определения диапазона допустимых значений путем назначения минимума и максимума. Ниже приводится список параметров:

    • Температура плавления (° C) — Это относится к температуре плавления (Tm), допустимой для вашей реакции ПЦР. Температура плавления рассчитывается по следующей формуле:

      Tm = 81,5 + 0,41 (% GC) — 675 / N -% несоответствия
      где N = длина праймера в парах оснований,
      а значения для% GC и% несоответствия — целые числа.

      Или для вставок и удалений:

      Tm = 81,5 + 0,41 (% GC) — 675 / N
      где N не включает вставляемые / удаляемые базы.

    • Содержание GC (%) — Это относится к допустимому содержанию GC в ваших праймерах, рассчитанному в процентах по всей длине праймера. Если это значение не имеет значения, просто установите диапазон от 0 до 100.
    • Длина праймера (п.о.) — Это относится к общей длине праймера, включая желаемую мутацию.
    • 5 ‘фланкирующая область (п.о.) — Это относится к длине части вашего праймера, которая находится слева от мутированной области, когда последовательность читается от 5′ до 3 ‘.
    • 3 ‘фланкирующая область (п.о.) — Это относится к длине части вашего праймера, которая находится справа от мутированной области, когда последовательность читается от 5′ до 3 ‘.
    • Праймеры оканчиваются на G или C. — Проверка этого гарантирует, что ваши праймеры имеют зажим GC, что просто означает, что как прямой, так и обратный праймеры имеют по крайней мере один G или C на 3 ‘конце.
    • Прямой / обратный праймер оканчивается на G или C. — Проверка любого из них гарантирует, что соответствующий праймер будет иметь по крайней мере один G или C на 3′-конце во всех созданных парах праймеров.
    • Сайт мутации в центре праймера. — Проверка этого гарантирует, что мутированная область находится в центре праймера. В PrimerX это означает, что длины 5 ‘и 3’ фланкирующих областей различаются не более чем на одну пару оснований.
    • Расстояние от мутации — Это относится к расстоянию в парах оснований от первой мутированной пары оснований в прямом праймере до 5′-конца обратного праймера, когда две последовательности выровнены по их комплементарным областям.Используйте отрицательные значения для обозначения восходящего направления (слева) от мутированной пары оснований и положительные значения для нисходящего направления (справа).
    • Комплементарные праймеры — Когда этот параметр выбран, значения, которые вы ввели для длины фланкирующей области 5 ‘и 3’, будут применяться только к прямому праймеру. Сгенерированные обратные праймеры затем будут представлены просто как обратный комплемент их соответствующих прямых праймеров.
    • Перекрывающиеся праймеры — Когда этот параметр выбран, значения, которые вы ввели для длины фланкирующей области 5 ‘и 3’, будут применяться как к прямым, так и к обратным праймерам.В каждой паре праймеров два праймера будут иметь одинаковую длину фланкирующей области 5 ‘и 3’. Содержание ГХ, температура плавления и местоположение будут сообщаться отдельно для каждого праймера.

    При установке этих ограничений следует учитывать некоторые моменты. В частности, следует позаботиться о том, чтобы не создавать противоречий в своих ценностях. Например, минимальное значение не должно быть больше соответствующего максимального значения. Кроме того, при выборе «Сайт мутации в центре праймера» диапазоны, которые вы устанавливаете для 5 ‘и 3’ фланкирующих областей, должны перекрываться (или, что еще лучше, быть идентичными).В противном случае было бы невозможно получить праймеры. Ввод этих противоречий приведет к появлению сообщения об ошибке с указанием проблемы.

    Вам также следует иметь в виду, что когда «Сайт мутации в центре праймера» — , а не выбран, диапазоны, которые вы определяете для длин 5 ‘и 3’ фланкирующих областей, должны быть уже, чем значения по умолчанию. Это связано с тем, что длины фланкирующих областей больше не ограничиваются приблизительно равными. Установка широких диапазонов для обоих из них приведет к тому, что PrimerX будет вычислять, возможно, сотни потенциальных праймеров, замедляя работу сервера и, вероятно, выводя слишком много результатов, чтобы быть полезными.Максимального диапазона в 5 п.н. для каждого должно быть достаточно.

    К началу


    B. Дизайн праймера на основе последовательности белка

    Шаг 1:

    На этом этапе вы должны ввести часть последовательности ДНК-шаблона, которая кодирует целевые аминокислоты, подлежащие мутации. Целевой сайт должен быть фланкирован с обеих сторон последовательностью матрицы достаточной длины. Кроме того, последовательность ДНК, которую вы вводите, должна происходить от смысловой цепи и начинаться в правильной рамке считывания, чтобы программа могла правильно ее транслировать.Обычно достаточно ввода около 50 п.н.

    Как упоминалось ранее, у вас есть два варианта ввода последовательности ДНК-шаблона. Во-первых, вы можете загрузить файл, нажав «Обзор», чтобы открыть меню загрузки файла. Это позволяет вам найти и выбрать текстовый файл, содержащий последовательность ДНК-шаблона. Во-вторых, вы можете напрямую ввести или вставить последовательность шаблонов в текстовую область под областью загрузки файлов. В обоих случаях вы можете ввести необработанную последовательность ДНК или последовательность в формате Fasta.

    PrimerX нечувствителен к регистру; ввод «GCATGAG» аналогичен вводу «gcatgag». Кроме того, хотя PrimerX может принимать последовательности ДНК в формате Fasta и автоматически удаляет однострочный заголовок, начинающийся с «>», он также удаляет последовательность ДНК любого символа, который не принадлежит. Другими словами, любая буква, отличная от C, G, A или T в вашей последовательности ДНК-шаблона, будет автоматически удалена, как и любое число, пробел или специальный символ. Это означает, что вы можете вставлять последовательности в других форматах, таких как часть последовательности файла GenBank (после строки ORIGIN), и PrimerX автоматически удалит числа и пробелы.

    Нажатие на «Перевести» должно вызвать отображение соответствующей белковой последовательности в текстовой области на шаге 2.

    Шаг 2:

    На этом этапе вам просто нужно проверить, смог ли PrimerX правильно преобразовать последовательность ДНК, которую вы ввели ранее, в соответствующую последовательность белка. Результирующая последовательность белка также должна содержать целевые аминокислоты, подлежащие мутации.

    Вот список буквенных символов для различных аминокислот.

    «А» = аланин
    «C» = цистеин
    «D» = аспарагиновая кислота
    «E» = глутаминовая кислота
    «F» = фенилаланин
    «G» = Глицин
    «H» = гистидин
    «I» = изолейцин
    «К» = лизин
    «L» = лейцин
    «M» = метионин / начало
    «N» = аспарагин
    «P» = Proline
    «Q» = глутамин
    «R» = аргинин
    «S» = серин
    «T» = треонин
    «V» = валин
    «W» = триптофан
    «Y» = тирозин
    «_» = Стоп-кодон

    Шаг 3:

    Здесь вас попросят ввести простой код, идентифицирующий желаемую мутацию.Этот шаг не является обязательным; Если вы пропустите этот шаг, вы можете позже вручную ввести желаемую мутацию в последовательность белка. Однако это может быть утомительно, особенно если вы ввели длинную последовательность. Ввод простого кода мутации на этом этапе может сэкономить вам немного хлопот.

    Код мутации, который вы должны ввести, представляет собой упрощенный вариант номенклатуры, предложенной ден Данненом и Антонаракисом для описания вариаций последовательностей на уровне белка (Hum Genet 109 (1): 121-124, 2001).Мы разработали этот вариант отчасти потому, что любому новичку в PrimerX будет легко изучить его.

    Код мутации состоит из последовательности одной или нескольких букв, числа и, наконец, одной или нескольких дополнительных букв. Первая часть обозначает аминокислоты, которые вы хотите изменить, либо путем замены другой аминокислотой, либо путем делеции, либо вставки другой аминокислоты в этом положении, чтобы она была перемещена в более позднее положение. Число обозначает числовое положение этой аминокислоты в последовательности белка.Последняя последовательность букв обозначает изменение, которое вы хотите внести. Если вы желаете замены, она должна состоять из аминокислот, которые вы хотите заменить исходной (-ыми). Если вы хотите произвести удаление, это должны быть буквы «del». Если требуется вставка, она должна состоять из букв «ins», за которыми следует аминокислота (аминокислоты), которую вы хотите вставить. Примеры приведены ниже.

    Тип мутации Код мутации Описание
    Замена E15P Заменяет «E» в позиции 15 на «P».
    EF15PQ Заменяет «EF» в позициях 15–16 на «PQ».
    Удаление E15del Удаляет букву «E» в позиции 15.
    EF15del Удаляет «EF» в позициях 15-16.
    Вставка E15insP Вставляет букву «P» в позицию 15, перемещая «E» в позицию 16.
    EF15insPQ Вставляет «PQ» в позиции 15-16, перемещая «EF» в позиции 17-18.

    Код мутации нечувствителен к регистру, не имеет значения, вводятся ли основания или аффиксы «del» или «ins» в верхнем или нижнем регистре. Однако мы рекомендуем использовать формат, показанный в примере выше, для облегчения интерпретации. Если вы допустили ошибку при вводе кода мутации и он не может быть интерпретирован программой, сообщение об ошибке появится позже при идентификации ошибки.

    Шаг 4:

    На этом этапе вас просят ввести протокол мутагенеза, для которого вы хотите разработать мутагенные праймеры. Во всех случаях будут предоставлены параметры по умолчанию, однако вы можете изменить их по своему усмотрению. Возможны следующие варианты:

    Определяется пользователем (базовый)
    Выбор этого позволит вам вручную указать простые спецификации, описывающие тип грунтовки, который вам нужен. Параметры, которые вам будет предложено ввести, будет легко понять, однако вы не сможете определить прямой и обратный праймеры отдельно.Любая пара праймеров, созданная таким образом, будет либо комплементарной, либо перекрывающейся и симметричной.
    Определяется пользователем (расширенный)
    Эта опция также позволит вам создать желаемую пару праймеров. Вы сможете установить параметры для вашего прямого и обратного праймеров отдельно. Кроме того, вы сможете установить расстояние обратного праймера от мутации; обратный праймер не обязательно будет содержать мутацию.
    Набор для сайт-направленного мутагенеза QuikChange ™ от Stratagene®
    Параметры по умолчанию, соответствующие этому протоколу, будут введены за вас.Праймеры будут дополнительными, с мутацией в центре.
    Набор для сайт-направленного мутагенеза ExSite ™ от Stratagene®
    Параметры по умолчанию, соответствующие этому протоколу, будут введены за вас. Праймеры не будут перекрываться; мутация будет на 5′-конце прямого праймера.
    Система сайт-направленного мутагенеза GeneTailor ™ от Invitrogen ™
    Параметры по умолчанию, соответствующие этому протоколу, будут введены за вас.Праймеры будут перекрываться, при этом мутация будет происходить только в прямом праймере.

    Шаг 5:

    Ваша задача на этом шаге будет зависеть от того, решили ли вы ввести код мутации на шаге 3. Если да, то вам просто нужно будет проверить, является ли мутированная последовательность, сгенерированная программой на основе вашего кода мутации. что вы желаете. Если это действительно ваша желаемая последовательность, вам нужно только перейти к шагу 6. ​​Но если последовательность, сгенерированная программой, неверна, нажмите кнопку «Назад» в вашем браузере и повторно введите код мутации.

    Однако, если вы пропустили шаг 3, просто измените последовательность шаблонов в текстовой области на ту, которую вы хотите создать. Например, если вы хотите заменить «..EFLQLMN ..» на «..EFLRLMN ..», просто удалите Q и введите R вместо него. Однако при вводе мутации следует помнить о нескольких вещах:

    • Вы должны ввести только желаемую мутацию. Больше ничего не меняйте, иначе PrimerX решит, что это часть желаемой мутации, и может столкнуться с вычислительными ошибками.
    • Введите только вставки, удаления, замены ИЛИ; не вводите комбинации из трех. Например, не вставляйте Q, а затем заменяйте соседний I другим Q (например, «..LIL ..» -> «..LQQL ..») Поскольку была добавлена ​​аминокислота, PrimerX интерпретирует это как вставка только одной базы, и соответственно произвести ее вычисления.
    • Не вводите мутацию более чем в один сайт в последовательности. Например, не делайте замену в одном сайте, а затем другую замену на расстоянии пяти аминокислот.PrimerX будет интерпретировать всю последовательность между ними как часть мутации.

    В некоторых случаях в текстовой области для этого шага может отображаться сообщение, а не последовательность белка. В сообщении будет указана ошибка, которую вы могли сделать на предыдущем шаге. Затем вам просто нужно нажать кнопку «Назад» в браузере и исправить ошибку.

    Шаг 6:

    На этом последнем этапе вас просят ввести набор параметров, описывающих желаемую пару праймеров.Список отображаемых параметров будет зависеть от протокола, который вы выбрали на шаге 3. Например, если вы выбрали «Пользовательский (базовый)», вы увидите здесь один список параметров, позволяющий вам определять прямой и обратный праймеры вместе. . Но если вы выберете «Указанный пользователем (расширенный)», вы увидите здесь два отдельных списка: один для настройки прямого праймера, а другой — для настройки обратного праймера. Если вы выбрали один из трех коммерческих протоколов, значения по умолчанию, отображаемые здесь, будут теми, которые рекомендуются для желаемого протокола.

    Большинство этих параметров требуют от вас определения диапазона допустимых значений путем назначения минимума и максимума. Ниже приводится список параметров:

    • Система экспрессии — Здесь вы можете выбрать из списка обычно используемых модельных организмов, используемых в молекулярной и клеточной биологии. Если вы выберете один из них, PrimerX будет генерировать праймеры на основе оптимального использования кодонов этим организмом. Например, если вы хотите вставить остаток глицина и выразить его в бактерии E.coli , PrimerX будет генерировать праймеры, в которых остаток глицина кодируется кодоном GGC, который является кодоном, наиболее часто используемым E. coli для кодирования глицина. Это увеличивает шансы того, что желаемая мутация будет правильно выражена организмом, с которым вы работаете.
      Если организм, с которым вы работаете, не включен в список, вы можете использовать Анализатор использования кодонов, чтобы помочь вам определить правильный кодон для использования.
    • Температура плавления (° C) — Это относится к температуре плавления (Tm), допустимой для вашей реакции ПЦР.Температура плавления рассчитывается по следующей формуле:

      Tm = 81,5 + 0,41 (% GC) — 675 / N -% несоответствия
      где N = длина праймера в парах оснований,
      а значения для% GC и% несоответствия — целые числа.

      Или для вставок и удалений:

      Tm = 81,5 + 0,41 (% GC) — 675 / N
      где N не включает вставляемые / удаляемые базы.

    • Содержание GC (%) — Это относится к допустимому содержанию GC в ваших праймерах, рассчитанному в процентах по всей длине праймера.Если это значение не имеет значения, просто установите диапазон от 0 до 100.
    • Длина праймера (п.о.) — Это относится к общей длине праймера, включая желаемую мутацию.
    • 5 ‘фланкирующая область (п.о.) — Это относится к длине части вашего праймера, которая находится слева от мутированной области, когда последовательность читается от 5′ до 3 ‘.
    • 3 ‘фланкирующая область (п.о.) — Это относится к длине части вашего праймера, которая находится справа от мутированной области, когда последовательность читается от 5′ до 3 ‘.
    • Праймеры оканчиваются на G или C. — Проверка этого гарантирует, что ваши праймеры имеют зажим GC, что просто означает, что как прямой, так и обратный праймеры имеют по крайней мере один G или C на 3 ‘конце.
    • Прямой / обратный праймер оканчивается на G или C. — Проверка любого из них гарантирует, что соответствующий праймер будет иметь по крайней мере один G или C на 3′-конце во всех созданных парах праймеров.
    • Сайт мутации в центре праймера. — Проверка этого гарантирует, что мутированная область находится в центре праймера.В PrimerX это означает, что длины 5 ‘и 3’ фланкирующих областей различаются не более чем на одну пару оснований.
    • Расстояние от мутации — Это относится к расстоянию в парах оснований от первой мутированной пары оснований в прямом праймере до 5′-конца обратного праймера, когда две последовательности выровнены по их комплементарным областям. Используйте отрицательные значения для обозначения восходящего направления (слева) от мутированной пары оснований и положительные значения для нисходящего направления (справа).
    • Комплементарные праймеры — Когда этот параметр выбран, значения, которые вы ввели для длины фланкирующей области 5 ‘и 3’, будут применяться только к прямому праймеру. Сгенерированные обратные праймеры затем будут представлены просто как обратный комплемент их соответствующих прямых праймеров.
    • Перекрывающиеся праймеры — Когда этот параметр выбран, значения, которые вы ввели для длины фланкирующей области 5 ‘и 3’, будут применяться как к прямым, так и к обратным праймерам. В каждой паре праймеров два праймера будут иметь одинаковую длину фланкирующей области 5 ‘и 3’.Содержание ГХ, температура плавления и местоположение будут сообщаться отдельно для каждого праймера.

    При установке этих ограничений следует учитывать некоторые моменты. В частности, следует позаботиться о том, чтобы не создавать противоречий в своих ценностях. Например, минимальное значение не должно быть больше соответствующего максимального значения. Кроме того, при выборе «Сайт мутации в центре праймера» диапазоны, которые вы устанавливаете для 5 ‘и 3’ фланкирующих областей, должны перекрываться (или, что еще лучше, быть идентичными).В противном случае было бы невозможно получить праймеры. Ввод этих противоречий приведет к появлению сообщения об ошибке с указанием проблемы.

    Вам также следует иметь в виду, что, когда «Сайт мутации в центре праймера» не выбран, диапазоны, которые вы определяете для длин 5 ‘и 3’ фланкирующих областей, должны быть уже, чем значения по умолчанию. Это связано с тем, что длины фланкирующих областей больше не ограничиваются приблизительно равными. Установка широких диапазонов для обоих из них приведет к тому, что PrimerX будет вычислять, возможно, сотни потенциальных праймеров, замедляя работу сервера и, вероятно, выводя слишком много результатов, чтобы быть полезными.Максимального диапазона в 5 п.н. для каждого должно быть достаточно.

    К началу


    C. Чтение вывода

    При нажатии на «Создать праймеры» PrimerX отобразит вычисленные результаты на экране. Страница результатов будет состоять из двух частей: отображение представленных вами последовательностей ДНК и список праймеров, созданных программой.

    Каждая последовательность ДНК отображается в строках по 50 п.н. Над верхней линией вы должны увидеть 4 равномерно расположенные точки («.»). Они совпадают с 10-й, 20-й, 30-й и 40-й парой оснований в каждой строке, что упрощает поиск позиций в последовательности.

    Далее следует список введенных вами параметров. Это поможет вам отслеживать несколько наборов результатов.

    Ниже вы увидите подсчет общего количества сгенерированных пар праймеров, за которым следует список этих пар праймеров. Когда выбраны «Комплементарные праймеры», каждая пара отображается как прямая последовательность и ее обратный комплемент.Когда выбрано «Перекрывающиеся праймеры» или если вы выбрали протокол, требующий, чтобы прямой и обратный праймеры создавались отдельно, праймеры отображаются антипараллельным образом с выравниванием их комплементарных участков.

    Выше и ниже каждой пары праймеров находится один или несколько символов. Если вы видите одну или несколько звездочек («*»), то введенная вами мутация является заменой или вставкой, а звездочки будут находиться непосредственно над и под замененными или вставленными основаниями. Символы «\ /» и «/ \» означают, что вы ввели удаление; они указывают на положение, в котором была удалена часть последовательности шаблона.

    Под каждой парой праймеров отображается основная информация. К ним относятся следующие:

    • GC Content — показывает процентное содержание оснований G и C в последовательности праймера.
    • Температура плавления — Это расчетная температура плавления, основанная на формуле, приведенной выше. Это только приблизительное значение и может быть неточным в реальной реакции ПЦР.
    • Длина — дает длину каждого праймера в парах оснований.
    • Местоположение — дает начальное и конечное положения в исходной (немутированной) матричной последовательности, которые соответствуют последовательности праймера.
    • 5′- и 3′-фланкирующие области — Они определяют длины областей, фланкирующих мутированный сайт в последовательности прямого праймера.
    • Прямой и обратный праймеры MW — Они дают молекулярные массы соответствующих одноцепочечных олигонуклеотидных праймеров в дальтонах, которые рассчитываются по следующей формуле:

      МВт = (313.21 x нА) + (304,20 x нТл) + (329,21 x нГс) +
      (289,19 x нКл) + 18,02 — 80,00
      где: nA = количество оснований аденина, nT = количество
      тиминовые основания и др.

      Предполагается, что 5′-конец праймера не фосфорилируется, что обычно имеет место.
    • Несоответствующие основания — Это подсчет количества пар оснований, которые были удалены, вставлены или заменены.
    • Мутация — определяет, была ли мутация делецией, вставкой или заменой.

    Если PrimerX не может сгенерировать праймеры, появится сообщение об ошибке, в котором будут содержаться рекомендации о том, что вы можете сделать для решения проблемы. Если эта или другая проблема не исчезнет, ​​напишите мне.

    К началу


    IV. Описание грунтовки

    Эта особенность PrimerX на самом деле не требует пояснений. В текстовом поле «Последовательность праймера» введите прямую последовательность созданного вами праймера. В текстовом поле с надписью «Несоответствующие базы» введите количество баз, которые были изменены по сравнению с исходной последовательностью.После этого выберите, является ли желаемая мутация заменой, вставкой или удалением. Когда вы нажимаете «Отправить», PrimerX вычислит и сообщит обратный комплемент, длину, температуру плавления, содержание GC, молекулярную массу и процент несоответствия последовательности, а также то, заканчивается ли последовательность буквой G или C.

    Эта функция была разработана, чтобы помочь вам в разработке ваших собственных мутагенных праймеров, а не для выбора пары праймеров на основе результатов, полученных в функциях дизайна праймеров.Когда мы добавляли эту функцию, у нас был протокол сайт-направленного мутагенеза QuikChange ™ компании Stratagene®. Для тех, кто использует этот протокол, вот рекомендации, рекомендованные Stratagene:

    • Грунтовки должны иметь длину от 25 до 45 оснований.
    • Температура плавления должна быть больше или равна 78 ° C согласно формуле, приведенной ранее.
    • Требуемая мутация должна находиться в середине праймера с ~ 10-15 основаниями правильной последовательности с обеих сторон.
    • Последовательность должна иметь содержание GC не менее 40% и должна оканчиваться одним или несколькими основаниями C или G.

    Наверх


    В. О разработчиках

    Карло Лапид в настоящее время учится в аспирантуре Национального института молекулярной биологии и биотехнологии (NIMBB) при университете. Филиппин, Дилиман. Он окончил со степенью бакалавра в области молекулярной биологии и биотехнологии в апреле 2003 года и в настоящее время получает степень магистра. степень в той же области. Он также является научным сотрудником Института морских наук при Филиппинском университете.Ему можно написать по электронной почте [email protected]

    Он начал писать PrimerX в качестве необходимого проекта для вводного курса биоинформатики. Однако ему очень понравилось работать над проектом. что он решил продолжить его обновление и улучшение.

    Иминь Гао — студент третьего курса факультета компьютерных наук Филиппинского университета в Дилимане. Он В апреле 2002 г. окончил Филиппинский университет в Лос-Баньосе со степенью бакалавра компьютерных наук и сейчас принимает его степень магистра компьютерных наук, специализация в области биоинформатики.Его можно отправить по электронной почте [email protected]

    К началу


    VI. О хосте

    Bioinformatics.Org — международная организация, которая продвигает свободу и открытость в области биоинформатики. Это достигается путем предоставления бесплатных и открытых ресурсов для исследований, разработок и образования, чтобы такие ресурсы можно было и дальше развивать. Организация является некоммерческой и поддерживает Интернет-сайт с тем же названием, где можно получить доступ к этим ресурсам.Bioinformatics.Org надеется снизить барьер для входа и участия в области биоинформатики, поскольку доступ к передовым ресурсам может быть непомерно дорогим для тех, кто работает индивидуально, в небольших группах, в плохо финансируемых учреждениях или в развивающихся странах.

    К началу


    VII. Информация об авторских правах

    PrimerX — Автоматизированный дизайн мутагенных праймеров для сайт-ориентированных мутагенез
    Авторские права © 2003 Карло Лапид

    К началу


    VIII.Заявление об ограничении ответственности

    Хотя мы, разработчики PrimerX, сделали все возможное, чтобы сделать PrimerX настолько полезным и мощным, насколько это возможно, мы не можем предложить никаких гарантий относительно эффективности или точности этой программы / веб-сайта. Не гарантируется, что праймеры, созданные с использованием PrimerX, будут работать в реальной реакции ПЦР или любой другой процедуре. Мы не несем ответственности за любые проблемы, возникшие в результате использования этой программы.

    PrimerX никоим образом не связан со Stratagene®, Invitrogen ™ или какой-либо другой частной компанией.Мы официально не поддерживаем наборы QuikChange ™, ExSite ™ или GeneTailor ™ Site-Directed Mutagenesis, а также любые другие продукты, продаваемые этими или любыми другими компаниями.

    Posted in Разное

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *