Аламинол. Жидкость концентрат для дезинфекции, 1000мл

Безопасное средство для дезинфекции. Имеет слабый запах, эффективно в отношении большого спектра бактерий. Используется во многих лечебно-профилактических и детских учреждениях.
Согласно инструкции Аламинола и разработанных методических указаний, существуют разные режимы дезинфекции. Применяют для антисептической обработки р-ры 1, 1,5, 3, 5, 8, 10%. Для того чтобы развести 1% раствор — на 10 мл концентрата приходится 1000 мл воды;
1,5% раствор – 15 мл на 1000 мл воды;
3% раствор– 30 мл концентрата на 1000 мл воды и т.д.
Раствор 1% применяют для дезинфекции и предотвращения развития инфекций бактериального происхождения (кроме туберкулеза) – им протирают санитарно-техническое оборудование, поверхности, предметы ухода за пациентами из резины, стекла, пластмассы, металла для замачивания незагрязненного и загрязненного выделениями белья и инвентаря, используемого для уборки помещений.
Раствор Аламинола 3 и 5% применяют в тех же целях, что и 1% раствор, а также для обработки поверхностей, предметов ухода, белья, оборудования, инвентаря при туберкулезе, кандидозах, дерматофитиях, вирусных инфекциях.

Применение Аламинола 5, 8, 10% рекомендовано для дезинфекции предметов медицинского назначения при бактериальных, вирусных, грибковых заболеваниях, включая кандидоз и туберкулез — методом погружения в раствор. Для обработки стеклянных, пластмассовых, металлических предметов, инструментов, в т.ч. в стоматологии.
Разводить Аламинол 8 и 10% положено для обработки резиновых изделий. Для предстерилизационной очистки (замачивания, мытья и ополаскивания), дезинфекции медицинских изделий (кроме эндоскопов и прилагающихся к ним инструментов) применяют 5, 8% растворы. Для предстерилизационной очистки (замачивания, мытья и ополаскивания) жестких, гибких эндоскопов используется раствор 1,5%. Для предстерилизационной очистки, дезинфекции стоматологических, хирургических инструментов в ультразвуковых установках применяют 8% раствор.

Разводить Аламинол следует в резиновых перчатках, избегая попадания его в глаза. Емкости, в которых с помощью раствора проводят дезинфекцию способом погружения, держат закрытыми. Хранить концентрированный и разведенный дезинфектор следует отдельно от других медицинских препаратов. Согласно инструкции Аламинола применять разведенные растворы можно многократно на протяжении срока годности или до изменения внешнего вида (помутнения, изменения цвета и т.д.). Концентрат в нераспечатанной таре хранится 12 мес, а разведенные растворы – не более 10 суток.
Производитель: Россия

Как разводить аламинол для дезинфекции — Оптовый Поставщик

Дезинфекция в наше время – обязательная процедура, основной целью которой является защита от опасных вирусов и микробов. Современные производители предлагают большой ассортимент средств для обработки различных поверхностей. Они бывают в разных формах: в виде растворов, геля, порошка и даже в таблетках.

Далее рассмотрим особенности и преимущества использования такого вещества, как Аламинол.

Описание препарата

Аламинол внешне ничем не примечательная жидкость синего или зеленого цвета, без едкого химического запаха. В составе присутствуют отдушки.

Активные добавки:

• Алкилдиметилбензиламмоний хлорида 5%.
• Глиоксаль 8%.
• Поверхностно – активные вещества.

Емкости, в которых реализуется средство, бывают разных объемов (от 1 до 5 дм3).

Хранить Аламинол очень просто, он отличается длительным сроком годности (не менее года при соблюдении всех рекомендаций производителя на упаковке).

Рабочий раствор с концентрацией от 1 до 10% можно без труда хранить на протяжении 10 дней без потери дезинфицирующих свойств продукта. Однако хранение рекомендуется только в сухом и темном месте.

Аламинол одновременно является отличным вирулицидным, фунгицидным и туберкулоцидным продуктом. Кроме того, он привлекает своими прекрасными моющими характеристиками.

Данное вещество относится к 3-й группе умеренно опасных препаратов при попадании в желудочно-кишечный тракт и к 4-ой при попадании на кожу (малоопасное). Испарения его не является опасным для здоровья человека.

Готовые растворы для дезинфекционной обработки имеют умеренное раздражающее действие на кожу, а также не обладают сенсибилизирующими свойствами.

Фармакологические свойства

Основные составляющие продукта, глиоксаль и алкилдиметилбензиламмоний хлорида, активны против большинства опасных бактерий, вирусов, грибков, возбудителей туберкулеза, а также ВИЧ инфекции, герпеса и прочих. Этот список довольно большой, поэтому можно смело утверждать, что Аламинол – это одно из самых эффективных средств для дезинфекции.

Применение

Сфер применения Аламинола очень много, можно выделить несколько самых известных в наше время:

• Дезинфекционная обработка медицинского инструментария, оборудования и всевозможных емкостей.
• Для очищения эндоскопов и прочих приспособлений.
• Для уборки и обеззараживания помещений различного назначения.
• Для дезинфекции мебели без текстильного покрытия.
• Для постельного белья, перевязочных материалов и многого другого.

Раствор этого вещества часто используется для уборки в местах большого скопления людей, например, в ресторанах и кафе, в образовательных центрах, а также Аламинол применяют многие коммунальные службы, особенно в период сложной эпидемиологической ситуации или в межсезонье.

Если обрабатывать поверхности этим средством, риск появления на них грибков и плесени будет существенно снижен. Это актуально как для жилых, так и для промышленных зданий.

Инструкция по применению

Подробная инструкция по разведению Аламинола имеется на каждой этикетке этого продукта. Использовать его следует только по назначению, существует несколько режимов обработки.

В настоящее время встречаются следующие концентрации: 1%, 1,5%, 5%, 5%, 8% и 10%.

Приготовить рабочий раствор очень легко, для этого не требуется наличие специальных навыков. Для 1% раствора необходимо взять 1000 мл воды и 10 мл концентрата Аламинола. Для приготовления 3% раствора требуется 30 мл концентрированного средства и так далее.

Применение:

• Средство с концентрацией 1% отлично подходит для обеззараживания оборудования в лабораториях и больницах, резиновых изделий, стекла, металла и пластика. Также с его помощью можно без труда очистить инвентарь и ветошь, используемую для влажной уборки помещений.
• 3% и 5% подходят для обработки всех тех же помещений и оборудования, белья и предметов ухода за больными. Демонстрируют хороший эффект против таких патогенов, как возбудитель туберкулеза, герпеса, грибков и т.п.
• 5% — 10% растворы предназначены для использования медицинскими работниками. В них погружают различные изделия, бывшие в контакте с носителями грибковых, вирусных, бактериальных и других заболеваний. Активно применяются для обеззараживания предметов из пластмассы, стекла, резины и металла, например, в стоматологической практике. Не менее актуальны эти растворы для предстерилизационной очистки, то есть дополнительного замачивания, полоскания и мытья. Метод подходит для любых изделий медицинского назначения за исключением эндоскопов. Эндоскопы следует дезинфицировать в особых ультразвуковых установках с использованием раствора с 8% концентрацией.

Как же приготовить раствор? Разводить Аламинол нужно строго в защитных, резиновых перчатках. При попадании в глаза их следует быстро промыть проточной водой, при появлении неприятных ощущений рекомендуется обратиться к врачу.

Приготовленному раствору и концентрату необходимо обеспечить хранение в недоступном для детей месте. Помещение должно быть сухим, без прямого попадания солнечных лучей и без контакта с другими препаратами медицинского характера.

Специалисты советуют использовать готовое средство для дезинфекции до тех пор, пока оно не изменит цвет, не помутнеет или не даст осадок.

Побочный эффект

Если продукт попал на открытый участок кожи, на ней может появиться раздражение или покраснение. При этом важно незамедлительно промыть участок кожи прохладной, чистой водой. После этого его можно обработать жирным, смягчающим кремом, желательно с натуральным составом.

Если же по неосторожности средство попало в желудок, человеку требуется выпить 500 мл жидкости и больше, а также принять не менее 15 таблеток активированного угля.

Если Аламинол попал в глаза, их также важно как можно скорее промыть чистой водой. После этого рекомендуется закапать в глаза препарат под названием сульфацил натрия (30%). Для оптимального эффекта достаточно 1-2 капель средства.

При появлении любого дискомфорта или непроходящего ощущения жжения лучше обратиться за консультацией к доктору.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

как разводить средство и правильно им пользоваться?

Приборы и инструменты для маникюра

Обработка инструментов, используемых для маникюра, очень важна. Обработать инструментарий можно разными средствами. Эта статья расскажет подробнее о том, как использовать препарат «Аламинол» для этой цели.

Свойства

«Аламинол» содержит в своем составе компоненты, которые способны оказывать негативное воздействие на болезнетворные вирусы и бактерии. Он обладает также и туберкулоцидным действием. Производители данного средства отмечают, что оно обладает также моющим и фунгицидным действиями. Этот препарат имеет жидкую консистенцию. Цвет жидкости может быть разным – с синеватым или зеленоватым оттенком. Препарат обладает и запахом, но не сильно раздражающим. Многие отмечают, что средство в разведенном состоянии для них пахнет косметической отдушкой.

Применяться «Аламинол» вследствие своего довольно широкого спектра действия можно не только в маникюрных кабинетах и салонах красоты, но и в лечебных учреждениях и даже на предприятиях, занимающихся общественным питанием. Обработка инструментов этим препаратом помогает существенно снизить риск инфицирования людей болезнетворными микробами. Стоит отметить, что данное средство довольно эффективно помогает от различных грибковых инфекций.

Использовать его можно не только для обработки инструментов, но и для обработки рабочих поверхностей. Такая обработка помогает защитить предметы от появления на них плесневых грибков.

Правила разведения

Разводить данное средство следует согласно инструкции по применению. Она обязательно прилагается к препарату. Важно отметить, что если рекомендованные дозировки разведения не соблюдать, то это может привести к снижению эффекта. Чтобы снизить риск повреждения кожи, проводить разведение препарата следует в защитных перчатках. Раствор дезинфицирующего средства перед использованием смешивается с обычной водой.

Очень важно смешивать ингредиенты между собой осторожно, не допуская, чтобы смесь попала на слизистые оболочки глаз или на руки.

Это поможет привести к химическому повреждению и появлению неблагоприятных симптомов.

Наносить данное средство на маникюрные инструменты можно в концентрации от 1 до 10%. Например, чтобы приготовить 7% раствор, нужно в 930 мл воды растворить 70 мл препарата. Если же требуется раствор, имеющий концентрацию 5%, то в таком случае в 950 мл воды растворяется уже меньшее количество дезинфицирующего средства – всего 50 мл. Аналогичным образом производится разведение и других необходимых концентраций.

Приготовленный раствор можно хранить. Не рекомендуется это делать более чем 10 суток. Хранить раствор следует в отдельной емкости, которая плотно закрывается.

При этом нужно избегать попадания любых других компонентов внутрь. Это может привести к потере дезинфицирующих свойств жидкости. После использования данного средства руки, даже несмотря на применение защитных перчаток, следует промыть. Лучше при этом мыть их с мылом. Обладателям нежной кожи после такого мытья кожу рук лучше смазать их питательным кремом. Это поможет снизить риск возможного пересушивания кожных покровов.

Как пользоваться?

Использовать «Аламинол» довольно просто. В емкость с концентрированным дезинфицирующим средством, разведенным до необходимой концентрации, следует аккуратно переложить использованные инструменты и оставить их там на 1 час. По прошествии этого времени их следует вытащить, промыть водой и тщательно высушить. А также данный раствор (лучше в концентрации 1–2%) можно использовать для обработки поверхностей. Это поможет снизить риск развития грибковой инфекции и других патологий, вызываемых болезнетворными микробами.

Обрабатывать поверхности следует ветошью, которая для этого используется. Многие мастера по маникюру отмечают, что после такой обработки в кабинете появляется особенный запах, который ассоциируется у них с чистотой.

Меры предосторожности

К сожалению, на практике бывает так, что даже аккуратное использование данного средства может привести к появлению на коже различных раздражений. Как правило, это происходит в том случае, если при проведении обработки различных предметов защитные перчатки порвались. В такой ситуации дезинфицирующий препарат может попасть на кожу и спровоцировать появление покраснения. Если во время обработки предметов такая «внештатная» ситуация произошла, то в таком случае стоит выполнить дальнейшие действия:

• поврежденные перчатки нужно сначала снять с рук;
• затем кожные покровы нужно промыть обильным количеством теплой воды – это необходимо для того, чтобы окончательно смыть с кожи остатки дезинфицирующего средства;
• промывать руки нужно в течение 4–6 минут;
• если на коже появилось покраснение, то в таком случае его лучше обработать специальной лечебной мазью.

Важно! Если такое повреждение не проходит в течение нескольких дней, следует обязательно обратиться к врачу.

Случаи попадания раствора «Аламинол» редко, но встречаются. Если использование средства способствовало тому, что оно попало на слизистые оболочки глаз, то в таком случае требуется немедленно промыть глаза. Тереть их сильно руками не стоит, так как это может лишь усилить красноту. Если после промывания глаз возникшие неблагоприятные симптомы не исчезают, и даже появились нарушения зрения, то в таком случае требуется срочно обратиться к врачу.

Попасть разведенный раствор может и в рот. Если такая ситуация произошла, то в таком случае важно сразу же принять меры. В данном случае требуется прием сорбента. В качестве такого средства можно использовать активированный уголь. Если даже после приема такого препарата появилась острая боль в животе, то в таком случае требуется срочное обращение за медицинской помощью.

Важно! При осторожном использовании данного дезинфицирующего препарата развитие неблагоприятных симптомов происходит крайне редко.

Следование инструкции по использованию этого средства и соблюдение мер предосторожности способствуют тому, что никаких непредвиденных негативных последствий для здоровья от его использования не будет.

Отзывы

Раствор «Аламинол» используется во многих салонах красоты и маникюрных кабинетах для обработки инструментария и рабочих поверхностей. Многие собственники таких учреждений отмечают, что им нравится это средство, так как оно имеет довольно доступную цену и его можно легко купить. А также они отмечают, что данный препарат сравнительно долго может храниться уже в разведенном состоянии без потери своих дезинфицирующих свойств.

Существуют и негативные мнения о данном средстве. Так, некоторые мастера маникюра отмечают, что после регулярной обработки этим дезинфицирующим средством инструментов они замечают изменение их свойств. Поэтому они предпочитают использовать альтернативные варианты дезинфекции маникюрного инструментария.

Используют данное средство не только в салонах красоты, но и в домашних условиях. Некоторые женщины периодически обрабатывают свои личные маникюрные инструменты для того, чтобы обезопасить себя от инфицирования опасными микробами. Они отмечают, что использование данного средства помогает им чувствовать себя увереннее и не бояться за попадание микробов во время проведения маникюра даже у себя дома.

О том, как правильно дезинфицировать маникюрные инструменты, смотрите ниже.

инструкция к препарату, аналоги и отзывы

Как следует правильно использовать препарат «Аламинол» (дезинфицирующее средство)? Инструкция по применению этого раствора указана ниже. Также вам представлена информация о том, как следует разводить это средство, и в каких случаях его используют.

Форма выпуска, состав

Что представляет собой препарат «Аламинол» (дезинфицирующее средство)? Инструкция утверждает, что такой раствор можно приобрести в форме прозрачного и жидкого концентрата зелено-синего или синего цвета, который обладает слабым запахом. В его состав входит алкилдиметилбензиламмония хлорид и глиоксаль, а также поверхностно-активные вещества, краситель, рН-концентрат и вода. В продажу это средство поступает в бутылках или полимерных канистрах.

Фармакологическое действие

Как действует препарат «Аламинол» (дезинфицирующее средство)? Инструкция сообщает, что глиоксаль и алкилдиметилбензиламмония хлорид, входящие в состав этого концентрата, способны проявлять вирулицидные, бактерицидные, туберкулоцидные, моющие и фунгицидные свойства. Благодаря такому действию рассматриваемый раствор широко используется для предстерилизационной очистки и дезинфекции в парикмахерских, стоматологических кабинетах, детских, профилактических и лечебных учреждениях, гостиницах и столовых.

Согласно инструкции, при дезинфекции препарат «Аламинол» проявляет высокую активность по отношению к ВИЧ-инфекциям, герпесу, острым вирусным респираторным инфекциям, а также прочим вирусам, к числу которых относятся энтеро-, рота- и полиовирусы. Также следует отметить, что это средство пагубным образом воздействует на микобактерии туберкулеза, грибы рода Кандида, возбудителей вирусных парентеральных гепатитов, дерматофитов и возбудителей прочих инфекций, в том числе внутрибольничных.

Нельзя не сказать и о том, что в разведенном виде «Аламинол» не проявляет сенсибилизирующие свойства, однако оказывает местное раздражающее действие.

Показания к использованию

Маникюрные инструменты препарат «Аламинол» дезинфицирует очень хорошо. Также этого средство используют в следующих случаях:

• при утилизации таких медицинских отходов, как бинты, салфетки, марля и прочие, которые применялись в отношении больных вирусной, бактериальной или грибковой инфекцией;
• для борьбы с плесневыми грибами;
• для предстерилизационной чистки эндоскопов, а также дезинфекции медицинских инструментов и прочих изделий из металла;
• для дезинфекции поверхностей в помещениях, различных предметов и санитарно-технического оборудования, уборочного инвентаря, белья и прочих атрибутов, предназначенных для ухода за больными людьми.

Нельзя не сказать и о том, что дезинфекция «Аламинолом» нередко проводится при генеральных уборках на объектах коммунальной службы, в столовых и в лечебных учреждениях.

Правила разведения

Как разводить «Аламинол»? Подробная инструкция по применению этого средства была разработана НИИ дезинфектологии.

Перед непосредственным использованием концентрат следует смешать с обычной питьевой водой. Осуществлять данный процесс желательно в эмалированных, пластмассовых или же стеклянных емкостях. При этом очень важно использовать плотные резиновые перчатки, а также избегать попадания жидкости в глаза, на кожу или внутрь.

Так как разводить «Аламинол»? При применении этого средства для антисептической обработки его разводят до 1-10% раствора. Для получения 10% жидкости в 1 литр обычной питьевой воды вливают около 100 мл концентрата. Чтобы получить 8% раствор используют 80 мл средства и так далее.

Ввиду того, что раствор «Аламинол» можно применять несколько раз на протяжении 10 суток, очень важно следить за тем, чтобы тара, в которой он содержится, была плотно закрыта и хранилась отдельно от других медикаментов и пищевых продуктов.

После осуществления работ с использованием этого препарата производитель рекомендует хорошо вымыть руки и лицо с мылом.

Способ применения

Как следует дезинфицировать маникюрные инструменты, медицинское оборудование и прочие предметы, используя раствор «Аламинол»? Согласно инструкции, в готовом средстве необходимо тщательно вымочить ветошь, после чего хорошенько протереть всю требующую обработки поверхность.

В некоторых случаях готовый раствор «Аламинол» используют для замачивания посуды, а также ее мытья и ополаскивания. Осуществлять такую обработку следует только в резиновых перчатках.

Побочные действия

Какие негативные реакции может вызвать препарат «Аламинол» (дезинфицирующее средство)? Инструкция утверждает, что при попадании такого раствора на кожу он вызывает ее раздражение и покраснение. В этом случае дезинфицирующее средство следует сразу же смыть, после чего обработать пораженный кожный участок любым смягчающим кремом.

При попадании «Аламинола» в зрительные органы их также требуется промыть, а затем закапать 30%-ный сульфацил натрия в количестве 1-2 капель.

При попадании раствора или концентрата в желудок следует сразу же принять 10-25 истолченных таблеток активированного угля и запить их большим количеством воды.

Особые сведения

При утечке рассматриваемого раствора в пролитую часть средства необходимо добавить большое количество обычной воды или адсорбировать ее посредством впитывающих веществ (например, песком, опилками, силикагелем или ветошью), после чего отправить на утилизацию. При этом очень важно надеть резиновые перчатки, сапоги, фартук, универсальный респиратор и очки.

Сливать раствор в канализацию можно лишь после его разведения.

Аналогичные средства и отзывы

Чем можно заменить концентрат «Аламинол»? Для инструментов хорошо подходят такие препараты, как «Пресепт», нейтральный анолит, «Виркон» и «Септабик».

Согласно отзывам специалистов, «Аламинол» представляет собой эффективное дезинфицирующее средство. Этот концентрат очень прост в применении, однако требует соблюдения всех правил техники безопасности. Также к достоинствам этого средства относят его доступность и широкий спектр действия.

Об использовании Аламинола. Статьи компании «KRASNO.KZ

Кратко об Аламиноле

Аламинол – безхлорное универсальное средство для дезинфекции. Средство-антисептик + моющее средство в виде концентрата со слабым запахом, ярко-синего цвета.
Применяется для антисептической обработки пола, стен, мебели, инструментов, предметов ухода, нестерильных расходных материалов в салонах красоты, массажных, спа-центрах, парикмахерских, аптеках, в учреждениях публичного питания (столовые, кафе, рестораны), в оздоровительных центрах, в зданиях коммунальной службы, особенно в период сезонных эпидемий.

Основные характеристики:

• Средство не представляет никакой опасности для здоровья. Даже его пары безвредны. При соприкосновении с кожей требуется только ее промыть под большим количеством воды.
• Эффективен, разрешено применение и для медицинских инструментов.
• Несмотря на свою агрессивность как химического вещества, с металлом взаимодействует максимально щадяще.
• Отсутствует фиксирующее действие.
• Рабочий раствор может использоваться многократно.
• Время обеззараживания составляет от 60 минут. Основные способы обеззараживания – погружение, а также ополаскивание.
• Способен справляться с грибковой инфекцией (дерматофитии, кандидозы), вирусами, бактериями (в том числе и с возбудителями туберкулеза), плесневыми грибами.
• Обладает моющими свойствами.
• Если хранить в темной бутылочке из толстого стекла в темном и прохладном месте, то бактерицидная эффективность сохранится более чем на год.
• Приготовленный раствор можно использовать до десяти дней или до времени его помутнения и потемнения.
• Применяется как 1-10% раствор. В зависимости от уровня опасности возбудителей инфекций.
• 1%-1,5% ― для простой уборки помещений, для легкой дезинфекции инструментов от бактерий (кроме туберкулеза) и протирки рабочих поверхностей.
• 3-5% ― для обработки инструмента и инвентаря в немедицинских учреждениях, где риск мал. Растворы 3% и 5% могут справиться уже с туберкулезом и вирусными инфекциями
• 8%, 10% ― применяется в медицинских целях, для защиты от бактерий и вирусов, позволяют уничтожить даже грибковые инфекции, но не заменяет стерилизацию в мед учреждениях.
• Для маникюрного инструмента – раствор 5%, 8% ― инструмент погружается в раствор, накрывается крышкой. Дезинфекцию маникюрных инструментов ручным способом проводят в пластмассовых, эмалированных (без повреждения эмали) емкостях, закрывающихся крышками.

Температура рабочих растворов должна быть не менее 18°С.

Для осуществления этих процессов изделия полностью погружают в рабочий раствор средства. Каналы и полости инструментов заполняют раствором, избегая образования воздушных пробок. Инструменты с замковыми частями погружают раскрытыми, предварительно сделав ими в растворе несколько рабочих движений для лучшего проникновения раствора в труднодоступные участки инструментов в области замка. Разъемные изделия погружают в раствор в разобранном виде. Толщина слоя раствора над изделиями должна быть не менее 1 см.  Внимание! Желательно полностью погрузить инструменты в рабочий раствор средства сразу же после их применения (не допуская подсыхания загрязнений).

Противопоказаний нет.

Избегать попадания на кожу, может вызвать покраснение. Использовать перчатки.

Выпускается в емкости по 1 л.

Процент необходимого раствора	Кол-во концентрата на 1 литр воды
1%	10 мл
1.5%	15 мл
3%	30 мл
5%	50 мл
8%	80 мл
10%	100 мл

Готовый раствор хранить не более 10 дней. При появлении признаков помутнения раствора использовать его для обработки инструментов нельзя.

 

Если подробно:

Аламинол – средство-антисептик.

Фармакологическое действие Действующие вещества Аламинола – глиоксаль и алкилдиметилбензиламмоний хлорида, проявляющие активность бактерий, грибов Candida, туберкулезных микобактерий, возбудителей острых респираторных инфекций, вирусных парентеральных гепатитов, ВИЧ-инфекции, герпеса, рота-, энтеро-, полиовирусов.

Раствор можно использовать в учреждениях публичного питания (столовые, кафе, рестораны), в оздоровительных центрах, в зданиях коммунальной службы, особенно в период сезонных эпидемий. В инструкции аламинола указано, что при частом использовании этого раствора, предотвращается появление плесневых грибов в жилых и нежилых помещениях.  Форма выпуска Выпускают Аламинол в виде концентрата со слабым запахом ярко-синего цвета.

Показания к применению:

Аламинол по инструкции применяют для: дезинфекции изделий, применяемых в медицинских целях, для предстерилизиационной очистки эндоскопов и прилагающихся к ним инструментов, для дезинфекции помещений, поверхностей, мебели, оборудования, инвентаря, перевязочного материала, салфеток, одноразового белья перед утилизацией, предметов ухода за пациентами. Раствор Аламинола успешно применяют также для проведения уборки в учреждениях общественного питания, лечебных, коммунальной службы в период сезонных эпидемий. При регулярном использовании Аламинол предотвращает размножение плесневелых грибов в жилых, нежилых помещениях.

Противопоказания

Противопоказаний к применению Аламинола нет.

Инструкция по применению Аламинола

Согласно инструкции Аламинола и разработанных методических указаний, существуют разные режимы дезинфекции. Применяют для антисептической обработки р-ры 1, 1,5, 3, 5, 8, 10%. Для того чтобы развести 1% раствор ― на 10мл концентрата приходится 1000мл воды; 1,5% раствор – 15мл на 1000мл воды; 3% раствор– 30мл концентрата на 1000мл воды и т.д. Раствор 1% применяют для дезинфекции и предотвращения развития инфекций бактериального происхождения (кроме туберкулеза) – им протирают санитарно-техническое оборудование, поверхности, предметы ухода за пациентами из резины, стекла, пластмассы, металла для замачивания незагрязненного и загрязненного выделениями белья и инвентаря, используемого для уборки помещений.

Раствор Аламинола 3 и 5% применяют в тех же целях, что и 1% раствор, а также для обработки поверхностей, предметов ухода, белья, оборудования, инвентаря при туберкулезе, кандидозах, дерматофитиях, вирусных инфекциях. Применение Аламинола 5, 8, 10% рекомендовано для дезинфекции предметов медицинского назначения при бактериальных, вирусных, грибковых заболеваниях, включая кандидоз и туберкулез ― методом погружения в раствор. Для обработки стеклянных, пластмассовых, металлических предметов, инструментов, в т.ч. в стоматологии. Разводить Аламинол 8 и 10% положено для обработки резиновых изделий. Для предстерилизационной очистки (замачивания, мытья и ополаскивания), дезинфекции медицинских изделий (кроме эндоскопов и прилагающихся к ним инструментов) применяют 5, 8% растворы. Концентрат Аламинол плюс Для предстерилизационной очистки (замачивания, мытья и ополаскивания) жестких, гибких эндоскопов используется раствор 1,5%. Для предстерилизационной очистки, дезинфекции стоматологических, хирургических инструментов в ультразвуковых установках применяют 8% раствор.

Разводить Аламинол следует в резиновых перчатках, избегая попадания его в глаза. Емкости, в которых с помощью раствора проводят дезинфекцию способом погружения, держат закрытыми. Хранить концентрированный и разведенный дезинфектор следует отдельно от других медицинских препаратов. Согласно инструкции Аламинола применять разведенные растворы можно многократно на протяжении срока годности или до изменения внешнего вида (помутнения, изменения цвета и т.д.). Концентрат в нераспечатанной таре хранится 12мес, а разведенные растворы – не более 10 суток. Побочные действия Раствор Аламинола при попадании на кожные покровы вызывает их покраснение, раздражение. В этом случае средство необходимо немедленно смыть с кожи, обработать ее любым смягчающим кремом. При попадании Аламинола внутрь необходимо выпить около 500мл воды с 10 или 20 таблетками угля активированного. При попадании Аламинола в глаза их необходимо промыть и закапать сульфацил натрия 30% ― 1-2кап.

Раствор Аламинола — инструкция, применение, показания

Аламинол – дезинфицирующее средство с широким спектром применения.

Фармакологическое действие Аламинола

Аламинол является антисептиком, который можно применять для дезинфекции в:

• Стоматологиях;
• Лечебно-профилактических учреждениях;
• Парикмахерских;
• Салонах красоты;
• Детских учреждениях;
• Гостиницах;
• Столовых.

Раствор Аламинол при проведении дезинфекции эффективен в отношении:

• Микобактерий туберкулеза;
• Грибов рода Кандида;
• Большинства бактерий, включая различных возбудителей внутрибольничных инфекций;
• Дерматофитов;
• Различных вирусов, включая энтеро-, полио-, ротавирусы, острые респираторные вирусные инфекции, ВИЧ-инфекции, герпес, возбудители парентеральных вирусных гепатитов.

Форма выпуска и состав Аламинола

Аламинол выпускают в виде прозрачного жидкого концентрата синего цвета, хорошо смешиваемого с водой, со слабым запахом отдушки.

В его состав входит глиоксаль и алкилдиметилбензиламмоний хлорида (ЧАС), а также краситель, поверхностно-активное вещество и вода.

В полиэтиленовых емкостях по 1 л и 3 л.

Показания к применению Аламинола

По инструкции Аламинол применяют для:

• Дезинфекции изделий, которые используются в медицинских целях;
• Дезинфекции помещений, мебели, поверхностей, инвентаря, оборудования, салфеток, перевязочного материала, одноразового белья (перед утилизацией), различных предметов, используемых для ухода за пациентами;
• Предстерилизиационной очистки эндоскопов и инструментов, прилагающихся к ним.

Также раствор Аламинола успешно применяется в период сезонных эпидемий при проведении уборки в учреждениях общественного питания.

Кроме того, регулярное применение Аламинола способствует предотвращению размножения плесневелых грибов в помещениях (жилых и нежилых).

Противопоказания

Каких-либо противопоказаний к применению Аламинола по инструкции нет.

Способ применения Аламинола

1% раствор Аламинола применяют для дезинфекции и предупреждения распространения инфекций бактериального происхождения (за исключением туберкулеза). Как правило, им протирают поверхности, санитарно-техническое оборудование, предметы ухода за пациентами (включая изделия из пластмассы, резины, стекла и металла).

3% и 5% растворы Аламинола используют с той же целью, что и 1% раствор. Кроме того, его применяют для обработки предметов ухода, поверхностей, оборудования, белья и инвентаря при кандидозах, туберкулезе, вирусных инфекциях и дерматофитиях.

5%, 8% и 10% растворы Аламинола по инструкции рекомендовано применять погружением в раствор для дезинфекции медицинского инвентаря при вирусных, бактериальных и грибковых заболеваниях, а также при туберкулезе и кандидозе. Также эти растворы используют в стоматологии – для обработки пластмассовых, стеклянных, инструментов, металлических предметов. Резиновые изделия обрабатывают 8% и 10% раствором средства.

5% и 8% растворы Аламинола используют для предстерилизационной очистки (мытья, замачивания и ополаскивания), дезинфекции различных медицинских изделий (за исключением эндоскопов и других инструментов, которые к ним прилагаются).

Инструкцией определено, как разводить Аламинол для проведения различных видов дезинфекции. Для антисептической обработки применяют 1%, 1,5%, 3%, 5%, 8%, 10% растворы. Для получения 1% раствора следует 10 мл концентрата развести в 1000 мл воды, 1,5% раствора – 15 мл в 1000 мл воды, 3% раствора – 30 мл в 1000 мл воды и т.д.

Разводить Аламинол необходимо в резиновых перчатках, а также следует избегать его попадания в глаза. Емкости для проведения дезинфекции методом погружения следует держать закрытыми и хранить отдельно от других медицинских средств.

Согласно инструкции, Аламинол в разведенном виде можно использовать многократно в течение 10 дней в случаях, если не изменился внешний вид (помутнение или изменение цвета).

Побочные действия Аламинола

При попадании на кожные покровы 1-10% раствор Аламинола может вызвать их раздражение и покраснение. В этом случае необходимо немедленно смыть средство с кожи, после чего обработать поверхность смягчающим кремом.

При случайном попадании Аламинола внутрь следует выпить около 0,5 л воды с активированным углем.

В случае попадания Аламинола в глаза, их следует промыть большим количеством воды, после чего закапать 1-2 капли 30% сульфацила натрия.

Условия и сроки хранения

В закрытой упаковке производителя срок годности раствора Аламинол составляет 1 год. После разведения рабочие 1-10% растворы сохраняют свои свойства до 10 дней при условии соблюдения температуры хранения (до 35 градусов Цельсия). Аламинол по инструкции замерзает при температуре -5 градусов Цельсия. После размораживания средство сохраняет свои дезинфицирующие свойства.

Антисептик Аламинол, 1л – Массажные и косметологические столы в Уфе

Аламинол — универсальный дезинфицирующий препарат, антисептик с широким антимикробным спектром действия. Оказывает действие на бактерии, вирусы и грибы, а также удачно с ними борется. Также обладает моющими свойствами. Выпускается в виде концентрированного жидкого вещества ярко – синего цвета со слабым специфическим запахом.

Предназначен для дезинфекции изделий медицинского назначения (хирургические, стоматологические, косметологические инструменты), поверхностей в помещениях, предметов обстановки, оборудования, белья; для предстерилизационной очистки, несовмещенной с дезинфекцией; для проведения генеральных уборок в лечебно-профилактических учреждениях, косметических кабинетах и т.д..

Для антисептической обработки применяют растворы 1%, 1,5%, 3%, 5%, 8%, 10%

Правила применения Аламинола
1. Необходимо помнить, что в бутылке находится 100% концентрат, который необходимо разводить питьевой водой для получения раствора нужного вам %.

2. Для того чтобы получить 1% раствор — на 10 мл концентрата приходится 1000 мл воды;
чтобы получить 1,5% раствор – 15 мл на 1000 мл воды;
чтобы получить 3% раствор – 30 мл концентрата на 1000 мл воды и т.д.

Растворы 1% и 1.5% применяются для легкой дезинфекции инструментов, оборудования от бактерий (кроме туберкулеза) и протирки рабочих поверхностей, предметы из резины, стекла, пластмассы, металла.
Растворы 3% и 5% могут справиться уже с туберкулезом и вирусными инфекциями.
Растворы 8% и 10% позволяют уничтожить даже грибковые инфекции.
Помните, что применение аламинола — это лишь промывка и дезинфекция — один этап полной стерилизации инструментов для маникюра.
Разводить Аламинол следует в резиновых перчатках, избегая его попадания е в глаза.

Емкости, в которых с помощью раствора проводят дезинфекцию способом погружения, держат закрытыми.

Хранить концентрированный и разведенный дезинфектор следует отдельно от других препаратов.

Согласно инструкции Аламинола применять разведенные растворы можно многократно на протяжении срока годности или до изменения внешнего вида (помутнения, изменения цвета и т.д.).

Концентрат в нераспечатанной таре хранится 12мес, а разведенные растворы – не более 10 суток.

Ядерный фактор (NF) -κB-зависимый рецептор тироидного гормона β1 Экспрессия контролирует функцию дендритных клеток посредством передачи сигналов Akt

Аннотация

Несмотря на значительный прогресс в нашем понимании взаимодействия между иммунной и эндокринной системами, роль гормонов щитовидной железы и их рецепторов в контроле над адаптивным иммунитетом все еще неясно. Здесь мы исследовали роль передачи сигналов рецептора тироидного гормона (TR) β ¹ в модуляции физиологии дендритных клеток (DC) и внутриклеточных механизмов, лежащих в основе этих иммунорегуляторных эффектов.Воздействие трийодтиронина на ДК (T ³ ) приводило к быстрому и устойчивому увеличению фосфорилирования Akt независимо от активации фосфатидилинозитол-3-киназы, что было важно для поддержки созревания ДК, индуцированного T ³ , и продукции интерлейкина (IL) -12. . Этот эффект зависел от интактной передачи сигналов TRβ ¹ , так как небольшая интерферирующая РНК-опосредованное подавление экспрессии TRβ ¹ предотвращало индуцированное T ³ созревание DC и секрецию IL-12, а также активацию Akt и деградацию IκB-.В свою очередь, T ³ активирует экспрессию TRβ ¹ посредством механизмов, вовлекающих NF-κB, предполагая, что аутокринная регуляторная петля контролирует гормон-зависимую передачу сигналов TRβ ¹ . Эти данные были подтверждены анализом иммунопреципитации хроматина, который выявил новый функциональный консенсусный сайт NF-κB в промоторной области гена TRB1 . Таким образом, T ³ -индуцированный NF-κB-зависимый механизм контролирует экспрессию TRβ ¹ , которая, в свою очередь, сигнализирует DCs, чтобы способствовать созреванию и функционированию посредством Akt-зависимого, но независимого от PI3K пути.Эти результаты подчеркивают новую нераспознанную мишень, которая регулирует созревание и функцию DC, что имеет решающее значение для иммунопатологии на перекрестке иммуно-эндокринных цепей.

Ключевые слова: Гормоны, иммунология, рецепторы, рецепторы / стероиды / щитовидная железа, передача сигнала, транскрипция / промотор, дендритная клетка

Введение

Эндокринная и иммунная системы взаимосвязаны двунаправленной сетью, в которой гормоны влияют на иммунную функцию. и, в свою очередь, иммунные ответы отражаются в нейроэндокринных изменениях.Эта двунаправленная коммуникация возможна, поскольку обе системы имеют общие лиганды (гормоны и цитокины) и их специфические рецепторы (1). Гормоны щитовидной железы (TH) ⁵ играют решающую роль в дифференцировке, росте и метаболизме. Классические геномные действия TH опосредуются ядерными рецепторами TH (TR), которые действуют в основном как индуцируемые гормонами факторы транскрипции. Несколько изоформ TRα и TRβ кодируются генами TRA и TRB соответственно. Изоформы TRα ₁ , TRα ₂ , TRβ ₁ и TRβ ₃ широко экспрессируются, тогда как TRβ ₂ преимущественно ограничивается осью гипоталамус-гипофиз (2).Недавно появившиеся доказательства также охарактеризовали взаимодействия TR с корепрессорными белками, а именно с ядерным корепрессором и медиатором подавления ретиноидов и рецепторов TH. Эти эффекты включают активность гистон-деацетилазы, которая опосредует подавление TR в отсутствие трийодтиронина (T ₃ ) и нескольких белков-коактиваторов, которые проявляют активность гистонацетилазы в присутствии этого гормона (2). Однако представление о классических или геномных механизмах как об уникальных действиях, опосредованных TRs, было поставлено под сомнение в последнее десятилетие из-за описаний действий TH, которые включают внеядерные (негеномные) эффекты в различных типах клеток.Эти TH-зависимые пути связаны с внеядерными TR, локализованными в цитоплазме и плазматической мембране (3, –5), и с TH-зависимыми эффектами, опосредованными интегрином на поверхности клетки α _v β ₃ (6). Некоторые цитоплазматические действия T ₃ , опосредованные TR, связаны с активацией пути PI3K в альвеолярных клетках (7) и фибробластах человека (8). Более того, активация Akt, критического компонента роста и выживания клеток (9), была обнаружена в β-клетках островков поджелудочной железы при включении TRβ ₁ и активации PI3K-p85 (10).

Несмотря на значительный прогресс в понимании взаимодействия между отдельными гормонами и сетью иммунных клеток, роли TH в контроле физиологии иммунных клеток уделялось мало внимания, поскольку исследования почти исключительно сосредоточены на эффекторных B- и T-лимфоцитах (11, 12). Однако роль передачи сигналов TR в инициации адаптивного иммунитета остается неясной.

Дендритные клетки (DC) — это высокоспециализированные антигенпрезентирующие клетки, которые распознают, обрабатывают и представляют антигены наивным Т-клеткам для индукции антиген-специфических иммунных ответов (13).Учитывая замечательную пластичность этих клеток, манипулирование их функцией в пользу индукции ДК с иммуногенными или толерогенными свойствами может быть использовано для стимуляции или ослабления иммунных ответов (14). После in vitro, или in vivo, воздействия липополисахаридов (LPS) или других микробных продуктов, DC подвергаются активации и созреванию посредством различных сигнальных путей, включая MAPKK1 / ERK, который способствует выживанию DC, и пути Akt и NF-κB, которые позволяют созревать ДК (15, 16).Передача сигналов через NF-κB также определяет повышенную экспрессию главного комплекса гистосовместимости (MHC) II и костимуляторных молекул, высвобождение провоспалительных цитокинов и хемокинов, а также миграцию и рекрутирование DC. Этот скоординированный процесс приводит к устойчивой стимулирующей способности Т-клеток и продукции IL-12, что приводит к индукции защитного иммунитета Th2 (15). Недавно мы представили первые доказательства, указывающие на роль TH в контроле созревания DC (17). Наши первоначальные результаты продемонстрировали экспрессию TR, в основном изоформы β ₁ , на мышиных DC из костного мозга и роль T ₃ в управлении созреванием DC (17).

В этом исследовании мы исследовали пути передачи сигналов, приводящие к эффектам T ₃ в компартменте DC, их влияние на иммуногенность этих клеток и значимость передачи сигналов TRβ ₁ в этом процессе. Наши результаты демонстрируют новую связь между NF-κB-зависимой экспрессией TRβ ₁ , активацией Akt, индуцированной T ₃ , и регуляцией физиологии DC с критическими последствиями для иммунопатологии.

ОБСУЖДЕНИЕ

ДК являются критически важными клетками, «принимающими решения», которые должны интегрировать сигналы от нескольких путей и рецепторов, включая те, которые возникают в результате взаимодействия рецепторов захвата и распознавания образов, провоспалительных и противовоспалительных цитокинов, хемокинов и гормонов. для определения типа и величины адаптивных иммунных ответов (32).Недавно мы продемонстрировали важную роль T ₃ в стимулировании созревания DC и секреции цитокинов Th2-типа (17). Поскольку взаимодействие T ₃ -TRβ ₁ может представлять привлекательную мишень для рационального манипулирования иммуногенностью ДК (32), здесь мы исследовали молекулярные механизмы и сигнальные пути, лежащие в основе этих иммуностимулирующих эффектов. В совокупности результаты, представленные в этом исследовании, подчеркивают ключевую роль передачи сигналов TRβ ₁ в соединении системы щитовидной железы с инициацией адаптивного иммунитета через внутриклеточные пути, включающие селективную активацию Akt и NF-κB.Кроме того, мы идентифицировали TRB1 как новый ген-мишень NF-κB, имеющий решающее значение для развития воспалительных реакций.

Способность T ₃ получать доступ к цитоплазматическим и ядерным компартментам и трансактивировать TH-регулируемые гены хорошо известна. Это действие, классически называемое геномным эффектом, происходит в течение нескольких часов или дней, что согласуется с типичными функциями гормонов, включая регуляцию роста, развития и метаболизма клеток (2).Однако также сообщалось о другом механизме действия, называемом негеномным или экстраядерным эффектом, который способствует быстрым ответам в клетках и происходит в течение нескольких минут или даже секунд после воздействия TH. Такие эффекты действительно известны в течение многих лет, хотя лежащие в их основе механизмы все еще плохо изучены (6). Было описано, что несколько внутриклеточных путей ответственны за TH-опосредованные цитоплазматические действия, включая пути MAPK, протеинкиназы C и PI3K-протеинкиназы B / Akt.Совместная локализация TRβ ₁ с Akt, но не с PI3K, а также отсутствие эффекта ингибиторов PI3K на фосфорилирование Akt, индуцированное T ₃ , и продукцию IL-12, подтверждают концепцию PI3K-независимого механизм активации Akt. Более того, отсутствие фосфорилирования ERK 1/2, p38 или JNK вместе с устойчивым фосфорилированием Akt, индуцированным T ₃ , даже в присутствии ингибитора PKA не учитывает участие других основных сигнальных путей в эффектах T ₃ .В свою очередь, совместная локализация TRβ ₁ и Akt не зависела от добавления T ₃ , тогда как для фосфорилирования Akt требовалось связывание T ₃ со своим специфическим рецептором. Следовательно, после связывания T ₃ с TR ₁ могут быть вызваны другие молекулярные и / или биохимические события. В нескольких сообщениях предлагались независимые от PI3K механизмы активации Akt, вызванные различными агентами, включая форсколин, хлорфенилтио-цАМФ, простагландин-E ₁ и 8-бром-цАМФ, которые, как было показано, активируют Akt через PKA.В этом отношении Akt может быть активирован с помощью Ca ²⁺ -кальмодулин-зависимой киназы с активностью in vitro или клеточным стрессом через ассоциацию с Hsp27. Кроме того, изопротеренол, β-адренергический агент, может активировать Akt устойчивым к вортманнину образом (33). В свою очередь, многие белки, как сообщалось, взаимодействуют с Akt, способствуя соответствующим биологическим функциям, включая Hsp27, в котором взаимодействие с Akt приводит к ингибированию апоптоза нейтрофилов (34). Маловероятно, что T ₃ -связанный TRβ ₁ мог фосфорилировать Akt, поскольку он не обладает киназной активностью.Тем не менее, образование множественного белкового комплекса, связанного с T ₃ -связанным TRβ ₁ -Akt, который включает фермент с киназными свойствами, может быть ответственным за быстрое фосфорилирование Akt, запускаемое T ₃ . Однако точные внутриклеточные события, запускаемые взаимодействиями T ₃ -TRβ ₁ , и / или молекулярная идентичность этой предполагаемой киназы Akt остаются неуловимыми. Однако отсутствие эффекта CHX на фосфорилирование Akt, индуцированное T ₃ , не подтверждает участие вновь синтезированного белка в этом процессе.Недавно другие авторы также сообщили об опосредованном T ₃ цитоплазматическом действии в β панкреатических клетках посредством механизмов, включающих TRβ ₁ и активацию Akt; однако этот эффект включал совместную локализацию PI3K с TRβ ₁ и был чувствителен к ингибиторам PI3K (10). С другой стороны, хотя обработка T ₃ не вызывала изменений во взаимодействии PPA2-Akt или снижения экспрессии PPA2, нельзя полностью исключить ингибирование активности фосфатазы как альтернативный механизм, ответственный за индуцированное T ₃ фосфорилирование Akt.

Примечательно, что активация Akt, зависящая от T ₃ , быстро индуцировалась на DC и продолжалась в течение нескольких часов. Это открытие имеет физиологическое и терапевтическое значение, поскольку было показано, что активация Akt имеет решающее значение для обеспечения выживания DC (35). Следовательно, манипулирование активацией Akt с помощью передачи сигналов T ₃ -TRβ ₁ открывает новые возможности для терапевтического использования иммуногенности, присущей ДК, для разработки более эффективных противоопухолевых вакцин на основе ДК (35).

Повышенная продукция IL-12 в DC, обработанных T ₃ , была полностью устранена фармакологическим или siRNA-опосредованным нарушением путей Akt или NF-κB. Эти результаты контрастируют с результатами, полученными с использованием LPS в качестве стимула, когда только ингибиторы NF-κB значительно предотвращали увеличение частоты продуцирующих IL-12 CD11c ⁺ DC (36, 37). В связи с этим активация Akt влечет за собой сложную серию событий с участием дополнительных белков. При фосфорилировании Akt может быстро перемещаться в определенные внутриклеточные компартменты и усиливать определенные процессы передачи сигналов.Эта последовательная серия событий необходима для генерации полностью активированного Akt и была продемонстрирована также в экспериментальных моделях (10).

В нашем исследовании обработка T ₃ запускала транслокацию активного Akt в ядро, тем самым давая этой киназе возможность дополнительно регулировать экспрессию и / или активность ядерных белков, участвующих в физиологии и выживании DC. Это открытие предполагает двойную роль индуцированной T ₃ активации Akt, действующей как в цитоплазматическом, так и в ядерном компартментах.Хотя в отсутствие T ₃ , экспрессия TRβ ₁ была существенно ниже в ядре по сравнению с цитоплазмой ДК (17), значительный пул TRβ ₁ перемещался в ядро ​​после воздействия этого гормона щитовидной железы, согласуется с другими типами клеток (29). Следовательно, нельзя исключить участие классического геномного пути TRβ ₁ .

Учитывая ряд отчетов, подчеркивающих независимость рецептора TH в цитоплазматических функциях, опосредованных T ₃ (6), критически важным вопросом, который мы хотели решить, был вопрос о том, является ли TRβ ₁ важным или нет для T ₃ — опосредованные иммуностимулирующие эффекты.С помощью siRNA-опосредованных стратегий сайленсинга мы обнаружили существенную роль TRβ ₁ в контроле созревания, передачи сигналов и функции DC, о чем свидетельствует снижение экспрессии костимулирующих молекул на клеточной поверхности, снижение продукции IL-12, нарушенное фосфорилирование Akt и неизменные уровни IκB-ϵ и IκB-α после добавления T ₃ к TRβ ₁ нокдаун нокдаун iDC. Эти результаты подтверждают актуальность цитоплазматической экспрессии TRβ ₁ в опосредовании эффектов T ₃ в компартменте DC и предсказывают важные нарушения в инициации адаптивного иммунитета у пациентов, страдающих синдромом резистентности к TH, которые несут нефункциональный TRβ ₁ (38) .В связи с этим Baumann et al. (29) продемонстрировал, что TRβ ₁ быстро перемещается между ядром и цитоплазмой. Возможные перекрестные помехи между негеномной и геномной передачей сигналов TH сложны и еще предстоит полностью выяснить; однако эти эффекты, по-видимому, действуют синергетически, модулируя клеточные процессы. Постулируемый негеномный сигнальный путь может быть дополнен ядерными действиями гормона щитовидной железы, которые могут усиливать систему за счет генерации вторичных мессенджеров и активации множества сигнальных каскадов.Иллюстрируя эту концепцию, геномные и негеномные эффекты TH также оказываются поразительно синергетическими в митохондриальном компартменте (39). Эти находки раскрывают сложность передачи сигналов TR и подтверждают, что цитоплазматический TR с высокой гомологией со своим ядерным аналогом может участвовать в индуцированном T ₃ созревании DC. Малые интерферирующие РНК, сконструированные для специфического действия на ядерную мРНК TRβ ₁ , могут подавлять как цитоплазматический, так и ядерный TRβ ₁ без различения (данные не показаны).Кроме того, коммерческое моноклональное антитело, полученное против ядерного TR (см. «Экспериментальные процедуры»), четко распознало цитоплазматический белок, ответственный за эффекты T ₃ , подтверждая нашу гипотезу о цитоплазматическом TR с поразительным сходством с ядерным TR.

Образование связанных с лигандом комплексов TR является критическим этапом в регуляции функций TH, а регуляция уровней TR с помощью его специфического лиганда T ₃ зависит от изоформы и типа клетки (40).В нашем исследовании обработка T ₃ индуцировала значительное увеличение экспрессии TRβ ₁ на DC, и неожиданно ингибиторы NF-κB предотвратили индуцированную T ₃ повышающую регуляцию TRβ ₁ . Из раннего клонирования гена TRB1 и изучения его промоторной области было сообщено о нескольких консенсусных сайтах для многих факторов транскрипции (31, 41). Здесь мы идентифицировали функциональный консенсусный сайт для NF-κB, расположенный от -644 до -652 п.н. до исходного сайта транскрипции ATG.Следовательно, усиленная экспрессия TRβ ₁ , зарегистрированная после воздействия на iDCs T ₃ , может быть достигнута, по крайней мере частично, за счет стимуляции передачи сигналов NF-κB, тем самым облегчая положительную регуляторную петлю, в которой T ₃ регулирует Экспрессия TRβ ₁ и, в свою очередь, TRβ ₁ опосредует передачу сигналов T ₃ . С другой стороны, было продемонстрировано, что классические промоторы, регулируемые NF-κB, становятся дерепрессированными за счет рекрутирования ассоциированной с хроматином киназы IκB α, которая отвечает за стимуляцию ядерного экспорта и деградацию медиатора сайленсинга ретиноидных и TH рецепторов и рекрутирование обоих гистонацетилтрансфераза и АТФ-зависимые ремоделирующие комплексы (42).Этот механизм также может вносить вклад в повышенную экспрессию TRβ ₁ на DC после активации NF-κB, индуцированной T ₃ . Интересно, что другие ядерные рецепторы, по-видимому, также регулируются NF-κB, поскольку этот фактор транскрипции специфически связывает промоторную область -574 / -565 рецептора андрогена, которая опосредует репрессию его транскрипции (43).

В заключение, это исследование подчеркивает новый механизм, с помощью которого передача сигналов T ₃ -TRβ ₁ модулирует созревание DC посредством активации Akt- и NF-κB-зависимого, но PI3K-независимого пути.Наконец, наши данные подчеркивают возможную регуляторную петлю, с помощью которой передача сигналов T ₃ способствует дальнейшей экспрессии TRβ ₁ посредством механизмов, включающих функциональные взаимодействия фактора транскрипции NF-κB с промоторной областью гена TRB1 .

Создание индуцибельных иммортализованных дендритных клеток с надлежащей иммунной функцией in vitro и in vivo

Abstract

Дендритные клетки — профессиональные антигенпредставляющие клетки врожденного иммунитета и ключевые игроки в поддержании баланса иммунных ответов.Исследования дендритных клеток в основном ограничены их низким числом in vivo и сложным содержанием in vitro . Мы дифференцировали клетки костного мозга от трансгенных мышей, экспрессирующих индуцибельный большой Т-антиген SV40, в дендритные клетки. После иммортализации дексаметазоном и доксициклином эти клетки были стабильны в длительной культуре. В отсутствие дексаметазона и доксициклина (деиндукция) дендритные клетки проявляли свойства первичных клеток, характеризующиеся экспрессией классических маркеров поверхности дендритных клеток CD11c, CD11b, MHCII, CD40 и CD86.Кроме того, деиндуцированные липополисахариды активировали дендритные клетки, секретирующие IL-1β, IL-6, TNFα и IL-12. Деиндуцированные дендритные клетки, нагруженные овальбумином, поляризуют CD4 ⁺ Т-клетки в клетки Th2, Th27 и Th3, что указывает на их правильную антигенпредставляющую способность. В соответствии с интратрахеальным применением нагруженных овальбумином первичных дендритных клеток мышам, применение деиндуцированных дендритных клеток приводило к привлечению лимфоцитов в легкие. Таким образом, мы успешно увеличили дендритные клетки, используя условную иммортализацию.Созданные дендритные клетки демонстрируют характерный иммунофенотип первичных дендритных клеток и будут способствовать дальнейшим исследованиям иммуномодулирующих свойств дендритных клеток.

Образец цитирования: Richter C, Thieme S, Bandoła J, Laugsch M, Anastassiadis K, Brenner S (2013) Создание индуцибельных иммортализованных дендритных клеток с правильной иммунной функцией In Vitro и In Vivo . PLoS ONE 8 (4): e62621. https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0062621

Редактор: Силке Аппель, Бергенский университет, Норвегия

Поступила: 13 декабря 2012 г .; Одобрена: 22 марта 2013 г .; Опубликован: 23 апреля 2013 г.

Авторские права: © 2013 Richter et al. Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа была поддержана грантом на совместные исследования SFB-655 (DFG, SFB-655, проект B6 — SB, проект B1 — KA), DFG (грант RI 2082 / 1-1 для CR) и Центр регенеративной терапии, Дрезден. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Дендритные клетки, являющиеся стражами между врожденным и адаптивным иммунитетом, поддерживают баланс защиты от патогенов и толерантности к собственным белкам.Для выполнения этой задачи дендритные клетки располагаются в различных лимфатических и нелимфатических тканях, где они постоянно обнаруживают чужеродные молекулы. Дендритные клетки были открыты в 1970-х годах как иммунные клетки с уникальными свойствами, отличными от макрофагов и моноцитов [1]. В течение последних десятилетий дендритные клетки мышей были разделены на пять основных подгрупп в соответствии с их происхождением, локализацией и профилем экспрессии [2]. Обычные дендритные клетки (кДК) включают кДК CD8α-типа [3] — [5] и кДК CD11b-типа [6], [7], плазматические дендритные клетки (пДК) [8], [9], клетки Лангерганса в кожа [10] и воспалительные дендритные клетки, происходящие из моноцитов (Mo-DC) [11].

Оборудованные множеством рецепторов распознавания патогенов (PRR), дендритные клетки различают собственные и чужие молекулы [12], [13]. После распознавания чужеродных патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (PAMP) через Toll-подобные рецепторы (TLR) дендритные клетки переключаются в режим защиты, поглощают чужеродные белки и представляют обработанные пептиды наивным Т-клеткам в дренирующих лимфатических узлах. Для полной активации Т-клеток требуется три сигнала от дендритных клеток.После презентации чужеродных пептидов через MHC класса II активируются костимуляторные молекулы, такие как CD80 и CD86. После созревания дендритных клеток секретируются провоспалительные цитокины, и наивные Т-клетки поляризуются в специфические эффекторные Т-клетки CD4 ⁺ [14] — [17]. В зависимости от цитокинов, секретируемых дендритными клетками, наивные Т-клетки поляризуются в эффекторные Т-клетки Th2, Th3 или Th27. Острый воспалительный ответ, характеризующийся эффекторными клетками Th2, в основном опосредуется цитокином IL-12p70, происходящим из дендритных клеток.Аллерген-опосредованный иммунный ответ характеризуется индукцией клеток Th3, поляризованных дендритными клетками, продуцирующими IL-10, или pDC, продуцирующими IFNα [18]. В отличие от острой воспалительной реакции, индуцированные IL-23 эффекторные клетки Th27 больше связаны с хроническим воспалением и связаны с онкогенезом [19], [20].

Помимо поляризации эффекторных Т-клеток CD4 ⁺ , дендритные клетки с экспрессией CD8α обладают способностью индуцировать ответ цитотоксических Т-клеток посредством процесса, известного как перекрестная презентация [21].Хотя дендритные клетки не инфицированы патогеном напрямую, они могут представлять экзогенные антигены через молекулы MHC класса I и, следовательно, активировать наивные CD8 ⁺ Т-клетки для поляризации в цитотоксические Т-клетки. Перекрестная презентация и активация цитотоксических Т-клеток важны для защиты от внутриклеточных патогенов и опухолевых клеток.

В последние годы потенциал и важная роль дендритных клеток в организации адаптивного иммунного ответа были изучены более подробно.Тщательные исследования дендритных клеток для иммунотерапии требуют стандартизированных, воспроизводимых экспериментальных условий. В следующем исследовании мы создали условно иммортализованные дендритные клетки с классическими свойствами дендритных клеток и стабильным фенотипом в долгосрочной перспективе. Эта линия дендритных клеток позволит функциональным исследованиям выявить иммунную регуляцию.

Результаты

Генерация индуцированных иммортализованных дендритных клеток с незрелым фенотипом

Первичные дендритные клетки трудно культивировать в течение длительного периода времени без потери своего незрелого состояния и своих характерных свойств.Чтобы преодолеть эту проблему, мы изолировали клетки костного мозга от бессмертной мыши с регулируемой тетрациклином экспрессией большого Т-антигена SV40 и дифференцировали эти клетки в дендритные клетки с помощью GM-CSF в течение 7 дней. Затем клетки обрабатывали дексаметазоном (Dex) и доксициклином (Dox), чтобы вызвать иммортализацию. Мы назвали клетки индуцированными иммортализованными дендритными клетками (iniDCs). После 2 недель культивирования были видны очевидные различия в морфологии клеток. Обработка Dex / Dox привела к образованию небольших круглых, менее прилипающих клеток (iniDC) по сравнению с необработанными дендритными клетками костного мозга (BM-DCs; рис. 1A).Затем iniDCs были деиндуцированы (в отсутствие Dex / Dox) в течение 3-5 дней, чтобы проверить, восстанавливают ли они морфологический фенотип BM-DCs. И действительно, мы наблюдали, что деиндуцированные клетки (de-iniDC) демонстрируют морфологию, аналогичную BM-DC (рис. 1A).

Рисунок 1. Морфология, клеточный цикл и пролиферация.

(A) Микроскопические изображения BM-DC, iniDC и de-iniDC через 3 дня после деиндукции при 10-кратном увеличении. И BM-DC, и de-iniDCs демонстрируют адгезивный фенотип с типичным образованием дендритов.(B) Пролиферацию iniDCs и de-iniDCs анализировали путем подсчета клеток в гемоцитометре в течение 6 дней. (C) Процент мертвых клеток, подсчитанный за период времени 6 дней. (D) Апоптоз и некроз iniDC, 3- и 5-дневные культивированные de-iniDCs анализировали с использованием антител против аннексинаV-PE и DAPI. Дот-блоты отображают клетки, окрашенные аннексином V и DAPI. (E) Для анализа клеточного цикла iniDCs, 3- и 5-дневные культивированные de-iniDCs были окрашены PI и проанализированы с помощью проточной цитометрии. Стадии клеточного цикла G1 (левый пик), S (средний) и G2 (правый пик) были рассчитаны с помощью модели Дина-Джетта-Фокса с использованием программного обеспечения FlowJo.Анализы пролиферации, апоптоза и клеточного цикла проводили в трех независимых экспериментах. Для анализа апоптоза и клеточного цикла приводится результат репрезентативного эксперимента.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0062621.g001

Чтобы получить информацию о свойствах пролиферации iniDC и de-iniDC, мы подсчитали жизнеспособные и мертвые клетки. Мы наблюдали время удвоения около 70 часов для iniDC (рис. 1B). Пролиферация de-iniDC прекращалась через 2–3 дня после прекращения приема Dex / Dox, после чего следовало уменьшение количества клеток (рис. 1B) и увеличение количества мертвых клеток (рис. 1C).Используя окрашивание CFSE, мы подтвердили постоянную скорость пролиферации iniDC и остановку пролиферации после деиндукции iniDC (данные не показаны). Параллельно анализировали апоптоз и некроз iniDC и de-iniDC с помощью окрашивания анти-аннексином V и DAPI. Как и ожидалось, деиндукция иммортализации привела к усилению апоптоза (iniDCs 1,48%, 3d de-iniDCs 15,7% и 5d deiniDCs 46,4%) и некрозу (iniDCs 0,192%, 3d de-iniDCs 3,27% и 5d de-iniDCs 14,2%). %) во время длительного культивирования (рисунок 1D).Затем мы выполнили анализ клеточного цикла с помощью окрашивания пропидиум йодидом (PI). IniDCs и de-iniDCs показали различия в стадиях G1, S и G2 клеточного цикла. В то время как iniDC и 3-дневные культивированные de-iniDC показали лишь незначительные различия (G1: 64,2% против 62,4%, S: 9,61% против 11,1% и G2: 19,4% против 16,6%), 5-дневные культивированные de-iniDCs демонстрируют сильно сниженный синтез ДНК (стадия S: 2,14%) и накапливаются на стадии G1 (G1: 71,7%; Рисунок 1D).

Было обнаружено, что iniDCs стабильны при длительном культивировании (> 25 пассажей), а функция iniDC и de-iniDC не пострадала после нескольких циклов замораживания / оттаивания.

Субпопуляции дендритных клеток различаются по профилю маркеров специфической клеточной поверхности.

В связи с тем, что iniDCs были дифференцированы с помощью GM-CSF из клеток костного мозга, мы ожидали, что профиль маркеров клеточной поверхности для de-iniDCs подобен обычным дендритным клеткам. Исследуя фенотип de-iniDC, клетки культивировали в течение 5 дней в отсутствие Dex / Dox. Затем иммуноокрашивание маркерами субнабора дендритных клеток CD11c, CD8α, CD11b, B220 и Ly6C проводили для iniDC, de-iniDC и BM-DC.Высокая экспрессия CD11c и CD11b была обнаружена в de-iniDC и BM-DC, тогда как единичные положительные клетки CD8α не обнаруживались (рис. 2A). Напротив, мы обнаружили во всех клетках CD11b ⁺ сдвиг MFI в сторону экспрессии CD8α (рис. 2А). Кроме того, часть de-iniDCs и BM-DCs положительны для Ly6C, но мы не обнаружили плазмоцитоидных дендритных клеток, которые являются дважды положительными для Ly6C и B220 (рис. 2A). В отличие от de-iniDC, iniDC демонстрировали сильно сниженную экспрессию CD11c и Ly6C и демонстрировали пониженную экспрессию CD11b.

Рисунок 2. Экспрессия маркера поверхности дендритных клеток.

(A) BM-DC, iniDC и 3-дневные культивированные de-iniDC были окрашены антителами против маркеров субпопуляции дендритных клеток CD11c, CD8α, CD11b, B220 и Ly6C. Клетки CD11c ⁺ (черная кривая) дополнительно стробировали на CD8α и CD11b, Ly6C и B220 (контурные блоты). Ворота для CD8α и CD11b, Ly6C и B220 были установлены на соответствующем неокрашенном контроле (красный). (B) Незрелые и зрелые BM-DC, iniDC и deiniDC окрашивали на MHCII, CD40 и CD86.Мертвые клетки (окрашивание DAPI) и дублеты клеток исключались. Гистограммы показывают изотипический контроль (серый, пунктирный), незрелые клетки (серый) и LPS-зрелые клетки (черный). Приведен результат одного репрезентативного эксперимента.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0062621.g002

Незрелый фенотип дендритных клеток характеризуется низкой экспрессией MHCII и костимулирующих молекул. Чтобы изучить фенотип наших дендритных клеток, мы окрашивали незрелые и созревшие ЛПС iniDC и deiniDCs с флуорохром-конъюгированными антителами против маркеров созревания MHCII, CD40 и CD86.Хотя мы обнаружили низкую экспрессию MHCII в нестимулированных iniDC и de-iniDC, стимуляция LPS приводит к усилению экспрессии этой молекулы (рис. 2B). Хотя CD40 и CD86 уже экспрессировались в нестимулированных iniDC и де-iniDC, оба были сильно активированы во время созревания с помощью LPS. В отличие от маркеров дендритных клеток CD11c и CD11b (Рисунок 2A) и молекулы MHCII (Рисунок 2B), экспрессия CD40 и CD86 не зависела от лечения Dex / Dox (Рисунок 2B).

Цитокиновая секреция de-iniDC сравнима с секрецией дендритных клеток костного мозга

Дендритные клетки, активируемые их Toll-подобными рецепторами (TLR), продуцируют различные цитокины, такие как IL-1β, IL-6, TNFα и IL-12.Поэтому мы стимулировали iniDC и BM-DC с помощью LPS (TLR4) в течение 24 часов. Секретируемые цитокины измеряли в супернатанте клеточной культуры. Мы обнаружили высокие уровни IL-1β, IL-6, IL-12p70 и TNFα в супернатанте BM-DC (рис. 3, белые столбцы), тогда как iniDC показали заметно сниженные уровни цитокинов IL-1β и IL-12p70 (рис. 3, черные полосы). Чтобы проверить, продуцируют ли наши de-iniDC уровни цитокинов, сравнимые с BM-DC, мы измерили цитокины после стимуляции LPS в 3-дневных деиндуцированных клетках.Мы обнаружили высокие уровни IL-1β, IL-6 и TNFα, сравнимые с уровнями дендритных клеток костного мозга (рис. 3, серые столбцы), тогда как мы обнаружили более низкий уровень IL-12p70 (рис. 3). Однако экспрессия IL-12p70 хорошо определялась по внутриклеточному окрашиванию специфическим антителом против субъединицы p35 IL-12 (см. Ниже). Экспрессия IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, IL-17A и IFNγ в супернатанте не обнаруживалась (данные не показаны).

Рисунок 3. Цитокиновый профиль дендритных клеток.

BM-DC, iniDC и de-iniDC стимулировали LPS (1 мкг / мл) в течение 24 часов.Секрецию IL-1β, IL-6, IL-12p70 и TNFα измеряли в супернатанте неиндуцированных BM-DC (белые столбцы), iniDC (черные столбцы) и de-iniDC (серые столбцы) через CBA. Для каждого цитокина дано среднее значение ± SEM трех независимых экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0062621.g003

Де-iniDC поляризуют наивные Т-клетки в эффекторные Т-клетки CD4

⁺ и активируют Т-клетки CD8 ⁺ посредством перекрестной презентации

Наши результаты демонстрируют успешное создание условно иммортализованных дендритных клеток.Однако iniDC представляют собой гетерогенную популяцию дендритных клеток с различиями в уровнях экспрессии поверхностных маркеров и секреции цитокинов. Чтобы получить линию дендритных клеток с определенными свойствами, мы создали одноклеточные клоны iniDC. Стабильно растущие клоны одиночных клеток непрерывно культивировали и анализировали на предмет их экспрессии CD11c и секреции IL-12 как ключевых маркеров фенотипа дендритных клеток. Поскольку мы обнаружили низкие уровни IL-12 в супернатанте, мы измерили этот цитокин с помощью внутриклеточного окрашивания.Мы отобрали 8 одноклеточных клонов, деиндуцировали их в течение 3 дней и окрашивали на поверхностную экспрессию CD11c и уровень внутриклеточного IL-12 после стимуляции LPS. Мы обнаружили различия в уровнях экспрессии CD11c (рис. 4A) и продукции IL-12 (рис. 4B) среди различных клонов клеток. В то время как все клоны клеток демонстрировали гомогенный сдвиг в сторону более высокой экспрессии CD11c, как измерено по средней интенсивности флуоресценции, количество положительных по CD11c клеток варьировалось от примерно 64% ​​до почти 100% по сравнению с изотипическим контролем (рис. 4A).Уровень экспрессии IL-12 был обнаружен в 2–50% CD11c-положительных клеток, стимулированных LPS (фиг. 4B), в то время как уровень экспрессии CD11c не коррелировал с уровнем IL-12. Созревание клонов deiniDC во время стимуляции LPS подтверждалось экспрессией MHCII, CD86 и CD40 (данные не показаны). Для дальнейшей характеристики de-iniDCs мы использовали клон одной клетки №1, демонстрирующий наивысшую экспрессию CD11c и IL-12p35 (рис. 4A и B, №1).

Рисунок 4. Экспрессия CD11c и продукция IL-12 в клонах единичных клеток.

Клоны единичных клеток De-iniDC стимулировали LPS или оставляли без обработки в течение 24 часов в присутствии ингибитора транспорта белка Монензина. После этого клетки окрашивали на поверхностный маркер CD11c, пермеабилизировали и окрашивали на внутриклеточный IL-12. (A) Отображается экспрессия CD11c (черный) клеток, стимулированных LPS. (B) Показан уровень внутриклеточной экспрессии IL-12 CD11c ⁺ LPS-стимулированных (черный) и нестимулированных клеток (серый). Изотипический контроль отображается как серая пунктирная кривая (A, B).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0062621.g004

Чтобы проверить, способен ли наш клон de-iniDC № 1 представлять антигены наивным Т-клеткам, мы проанализировали пролиферацию и секрецию цитокинов (IFNγ, IL -13, IL-17) CD4 ⁺ Т-клеток в экспериментах по совместному культивированию. CD11c ⁺ DC, полученные из костного мозга, использовали в качестве положительного контроля. Индукция пролиферации Т-клеток предварительно загруженным OVA клоном de-iniDC № 1, измеренная с помощью окрашивания CFSE, была сравнима с индукцией предварительно загруженными OVA BM-DC (фиг. 5A).Кроме того, мы обнаружили повышенную секрецию ИЛ-2 в качестве маркера пролиферации (рис. 5В). Подобно нагруженным OVA BM-DC, наши de-iniDC клонируют поляризованные CD4 ⁺ Т-клетки в типы Th2, Th3 и Th27, характеризующиеся секрецией IFNγ (46,99 ± 3,244 пг / мл), IL-13 (116,1 ± 5,195 пг / мл) и IL-17 (152,7 ± 34,66 пг / мл; фиг. 5C). Когда они не находятся в совместном культивировании, только Т-клетки, клон deiniDC № 1 или BM-DC не пролиферируют и не секретируют IFNγ, IL-17 и IL-13 (данные не показаны).

Рисунок 5.Презентация антигена de-iniDC клона №1 и BM-DC Т-клеткам.

Клон De-iniDC № 1 или BM-DC инкубировали с OVA (13,5 мкг / мл) в течение 24 часов перед совместным культивированием с OTII / CD45.1 CD4 ⁺ Т-лимфоцитами или OTI CD8 ⁺ Т-клетками. . (A) Пролиферацию CD4 ⁺ Т-клеток измеряли с помощью окрашивания CFSE и анализировали с помощью проточной цитометрии. (B) Секрецию IL-2 измеряли с помощью CBA. (C) CD4 ⁺ Цитокины, секретируемые Т-клетками. IFNγ, IL-13 и IL-17 измеряли в супернатанте клеточной культуры с использованием CBA через 48 часов.(D) Пролиферацию Т-клеток CD8 ⁺ измеряли с использованием окрашивания CFSE и проточной цитометрии. (E) CD8 ⁺ Цитокины, секретируемые Т-клетками IL-2 и IFNγ, измеряли в супернатанте с использованием CBA через 48 часов. Результаты трех-четырех независимых экспериментов представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего, (н.о.) не обнаруживается. Статистическая значимость обозначена * (P <0,05), ** (P <0,01) и *** (P <0,001).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0062621.g005

Наши de-iniDC также экспрессируют CD8α (рис. 2A).Чтобы доказать, обладают ли они способностью к перекрестному представлению, мы совместно культивировали OVA-импульсный de-iniDC клон № 1 с CD8 ⁺ Т-клетками и обнаружили повышенную пролиферацию Т-клеток (рис. 5D). В супернатанте совместного культивирования с загруженным OVA клоном de-iniDC №1 мы обнаружили повышенные уровни IL-2 и IFNγ (рис. 5E). Таким образом, наши de-iniDC представляют антигены эффекторных CD4 ⁺ и цитотоксических лимфоцитов CD8 ⁺ .

Применяемые интратрахеально de-iniDCs индуцируют адаптивный иммунитет в легких

Чтобы исследовать, являются ли de-iniDC функциональными in vivo , мы применили клон deiniDC, нагруженный OVA или обработанный имитацией (PBS), и CD11c ⁺ BM-DC к легким OTII / CD45.1 мышь путем интратрахеального применения. Мы обнаружили значительно увеличенное количество клеток в жидкости БАЛ у мышей, получавших OVA-нагруженные de-iniDC (1,42 × 10 ⁵ ± 0,174) и BM-DC (1,7 × 10 ⁵ ± 0,286), соответственно, по сравнению с мышами, которые получали получили имитационно обработанные клетки (de-iniDC: 0,86 × 10 ⁵ ± 0,103; BM-DC: 0,94 × 10 ⁵ ± 0,087; фиг. 6A). Контрольные мыши, которые получали PBS без клеток, показали сравнимое количество клеток в жидкости BAL с мышами, которые получали ложно обработанные клетки (фигура 6A, черная полоса, 0.8 × 10 ⁵ ± 0,2). Анализ клеток ЖБАЛ с помощью проточной цитометрии выявил значительно более высокий процент нейтрофилов CD66a ⁺ у мышей, получавших OVA-нагруженные de-iniDC (70,42 ± 7,55%) или BM-DC (75,95 ± 3,02%; рис. 6B) по сравнению с мышами. которые получали либо обработанные имитацией клетки, либо PBS без клеток (de-iniDC: 37,94 ± 4,04%; BM-DC: 43,84 ± 4,84%; без клеток: 27,8 ± 12,4%; фиг. 6B).

Рисунок 6. In vivo иммунный ответ, индуцированный de-iniDC и BM-DC.

(A) Через 48 часов после интратрахеального введения клеток жидкость БАЛ собирали и клетки подсчитывали с помощью гемоцитометра.(B) Процент нейтрофилов CD66a ⁺ в БАЛ анализировали с помощью проточной цитометрии. (C) Процент CD3 ⁺ Т-клеток в БАЛ спровоцированных мышей анализировали с помощью проточной цитометрии. (D) Количество макрофагов F4 / 80 ⁺ в жидкости БАЛ анализировали с помощью проточной цитометрии. (E) Секрецию цитокинов Т-лимфоцитами измеряли в БАЛ с помощью CBA. (F) Окрашенные Май-Грюнвальдом-Гимзой препараты цитоспина демонстрируют рекрутированные эозинофилы. (G) Залитые парафином срезы легких окрашивали гематоксилином и эозином.Результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего для 5 мышей на группу. Показана статистическая значимость * (P <0,05) и ** (P <0,01).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0062621.g006

Кроме того, мы использовали мышиную модель астмы для исследования активации Т-клеток де-iniDCs in vivo . Клон deiniDC № 1, нагруженный OVA, и BM-DC CD11c ⁺ вводили внутрихеально мышам C57BL / 6. После провокации аэрозолем OVA жидкость BAL мышей, которым вводили загруженный OVA клон de-iniDC № 1 или BM-DC, содержала значительно большее количество Т-клеток CD3 ⁺ по сравнению с жидкостью BAL мышей, которым вводили имитационно обработанные клетки ( Рисунок 6C).Напротив, количество макрофагов значительно уменьшилось в ЖБАЛ мышей, получавших загруженный OVA клон de-iniDC № 1 или нагруженные OVA BM-DC (фигура 6D). Поскольку экспериментальная модель астмы склонна к Th3 (аллергии), мы измерили соответствующие цитокины в жидкости БАЛ. У мышей, которые получали загруженный OVA клон de-iniDC № 1 или нагруженные OVA BM-DC, мы обнаружили значительно повышенные уровни IL-4, IL-5 и IL-13 по сравнению с мышами, которые получали имитационно обработанные клетки (рис. 6E ). Кроме того, мы обнаружили повышенное количество эозинофилов в анализах цитоспина у мышей, получивших загруженный OVA клон de-iniDC № 1 или BM-DC (рис. 6F).Мы обнаружили массивную инфильтрацию иммунных клеток вокруг бронхов в гистологических срезах легких, окрашенных H&E (рис. 6G). Используя эту модель мышиной астмы, мы показали, что de-iniDCs представляют собой функциональные антигенпредставляющие клетки in vivo .

Эффективная опосредованная лентивирусным вектором экспрессия трансгена в iniDC без иммуногенного побочного эффекта

Функциональные исследования дендритных клеток не только ограничены их низкой частотой или ограниченной выживаемостью in vitro , но также генетически модифицированные первичные клетки могут быть активированы введенной ДНК / РНК или самой процедурой трансфекции.Чтобы проанализировать эффективность трансдукции iniDC и выяснить, активируются ли они во время этого процесса, мы трансдуцировали клон iniDC № 8 с помощью лентивирусных векторных частиц, обеспечивающих экспрессию RFP. Мы достигли скорости трансдукции около 30-40%, количественно определяемой уровнем экспрессии RFP с помощью проточной цитометрии (рис. 7A, серая линия). Отбор пуромицином трансдуцированных клеток в течение 72 часов привел к ~ 98% RFP-положительных клеток (фигура 7A, черная линия). Трансдуцированные iniDCs и de-iniDCs окрашивали на маркеры созревания MHCII, CD40 и CD86.Мы обнаружили низкую экспрессию MHCII, CD40 и высокую экспрессию CD86 в нестимулированных клетках (фигура 7B, серый цвет). Кроме того, трансдуцированные клетки стимулировали LPS для получения зрелого фенотипа. Как и ожидалось, мы обнаружили сильно увеличенную экспрессию MHCII, CD40 и CD86 (рис. 7B, черный).

Рисунок 7. Экспрессия трансгена, опосредованная лентивирусным вектором, в iniDC.

(A) Уровень экспрессии RFP измеряли в нетрансдуцированных (серые точки) и трансдуцированных частицами лентивирусного вектора iniDC до (серый) и после (черный) отбора пуромицина.(B) Уровень экспрессии маркеров созревания MHCII, CD40 и CD86 определяли в трансдуцированных iniDC и после их деиндукции (de-iniDC) с помощью проточной цитометрии. Показаны трансдуцированные iniDC и de-iniDC (серые) и стимулированные LPS трансдуцированные iniDC и de-iniDC (черные). Элементы управления изотипом отображаются в виде серых пунктирных линий. Показан один репрезентативный эксперимент из 3.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0062621.g007

Обсуждение

Дендритные клетки являются одним из ключевых игроков, соединяющих врожденный и адаптивный иммунитет.Исследования свойств и функций первичных дендритных клеток в основном ограничены из-за их малого количества в тканях и крови. Дендритные клетки, полученные из костного мозга мышей, и дендритные клетки Лангерганса кожи можно размножать и культивировать только в течение короткого периода времени с использованием GM-CSF [22], [23]. Чтобы преодолеть эти ограничения, мы создали индуцибельные иммортализованные дендритные клетки мышей с характерными свойствами первичных дендритных клеток. Мы изолировали клетки костного мозга от трансгенных мышей с помощью большого Т-антигена SV40, индуцируемого дексаматазоном и доксициклином, и дифференцировали эти клетки в дендритные клетки с помощью GM-CSF.Дендритные клетки, индуцированные Dex / Dox, демонстрируют постоянную скорость пролиферации и могут легко увеличиваться за время удвоения около 70 часов. В отсутствие Dex и Dox (деиндукция) клетки останавливают большую экспрессию Т-антигена и, таким образом, теряют свою иммортализованную стадию. По сравнению с iniDCs, de-iniDCs представляют собой первичный фенотип дендритных клеток, имеют замедленную скорость пролиферации и демонстрируют усиленный апоптоз и некроз при продолжительном культивировании (Рисунок 1). За последние годы было создано несколько линий дендритных клеток.Большинство из них были получены путем трансфекции или трансдукции со стабильными генами, индуцирующими иммортализацию. Линия дендритных клеток DC2.4, полученных из костного мозга мышей, ретровирусно трансдуцированная трансгеном GM-CSF и онкогенами myc и raf , была получена Shen et al. [24] и недавно проанализирован более подробно [25]. Кроме того, были созданы иммортализованные дендритные клетки с чувствительным к температуре большим Т-антигеном [26], [27]. В 2011 году Baru et al. трансдуцировали гемопоэтические стволовые клетки мыши с помощью фактора транскрипции гомеодомена человека HoxB4 и дифференцировали эти клетки в функциональные дендритные клетки [28].Хотя все эти клеточные линии демонстрируют свойства и функциональность дендритных клеток, они стабильно иммортализованы. XS-52, линия дендритных клеток Лангерганса мышей была первоначально выделена из эпидермиса и успешно культивирована в присутствии GM-CSF [29]. Хотя эта клеточная линия была создана без дополнительных трансгенов, она представляет собой дендритную клетку, ограниченную эпидермисом и слизистыми оболочками, которая не подходит для множества применений. Недавно Fuertes Marraco и его коллеги установили линии дендритных клеток мышей из кДК CD8α опухоли селезенки, которые подобны нормальным кДК селезенки [30].Преимущество наших индуцибельных иммортализованных дендритных клеток заключается в полной инактивации иммортализации после деиндукции, что приводит к фенотипу, подобному первичному. В отсутствие Dex / Dox de-iniDCs экспрессируют маркеры мигрирующих дендритных клеток CD11c и CD11b и секретируют уровни цитокинов, эквивалентные первичным дендритным клеткам (Рис. 2–3).

iniDCs индуцируются Dex / Dox, Dex является мощным иммуномодулирующим глюкокортикоидом. Несколько групп показали, что Dex подавляет секрецию провоспалительных цитокинов IL-1β, IL-6, IL-12 и TNFα [31], [32].Следовательно, Т-клеточные ответы, индуцированные дендритными клетками, подавляются Dex [33], [34]. Кроме того, Dex модулирует маркеры созревания дендритных клеток CD40, CD80, CD86 и MHCII [31], [34], [35] и CD11c (рис. 2). Действительно, мы обнаружили снижение экспрессии MHCII и CD11c и снижение секреции цитокинов после индукции дендритных клеток Dex / Dox. Однако деиндукция дендритных клеток в отсутствие Dex / Dox приводила к восстановлению уровней экспрессии поверхностных маркеров и секреции цитокинов, что сравнимо с BM-DCs (рис. 3-4).В отличие от наших iniDCs и de-iniDCs, мы не смогли обнаружить увеличение экспрессии MHCII в BM-DC после стимуляции LPS (рис. 2B). Хорошо известно, что механический стресс во время изоляции и культивирования ДК приводит к усилению регуляции MHCII [36], [37]. Важно отметить, что костимулирующие молекулы CD86 и CD40 активируются после стимуляции LPS, что свидетельствует о LPS-специфическом созревании BM-DC.

Презентация антигенов наивным Т-клеткам — важное и уникальное свойство дендритных клеток.Незрелые дендритные клетки проверяют организм на наличие патогенов и чужеродных молекул. После распознавания патогенов незрелые дендритные клетки захватывают чужеродные белки, обрабатывают их и представляют эти антигены в виде небольших пептидов через молекулы MHCII наивным Т-клеткам. Наши трехдневные культивированные de-iniDCs продуцировали высокие уровни провоспалительных цитокинов. Следовательно, мы протестировали клетки на их поляризационные свойства Т-клеток. В экспериментах по совместному культивированию с OVA-специфическими Т-клетками CD4 ⁺ мы продемонстрировали, что деинидК, нагруженные OVA, индуцировали сильный ответ Th2, Th27 и Th3, обнаруживаемый по повышенной пролиферации Т-клеток и усилению IFNγ, IL-17. и уровни IL-13, соответственно (рис. 5A – C).Кроме того, наши de-iniDCs способны индуцировать пролиферацию Т-клеток CD8 ⁺ и секрецию цитокинов (рис. 5D, E). Несмотря на низкий уровень экспрессии CD8α на нашем de-iniDC, они обладают сильным потенциалом перекрестной презентации.

Главной особенностью наших iniDC является их стабильная пролиферация при лечении Dex / Dox и их неограниченный потенциал переключения между иммортализацией и первично-подобным фенотипом. Следовательно, iniDC являются отличным инструментом для детального изучения иммуномодулирующих функций или сигнальных путей в дендритных клетках.Чтобы выяснить новые функции, можно применить генную инженерию путем переноса ретровирусных генов. В плазматических дендритных клетках человека лентивирусные векторы могут вызывать ответ IFNα, который, в свою очередь, активирует созревание миелоидных дендритных клеток [38]. Активация трансдуцированных лентивирусом миелоидных дендритных клеток была продемонстрирована по их секреции цитокинов и экспрессии маркеров созревания [39]. Чтобы гарантировать, что иммунофенотип наших дендритных клеток не изменился из-за заражения вирусным вектором, мы трансдуцировали iniDC с лентивирусным вектором и исследовали характеристики клеток.Экспрессия маркеров созревания MHCII, CD40 и CD86 трансдуцированных iniDC была сравнима с экспрессией нетрансдуцированных iniDC (фигура 7B). Таким образом, трансдуцированные iniDC остаются инактивированными после трансдукции со способностью созревать при стимуляции LPS, что позволяет предположить, что трансдукция лентивирусным вектором не изменяет фенотип iniDC. Альтернативно, различные генетические модели мышей могут быть созданы путем скрещивания мышей irtTA-GBD / T-antigen с выбранным штаммом мышей, что позволяет, например, создание генной специфической нокаутной линии iniDC.

Используя модель мыши OTII / CD45.1, мы продемонстрировали, что интратрахеальное применение de-iniDCs вызывает врожденный иммунный ответ в легких, аналогичный ответу первичных DCs, происходящих из костного мозга. Более конкретно, интратрахеальное применение нагруженных OVA de-iniDC и BM-DC привело к значительно большему количеству нейтрофилов, детектируемых CD66a в качестве маркера активации нейтрофилов в жидкостях BAL, по сравнению с мышами, которым вводили ложно обработанные DC (рис. 6B) [40]. ]. Кроме того, провокация OVA привела к значительному увеличению количества Т-клеток и эозинофилов в ЖБАЛ и инфильтрации легочной ткани, демонстрируя потенциал in vivo для de-iniDCs (Рисунок 6C-E).

В этом исследовании мы создали модель дендритных клеток с индуцибельной иммортализацией и характерной иммунной функцией первичных дендритных клеток. После поглощения и презентации антигена через MHCII деинидК активируют и поляризуют наивные Т-клетки в различные эффекторные клетки. В присутствии LPS iniDCs и de-iniDCs созревают, активируются и продуцируют провоспалительные цитокины. Представленная линия дендритных клеток позволит провести функциональные исследования для выяснения иммунной регуляции.

Материалы и методы

Заявление об этике

Эксперименты на животных проводились в строгом соответствии с Законом Германии о защите животных.Протокол был одобрен Комитетом по этике Landesdirektion Dresden (номер разрешения: 24-9168.11-1 / 2010-34).

Животные

Трансгенные мыши irtTA-GBD (Immorto-mouse), скрещенные с фоном C57 / BL6, содержат большой Т-антиген SV40 под контролем индуцируемого тетрациклином промотора и кодон-оптимизированный трансактиватор обратного тетрациклина (irtTA), слитый с лиганд-связывающим доменом мутировавший рецептор глюкокортикоидов под контролем повсеместно экспрессируемого промотора CAG [41].Трансгенные мыши irtTA-GBD, трансгенные мыши OTII / CD45.1 (OVA пептид 323–339-специфический рецептор Т-клеток; любезный подарок Клаудии Васкоу (CRTD, Дрезден)) и трансгенные мыши OTI (OVA пептид 257–264-специфический Т-клеточный рецептор (подарок Рольфа Джессбергера) были выведены в условиях, свободных от патогенов.

Получение клеток костного мозга и создание дендритных клеток

Клетки костного мозга выделяли из бедренной и большеберцовой костей, промывая кости PBS, содержащим 0,5% BSA (Sigma Aldrich) и 2 мМ EDTA (Sigma Aldrich).После лизиса эритроцитов буфером для лизиса ACK (Life Technologies) подсчитывали клетки цельного костного мозга. Наконец, клетки культивировали в полной среде RPMI (лаборатории PAA) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS; Thermo Scientific), 2 мМ L-глутамина, 100 МЕ / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина (лаборатории PAA), 1 мМ пируват натрия, 10 мМ HEPES (Biochrom AG) и 50 мкМ β-меркаптоэтанол (Sigma Aldrich). Для дифференцировки в дендритные клетки к культуре клеток добавляли гранулоцитарный макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF; 50 нг / мл), продуцируемый линией клеток меланомы B16 [42], на 7 дней.Для индукции высокой экспрессии Т-антигена клетки обрабатывали дексаметазоном (Dex; 100 нМ) и доксициклином (Dox; 1 мкг / мл) одновременно, что приводило к иммортализованным DC (iniDC). Для последующего культивирования в новые культуральные колбы переносили только суспензионные клетки. В дальнейших пассажах уровень GM-CSF постепенно снижался до 10 нг / мл. Клетки культивировали при 37 ° C в увлажненной атмосфере с 5% CO ₂ .

Генерация клонов единичных клеток

iniDCs подсчитывали, центрифугировали и доводили до 50 клеток / 20 мл среды на 96-луночный планшет с добавлением GM-CSF (10 нг / мл), Dex (100 нМ) и Dox (1 мкг / мл).Клоны единичных клеток получали путем ограниченного разведения в 96-луночных планшетах. Планшеты контролировали под микроскопом на предмет появления колоний клеток и добавляли GM-CSF, Dex и Dox. Когда клетки достигли слияния, их трипсинизировали с помощью TrypLE select (Life Technologies) в течение 5 минут при 37 ° C. Трипсинизацию прекращали разбавлением в среде, и затем клетки переносили в 48-луночный планшет. В следующих пассажах клетки соскабливали без использования трипсина. Когда клоны отдельных клеток достигли 6-луночного формата, клетки замораживали в жидком азоте или непосредственно тестировали на их свойства дендритных клеток.

Стимуляция дендритных клеток и обнаружение внутриклеточных цитокинов

Дендритные клетки стимулировали 24 часа липополисахаридом лиганда TLR4 (LPS; Sigma Aldrich). Для обнаружения внутриклеточных цитокинов в культуру клеток добавляли ингибитор внутриклеточного транспорта белков Монензин (Biolegend) через 4 часа после добавления ЛПС. Клетки пермеабилизировали и фиксировали раствором Cytofix / Cytoperm (BD Biosciences) в течение 20 минут при комнатной температуре. Затем клетки дважды промывали промывочным буфером Cytofix / Cytoperm (BD Biosciences) и непосредственно окрашивали на внутриклеточный IL-12 с помощью mAb IL-12p35-PE (R&D systems).Затем проводили проточно-цитометрический анализ с помощью проточного цитометра LSRII (BD Biosciences) и программного обеспечения FlowJo (Tree Star Inc.).

Проточная цитометрия и набор цитометрических шариков

Дендритные клетки окрашивали антителами для анализа экспрессии их молекул на поверхности. Были использованы следующие антитела: CD11c-APC, B220-PE, MHCII-FITC (Miltenyi Biotec), CD8α-APC-Cy7, CD11b-V500, Ly6C-PerCP-Cy5.5, CD86-PE-Cy7 и CD40-PE- Cy5 (BD Biosciences). Для анализа клеточного состава бронхоальвеолярного лаважа использовали следующие антитела: CD66a-APC (ebioscience), CD45.1-V450, Ly6C-PerCP-Cy5.5, Ly6G-FITC, CD19-PE-Cy7, CD3-V500 (BD Biosciences). Проточную цитометрию выполняли с помощью проточного цитометра LSRII, а для анализа данных использовали FlowJo.

Секреция

цитокинов (IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-12p70, IL-13, IL-17, IFNγ и TNFα) была определена количественно с помощью CBA Flex Sets (BD Biosciences). в супернатанте активированных клеток. CBA измеряли с помощью LSRII и анализировали с помощью программного обеспечения FCAP Array (BD Biosciences). Уровни цитокинов были нормализованы по стандартным кривым рекомбинантных цитокинов.

Исследования презентации антигенов

Дендритные клетки инкубировали с овальбумином (OVA; 13,5 мкг / мл; Sigma Aldrich) в течение 24 часов. Поскольку использованный OVA не был свободным от эндотоксинов, не требовалось никакого дополнительного адъюванта, такого как LPS. Выделяли спленоциты мышей OTII / CD45.1 или OTI и разделяли Т-клетки CD4 ⁺ или CD8 ⁺ с помощью магнитных шариков (набор для выделения Т-лимфоцитов CD4, набор для выделения Т-клеток CD8 II, Miltenyi Biotech). Нагруженные OVA дендритные клетки центрифугировали, тщательно промывали PBS и совместно культивировали в соотношении 1-10 (дендритные клетки: Т-клетки) в 96-луночных круглодонных планшетах в течение 48 часов.Наконец, супернатант анализировали с помощью CBA на предмет секретируемых цитокинов.

Интратрахеальное введение дендритных клеток и анализ бронхоальвеолярного лаважа

De-iniDC и CD11c ⁺ BM-DC загружали (13,5 мкг / мл) или без OVA в течение 24 часов. ДеинидК и ВМ-ДК, соответственно, применяли интратрахеально к анестезированным трансгенным мышам OTII / CD45.1 или мышам C57BL / 6 (1 × 10 ⁶ клеток в 80 мкл PBS на мышь). В частности, катетер 24 размера вводился под прямым наблюдением через голосовые связки.В течение 3–4 самостоятельных вдохов мыши «вдыхали» суспензию клеток. Одна группа мышей получала PBS без клеток. Через 48 часов мышей умерщвляли; 500 мкл PBS наносили на легкие через трахею и собирали бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ). Жидкость БАЛ центрифугировали; клетки подсчитывали и окрашивали для анализа проточной цитометрии. CD66a ⁺ нейтрофилов анализировали путем стробирования по CD45.1 ⁺ , Ly6C ⁺ и Ly6G ⁺ и сопутствующему исключению CD3 и CD19.Чтобы вызвать астму, мыши получали 1% аэрозоль OVA через распылитель (PARI JuniorBOY®S, PARI GmbH) через десять дней после нанесения интратрахеальных клеток. Для получения цитоспина 2 × 10 ⁴ клеток окрашивали May-Grünwald-Giemsa. Легкие изолировали, фиксировали в 1% формальдегиде и заливали парафином. Срезы легких (5 мкм) окрашивали гематоксилином и эозином (Sigma Aldrich).

Анализ пролиферации, апоптоза и клеточного цикла

Для анализа пролиферации клеток клетки окрашивали трипановым синим (Sigma Aldrich) и подсчитывали с помощью гемоцитометра.Параллельно клетки метили 1 мкМ карбоксифлуоресцеиндиацетат сукцинимидилового эфира CFSE (Life Technologies) и измеряли проточной цитометрией.

Для количественной оценки апоптоза и некроза клетки окрашивали антителом против аннексина V-PE (BD Biosciences) и DAPI (Sigma Aldrich) в течение 15 минут и анализировали проточной цитометрией. Для анализа клеточного цикла клетки окрашивали йодидом пропидия (PI; Sigma Aldrich). Вкратце, клетки фиксировали ледяным этанолом (70%) в течение 30 минут на льду. Затем клетки дважды промывали PBS, ресуспендировали в окрашивающем растворе, содержащем 50 мкг / мл PI и 100 мкг / мл РНКазы A (Life Technologies), и инкубировали в течение 15 минут при 37 ° C.Наконец, клетки анализировали методом проточной цитометрии.

Трансдукция дендритных клеток лентивирусными векторными частицами

Лентивирусный вектор TRIPZ (Qiagen), содержащий белок турбо красной флуоресценции (turboRFP) и кассету устойчивости к пуромицину, был любезным подарком Кристины Неске (Университетская клиника Франкфурта, Pharmazentrum frankfurt, Франкфурт-на-Майне). Для создания частиц лентивирусного вектора клетки HEK293T трансфицировали вектором переноса лентивируса, упаковывающей плазмидой pSPAX и плазмидой оболочки VSV-G в присутствии полиэтиленимина (PEI, Sigma Aldrich).Супернатант, содержащий частицы вирусного вектора, собирали через 24 часа и замораживали при -80 ° C [43]. Дендритные клетки высевали в количестве 2 × 10 ⁵ на 12-луночные планшеты, покрытые RetroNectin®, и культивировали в течение 24 часов. Затем среду удаляли и заменяли 1-1 супернатантом, содержащим частицы лентивирусного вектора. Затем планшеты центрифугировали при 800 g в течение 30 минут при 32 ° C и инкубировали в течение 6-8 часов при 37 ° C. Наконец, среду заменяли средой для роста дендритных клеток с добавлением Dex, Dox и GM-CSF.Эффективность трансдукции определяли с помощью микроскопического анализа и проточной цитометрии (turboRFP) через 24 часа. Трансдуцированные клетки отбирали в присутствии 7,5 мкг / мл пуромицина (InvivoGen) в течение 24–48 часов.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Катрин Навратиэль и Дженни Марцан, отделение педиатрии университетской клиники «Карл Густав Карус» за их техническую помощь, Клаудию Васков (Центр регенеративной терапии Дрездена, Технический университет Дрездена) за предоставление OTII / CD45.1 и Рольфу Джессбергеру (Институт физиологической химии, Технический университет Дрездена) за предоставление мышей OTI. Мы также хотели бы поблагодарить Кристину Неске, Pharmazentrum frankfurt / ZAFES, Университетская клиника Франкфурта, за предоставленный лентивирусный переносчик.

Вклад авторов

Предоставленная линия мыши: KA. Задуманы и спланированы эксперименты: CR ST SB. Проведены эксперименты: CR ST JB ML. Проанализированы данные: CR ST JB. Написал статью: CR KA SB.

Ссылки

1. 1. Steinman RM, Cohn ZA (1973) Идентификация нового типа клеток в периферических лимфоидных органах мышей. I. Морфология, количественное определение, тканевое распределение. J Exp Med 137: 1142–1162.
2. 2. Guilliams M, Henri S, Tamoutounour S, Ardouin L, Schwartz-Cornil I, et al. (2010) От дендритных клеток кожи к упрощенной классификации подмножеств дендритных клеток человека и мыши. Eur J Immunol 40: 2089–2094.
3. 3. Гинхо Ф., Лю К., Хелфт Дж., Богунович М., Гретер М. и др.(2009) Происхождение и развитие CD103 + DC нелимфоидной ткани. J Exp Med 206: 3115–3130.
4. 4. Санчо Д., Моурао-Са Д., Жоффр О. П., Шульц О., Роджерс Н. С. и др. (2008) Терапия опухолей мышей посредством нацеливания антигена на новый DC-ограниченный лектин C-типа. Дж. Клин Инвест 118: 2098–2110.
5. 5. Шотмэн К., Хит WR (2010) Подмножество дендритных клеток CD8 +. Immunol Rev 234: 18–31.
6. 6. Гейссманн Ф., Манц М.Г., Юнг С., Сивеке М.Х., Мерад М. и др.(2010) Развитие моноцитов, макрофагов и дендритных клеток. Наука 327: 656–661.
7. 7. Helft J, Ginhoux F, Bogunovic M, Merad M (2010) Происхождение и функциональная гетерогенность дендритных клеток нелимфоидной ткани у мышей. Immunol Rev 234: 55–75.
8. 8. Лю Ю. Дж. (2005) МПК: профессиональные клетки, продуцирующие интерферон 1 типа, и предшественники плазматических дендритных клеток. Анну Рев Иммунол 23: 275–306.
9. 9. Reizis B, Bunin A, Ghosh HS, Lewis KL, Sisirak V (2011) Плазмацитоидные дендритные клетки: недавний прогресс и открытые вопросы.Анну Рев Иммунол 29: 163–183.
10. 10. Merad M, Ginhoux F, Collin M (2008) Происхождение, гомеостаз и функция клеток Лангерганса и других дендритных клеток, экспрессирующих лангерин. Nat Rev Immunol 8: 935–947.
11. 11. Geissmann F, Jung S, Littman DR (2003) Моноциты крови состоят из двух основных подмножеств с различными миграционными свойствами. Иммунитет 19: 71–82.
12. 12. Akira S, Takeda K, Kaisho T (2001) Toll-подобные рецепторы: критические белки, связывающие врожденный и приобретенный иммунитет.Nat Immunol 2: 675–680.
13. 13. Акира С., Уэмацу С., Такеучи О. (2006) Распознавание патогенов и врожденный иммунитет. Ячейка 124: 783–801.
14. 14. Banchereau J, Steinman RM (1998) Дендритные клетки и контроль иммунитета. Природа 392: 245–252.
15. 15. Баншеро Дж., Бриер Ф., Ко С., Даву Дж., Лебек С. и др. (2000) Иммунобиология дендритных клеток. Анну Рев Иммунол 18: 767–811.
16. 16. Капсенберг М.Л. (2003) Контроль дендритными клетками поляризации Т-клеток, вызванной патогенами.Nat Rev Immunol 3: 984–993.
17. 17. Steinman RM, Hawiger D, Nussenzweig MC (2003) Толерогенные дендритные клетки. Анну Рев Иммунол 21: 685–711.
18. 18. Ламбрехт Б.Н., Де В.М., Койл А.Дж., Гутьеррес-Рамос Дж. К., Тилеманс К. и др. (2000) Миелоидные дендритные клетки вызывают ответ Th3 на вдыхаемый антиген, что приводит к эозинофильному воспалению дыхательных путей. Дж. Клин Инвест 106: 551–559.
19. 19. Aggarwal S, Ghilardi N, Xie MH, de Sauvage FJ, Gurney AL (2003) Интерлейкин-23 способствует определенному состоянию активации CD4 T-клеток, характеризующемуся продуцированием интерлейкина-17.J Biol Chem 278: 1910–1914.
20. 20. Langrish CL, Chen Y, Blumenschein WM, Mattson J, Basham B и др. (2005) IL-23 управляет популяцией патогенных Т-клеток, которые вызывают аутоиммунное воспаление. J Exp Med 201: 233–240.
21. 21. Joffre OP, Segura E, Savina A, Amigorena S (2012) Перекрестная презентация дендритными клетками. Nat Rev Immunol 12: 557–569.
22. 22. Caux C, zutter-Dambuyant C, Schmitt D, Banchereau J (1992) GM-CSF и TNF-альфа взаимодействуют в образовании дендритных клеток Лангерганса.Природа 360: 258–261.
23. 23. Инаба К., Инаба М., Романи Н., Ая Х, Дегучи М. и др. (1992) Получение большого количества дендритных клеток из культур костного мозга мышей с добавлением колониестимулирующего фактора гранулоцитов / макрофагов. J Exp Med 176: 1693–1702.
24. 24. Shen Z, Reznikoff G, Dranoff G, Rock KL (1997) Клонированные дендритные клетки могут представлять экзогенные антигены как на молекулах MHC класса I, так и на молекулах класса II. J Immunol 158: 2723–2730.
25. 25.Hargadon KM, Forrest OA, Reddy PR (2012) Подавление созревания и активации линии дендритных клеток DC2.4 факторами, производными от меланомы. Cell Immunol 272: 275–282.
26. 26. Эбихара С., Эндо С., Ито К., Ито Ю., Акияма К. и др. (2004) Иммортализованная линия дендритных клеток с эффективной способностью к перекрестному праймированию, полученная из трансгенных мышей, несущих чувствительный к температуре большой ген Т-антигена SV40. J Biochem 136: 321–328.
27. 27. Volkmann A, Neefjes J, Stockinger B (1996) Условно иммортализованная линия дендритных клеток, которая дифференцируется при контакте с Т-клетками или цитокинами, производными от Т-клеток, Eur J Immunol.26: 2565–2572.
28. 28. Бару А.М., Кришнасвами Дж. К., Ратинасами А., Шерр М., Эдер М. и др. (2011) Дендритные клетки, полученные из HOXB4-иммортализованных гемопоэтических клеток костного мозга. Exp Biol Med (Maywood) 236: 1291–1297.
29. 29. Сюй С., Ариидзуми К., Касерес-Диттмар Дж., Эдельбаум Д., Хашимото К. и др. (1995) Последовательное создание антигенпрезентирующих линий дендритных клеток из эпидермиса мыши. J Immunol 154: 2697–2705.
30. 30. Fuertes Marraco SA, Grosjean F, Duval A, Rosa M, Lavanchy C и др.(2012) Новые линии дендритных клеток мышей: мощный вспомогательный инструмент для исследования дендритных клеток Front Immunol. 3: 331.
31. 31. Джонс Л.А., Крим С., Швейш М., Пол А., Александр Дж. И др. (2010) Дифференциальная модуляция TLR3- и TLR4-опосредованного созревания и функции дендритных клеток прогестероном. J Immunol 185: 4525–4534.
32. 32. Рока Л., Ди П.С., Петруцелли В., Грандальяно Г., Раньери Э. и др. (2007) Дексаметазон модулирует продукцию интерлейкина-12, индуцируя хемоаттрактантный белок-1 моноцитов в дендритных клетках человека.Immunol Cell Biol 85: 610–616.
33. 33. Франшимонт Д., Галон Дж., Гадина М., Висконти Р., Чжоу Ю. и др. (2000) Ингибирование иммунного ответа Th2 глюкокортикоидами: дексаметазон избирательно ингибирует индуцированное IL-12 фосфорилирование Stat4 в Т-лимфоцитах. J Immunol 164: 1768–1774.
34. 34. Монтесинос М.М., Аламино В.А., Масканфрони И.Д., Сусперрегай С., Гигена Н. и др. (2012) Дексаметазон противодействует иммуностимулирующим эффектам трийодтиронина (Т3) на дендритные клетки.Стероиды 77: 67–76.
35. 35. Elftman MD, Norbury CC, Bonneau RH, Truckenmiller ME (2007) Кортикостерон ухудшает созревание и функцию дендритных клеток. Иммунология 122: 279–290.
36. 36. Gallucci S, Lolkema M, Matzinger P (1999) Природные адъюванты: эндогенные активаторы дендритных клеток 3. Nat Med 5: 1249–1255.
37. 37. Времек Д., О’Киф М., Уилсон А., Ферреро И., Кох У. и др. (2011) Факторы, определяющие спонтанную активацию дендритных клеток селезенки в культуре Innate Immun.17: 338–352.
38. 38. Россетти М., Грегори С., Хаубен Э., Браун Б.Д., Серджи Л.С. и др. (2011) Лентивирусные векторы, происходящие из ВИЧ-1, непосредственно активируют плазмацитоидные дендритные клетки, которые, в свою очередь, вызывают созревание миелоидных дендритных клеток. Hum Gene Ther 22: 177–188.
39. 39. Брекпот К., Эскорс Д., Арсе Ф, Лопес Л., Карвач К. и др. (2010) Иммуногенность лентивирусного вектора ВИЧ-1 опосредуется Toll-подобным рецептором 3 (TLR3) и TLR7. J Virol 84: 5627–5636.
40. 40.Kuroki M, Matsuo Y, Kinugasa T, Matsuoka Y (1992) Увеличенная экспрессия и высвобождение неспецифических перекрестно-реагирующих антигенов (NCA), членов семейства CEA, нейтрофилами человека во время активации клеток J Leukoc Biol. 52: 551–557.
41. 41. Анастассиадис К., Ростовская М., Любиц С., Вайдлих С., Стюарт А.Ф. (2010) Точная условная иммортализация клеток мыши с использованием регулируемого тетрациклином большого Т-антигена SV40. Бытие 48: 220–232.
42. 42. Мах Н, Гиллессен С., Уилсон С.Б., Шихан С., Михм М. и др.(2000) Различия в дендритных клетках, стимулированных in vivo опухолями, сконструированными для секреции гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора или Flt3-лиганда. Cancer Res 60: 3239–3246.
43. 43. Угарте Ф., Райзер М., Тиме С, Фиерро Ф.А., Навратиэль К. и др. (2009) Передача сигналов Notch усиливает остеогенную дифференцировку при ингибировании адипогенеза в первичных стромальных клетках костного мозга человека. Exp Hematol 37: 867–875.

справиться натрий усиленный рекомендовать доказано проблема поставлен миллион жилище выполнение взятый ограничение Лондон кинотеатр очевидно расположение Reuter УСЛУГИ строительство точно потенциально IPPC нацеливание Harnes участник лекарство опухоль молекула связанный показано практичный Ян AA региональный Stadtplanerische электронный уменьшать 350 идущий изучал ‘ihefact Zur упражнение земля Риккардо 101 квалификация тревожный urope ‘ доступность сеншу удвоение чавдари редко богатый грудь аренда Мероприятия ЭРГ Розничная торговля район оттич размещен рентабельность пегая лошадь присутствие городской заменен параметр сюрвейер венесекция Цель благодарить тип орган власти справедливый выдающийся курок интересный работал проект консультировать промышленный Коркер оценить проверка Поделиться 2002 г. Браун контекст вариант определенный Дания охарактеризованный ситуация круг Примечание двусторонний поддержанный природа одновременно там исправлять исследовал патент сохранение рынок BRCA1 подходящее ушел ставка лавочник иметь значение западный резко специализироваться не будет Бахманн категория химия юг нет важность сосудистый новатор плотность чувствительность люди идентифицировать Belzunegui обрабатывали защита источник вычисление фронт восстанавливаться ил нефропатия местный раковина определенный исход происходить спускаемый аппарат профессиональный образование география хронически различный ОБЩЕСТВО политический напрямую биофилия количество возможность огорчающий ИКС’ возникающий богаче Китай читатель прион обращение назначения es пункт грузовик спираль ЮРИДИЧЕСКАЯ достигать заблудший биотехнология немного планировщики кому Митомо правительство сокращение показывать ‘Информация достаточный обеспечить регресс помощник сяодун Йорк положить начало недостаток цена четное Тунис дефицит влияющий контакт африканец вечеринка должен Лунд взаимосвязанный нидерландский язык принятие обостренный нерегулируемый ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ желательно между лос инсулити ограничение искать умение обращаться узкое место облегчение упомянуть министр фиброзы Рик DTU Роза Hessen лучше примириться дружелюбнее препятствие интерес барселона потрясающе опасно поставка мозговой часто Исследователь окончательный бедных ООН уважая маттия нежелательный оси взращивать осведомлен начинание сюрприз люди в результате смотреть ожидающий уже клинический Meir иначе СЕНТЯБРЬ правильно воспитанный тем временем последующий 1981 г. Средиземное море знание эксплуатация Опасность строить показатель неорганический Дмитрий € 800 первозданный промышленный обмен обнаруживать предложенный выключенный по своей сути привлекательный и т.д поставлен диагноз кровообращение последний лечение примерно известен складывать мультимедиа составление Кадиу Греция не понятно instituto слово дополнительный строительство отдавая предпочтение квота должность керамика аренда предположение осушать директор болезнь’ по рукам город человек поддержание личный направленный утилизация скопление коврик владелец необычный в первую очередь царство этиология изменять’ специализирующийся светский охрана наказывать положительно ФЕВРАЛЬ Джерард липид жилье фольга 170 сардиния слабоумие Турция ENSI Таблица JRC методология 14001 зеленый Хайме электрод громоздкий никель восприятие Утрехт гиперлипидемия тирадо линия Sorup спровоцированный инфраструктура подчеркивать ЭМУ приводимый в движение сервировка цифровой неврологический воздействие Lujan 232 полезный штейнмюллер партнер результат ключевое слово задерживать декабрь геном отцовство решение сеть груз частично cout стартер ПЛАВНИК ва настоящий набор дом страна архитектор CEX работа деталь агент встретились необходимость позиционируется контур iptsreport мог органический АТЛАНТИДА MH на за пределами восприимчивый выполненный IMAX СПРУ лаборатория вести себя тодт сослался обучение координация Европа обособленный взаимодействие развлечение исследовательская работа молодой Иабете упомянул центр Ллойд ANR опрос приносить ВДНХ способствовать гель физический Konsummustern Иерусалим работающий применение Гамбург усиление соперничающий нгенхария компенсация Hellingwerf чувствительный ведомый трудный киллер указал провайдер окружающая среда оба Frotschnig распространение товар Распечатать Дюссельдорф воспитание 006 сила превосходить предложенный код период субстанция несмотря на то что требовать важный засвидетельствовал оказано целевой конкретный ИГИЛ LSE сравнение клау портиться LINC в основном все Петра окислительно-восстановительный потенциал Клаа переполнение Копельман британский расположена обычный анклам атомный гибридный вершина горы управляющий делами Vigorou проходящий Клау Careles AE хадзимэ творчество приспособление технология Орахилли было бы управляемый терпимый Говорящий дурак упор адаптированный Аргентина унаследованный к счастью агрессия примечательный кардинально европейский транспортируется SE размещение связывание существенно Людвиг IHCP Всего обмен разработка сельская местность ограничение горение служба поддержки объект комиссар добавлять ШОС операция терапевт фактор врач получить UKPDS иммунодепрессивный в том числе контроль подстегнутый администрация ‘ смятение Росселли стимулирующий Глобальный машина 326 страна отговорить гнология экстраполированный адаптироваться регистр созданный рекомендация несомненно февраль полный сам оправданный leible панкреатический каяманиду подмена содержание третий тревога сельское хозяйство смертность Агуадо устрашающий своевременный честность главным образом к сожалению имущество бросить вызов маршрут 299 болезнь dg12 рендеринг дать согласие неверное толкование исторический приватизирован институциональный потреблять позади обвиняемый транспорт BIOS несоответствие Ханна vonorta бюджет почка так или иначе планирование составляющая плохой метаболический прагматичный html разработчик мускулистый гипертония САУЛ ниже Создайте в течение консультирование академический СТАНДАРТИЗАЦИЯ расширять сирка министерство несколько сильно пациент’ подход сформированный раскрытие Cartuja себя оценка Розенталь болезнь Альцгеймера в другом месте одинаково в последнее время угроза Перри ресторан АПРЕЛЬ Идзуми профилактика благодарный глубина предотвратимый постигать скорее клубня Огромный несправедливый рахмани консультативный достаточный’ близко сокращение бихара Basi возраст спорадический черта характера уменьшение вызов ETSU объем выше окружающая обстановка добавление комментарий поднимающийся согласованный фургон Duchenne капитал хотеть CSC образовательный холестерин Иордания наблюдатель поздно Виеска действительный ключ соответствие хранится план вероятность подвергать опасности портфолио относительный 741 DCCT асфар законодатель денсит открыть появляться заменены Брукнер восьмидесятилетний значительный бездействие расширенный актеры парламент площадь участие надеяться вызвался DG становление унив Джадду детство соединитель имплантируемый ископаемое ‘я учреждение кистозный европа ‘ пай преобразованный существует сорок предварительный hnic правильно строительство выделение сегодня последовательный в качестве альтернативы спорт необходимый ослабленный защита разработан перезаряжаемый возьми добыча Почта роза естественный без труда финансирование переработанный законодательство гальванизатор степень вышел карта тысячелетие географически СОТРУДНИЧЕСТВО четыре связь Oни ускоренный LINGUISTICOS публично испанский язык весьма исследовал недостаток паскаль затронутый прицеливание микро опыт удаление законодательный физическое лицо голосование ВОЗ переулок продавец клиника тема слабый кандидат наук EURODIAB в соответствии область способствуя ранее для однородный плазма просто фонд открывалка ежемесячно ES куплен наследовать Брюссель цикл город пари трансатлантический предсказанный институт смягчение соединение beeinflussung ответил CEST показывая мандат стремиться ноги объем гликирование возникающий язык предложить фильтр штат сотрудников галстук рутина EMAS Меркурий база данных определение производитель несущий досье числовой клиницист ренопротекция участие исключать совместное использование Urope эмоциональный предусмотреть мечтать отказ фотоэлектрический средства массовой информации ОБСЕРВАТОРИЯ смешно обычно неизбежно очиститель 30 евро партнерство интерактивный ожидал чистый опросник около главный накачанный ведущий урок 1998 г. индикация классификация СПЕЦИАЛЬНЫЙ тестер продвигать базовый предварительно никогда плотность синий обсуждение постоянно альтернатива Почта 105 выделить совет существенно переработка получение игрок вызывая Беркли Доступ белок Lonza действие мульти категоризация совместимый Дата 443 обеспокоенный Лаура Саймон многие купить Мартин значение причинный гарантированный интенсивный ‘южный’ жизнь отредактировал hbalc террасный проверено ети тем не менее предмет когда-то маркетинг батарея Радермахер пожилой энергия любезно ‘edutainment’ внутренний система проникновение месяц значительно иммуносупрессия автор зрелость дробная часть она аккумулятор превращение широко распространенный Ирвинг экономно Oniki действовать прагматичный dglo граждане желательно включение каждый Болин Ghiglione гальваника предоставлять подвергая опасности поддерживающий франси способ восстановление NC не хватает модель национальный ма политика стоять электричество последовательность действий добавление Равидм Grunwald удобство покупка рисковать литий забота адресованный гранада понимание субсидия BRCA2 сведение к минимуму служебный ординация объяснять Немецкий евро потепление идентифицированный начало давящий вложение интеграция уро Crisi сотрудничать программное обеспечение сосредоточенный пестель быстрый быстрый высоко медленный итальянский телефония некритичный EASD фокусировка PA пациент внутренний что касается возможность представлен выгода рядом учиться начало архитектурный адекватно переработка фонарик Очистительный завод ванадий ‘качество совпадение оказывать воздействие фундаментальный раньше Maisch комплекс материализоваться гибкость южный семья ДИРЕКТОР Калифорния климат диэтрих поход по магазинам симпозиум реализовано кейс взбираться особенность правильный разнообразие Счет занятость Gesellschaft Бег VITO jrc организованный наблюдение ресурс AN в одиночестве маленький увеличение научился BRCA привлекать хорея сочетание правильно облицовка DIN в различных Робин неизбирательный фокус интегрированный фармацевтический киберспорт в процессе ухоженный о 120 определенный каталог гормон 60сек подчеркнул параметр доказывать создание связь франсуаза началось ‘молодой репутация сложность образ жизни ядовитый Heinonen сложность вне монополистический паскаль синтез ‘северный’ саами минимизация вместе костер привлекать оригинал увеличивать фон Bruning открытый сформированный Коллин изменение нормальный абсолютный патио ответственность технический здоровее меньший 200 предоставление дистрофия предложенный своя JP аленсия технология регулирующий ipt опубликовано мотивирующий CTS7 мониторинг разнообразие диоксид UITP регулятор континент Wege получение улучшен возможный эффективно использование подразумевать широко дешевый БЫТЬ позже хранится предотвратил недуг английский игрушка ТЕХНОЛОГИИ операция ПЛАТА легкий станция плотно папамелетиу онлайн Мари ощущение металл закон содержащий изнурительный полу Porou коллектив ВОПРОСЫ понимать 346 ИПТС повернуть Себастьян загрязненный мимо DM железо расколоть Стоимость гистопатологический Кристина активный биологический прошедший CSL хранение Moneada разрастаться этнический глюкоза бухгалтерский учет влияние Delgado гонорар сельскохозяйственный достигнуто банальность производство бегать C02 умная € 500 офтальмологический повышение предсказательный ICA под позволяя отвечать контраст руководство марганец налог пригодный для использования масло оправдание пожалуйста Барлоу встреча инсулин поддержать распространенность расстояние переехать молекулярный общество выносливость наш модернизация Фулбрай ранее Лесли В настоящее время перенесенный определенный слой rgebnisbericht разделение Сточные Воды ощутимый союз как правило финансирование мобилизация Ливан депрессивный резкий обнаружение зона прикладывать коллекция неэффективный лицо нерв группа продвижение лично стационарный межотраслевой домой ОЭСР раскрытый туризм простота движение навязывать при условии радио пара большой японский язык принятый смысл относительно лапан подтвержденный дер ИССЛЕДОВАНИЯ моча медицинский проводящий кобальт ядерный покупатель папагеоргиу разрешать переводить источник компетентность ‘ портативный химический масса лечение теория соответствующие ravid распространение Ульф тщательный собрал точность Уилсон отделенный нация тайский комм повреждать достигать докторская степень диск RI контролировать ‘соединение финансируется катализатор надежный серьезно 354 отличный пилот длинная плацебо дополнительный Urbaine проигрыш расширение евробарометр Balbino конкретный дополнен воплощать в жизнь без определять чем сила просто франшиза николау поставлять мера вопиющий Артур стать исходный эффективный Mjanson отделение под наблюдением Джен руководство рацион питания категория центральный арфист хирург презентация символ история llfe Аморелли радиоактивный рассмотрение снижение жизнь традиционный склонный технологии Кувейт осторожный следить продолжение усилие несколько отдых тонино Scherhom прилив избранный КОМАНДА сотрудничество собственность стремительный жилье оператор подозреваемый Адам факс 2000 г. опасность комиссия успокаивающее помощь концентрация Серджио суверен реже демонстрация престиж Bahke поколение в основном CF эндокард осведомленный сопротивление производство привлек Водитель недооцененный Свинец дым сопоставимый эффективные тарелка дисциплина Hoic копировать корпоративный мог бы упражняться приказ Каленбухро петь ампутация понимать следующий приз родитель 280 аполипопротеин Адела иметь тенденцию данные джин XII рациональность проф статья’ дипломат информирование Чувствовать Bottazo подписка стабильный рот Вега механизм благосостояние курьер обращаться 314 соответствующий чей совет после Тран мышление фотографический карин рин стратег сердце ЕВРО наследственный назад вода жатва VI градиент гарантия началось VDL отвечать Illnes Индия умеренный Америка готовность увольнять учебная программа работа сотрудничество подтверждение поощрять инженерное дело ‘управление растущий пригородный адаптация второй микрофинансирование поражение схема Пьетро разница воспринимается МСП 1997 г. ISO интеграция инвалидность навык СЕТЬ пришел Бельгия ноя магнитный вынужденный университет АНГЛИЙСКИЙ Гилберт изучение защищать обсерватория Uribe своего рода более того падать стабильный работодатель’ зрелый оценка Конечно инструмент Работа сильно Тома статистика крест бордин аджлуни показатель преуменьшение мурлоу РЕДАКТИРОВАТЬ демографический дорогая естественно заслуживающий внимания латинский катастрофа все строить Хантингтон толерантность новый аберрация оценка центр профессор связь L1500 org аномальный полностью продвигать Египет управление услуга опытный прогресс ангел ли жизненно необходимый профи Основной поток руководство три гармонизация соответственно нужный политик ‘ развивать Viciou ссылка калькулятор раскрытый секрет сахар многофункциональный Элизабет конкретно доступный чувство запретить активность смешивание перспективный tlje союзник несогласованный прогноз опытный ацетилосалициловый УРО коммуникация автомобильный перепланировка усилить Fiorino младенчество последовательный технически Spiewak вывод дорогой два ADIT чрезмерно прямо отчет’ широкий считается XI каждый цитируется совместимость Hitoshi где Conomic роль корт исследуя серный техника попытка поддержанный 65 действительный внимание Это гидрид незначительный Брюн включать электролит соответственно вхождение охрана отличаться Япония участок смешанный гемоглобин держатель способствовать росту электрический истик фактически сгенерированный 1990 г. специальный смотреть Люксембург случайный масса критерии в целом Beckmann фульвия идентификация полный иммунологический постепенно измененный Палома эксперт половина прогресс пятый эффективный Оливер экотоксикология политехника Закрыть jtf предел превосходить фабрика кто-нибудь доступный последовательный сория вероятность рукоположение сомневаться физика нарисованный В 448 одобренный клиент кВтч 8 Беатрис удаленная работа болезнь Альцгеймера тем не мение тестирование netvision вперед датчик интерпретировать муниципальный Гонсалес интегрировать технологический двойной иврит поле боя 43-я сессия надеялся обязательство в сравнении ЖЖ следовательно онсэнсу детерминант телеком характеристика Дорда очевидно ута СРЕДИЗЕМНОМОРСКОЕ двоеточие ценный один эпидемия едва ли тенденция минимум вырезать опасность сделал Эдвард отношение сотник краткий обширный канцелярия найти десять наемный рабочий раскидистый включены метод сдержанность оцененный модуль ей подготовить инвестирование поддерживать opladen Василопуло решение любой внешний определять скромность процветание возобновляемый позволил сайт дефектный Роберт Тед более Сараива материал год учреждение ультра сеть Бердсли профилактический мутация позволять Киото профилактический углерод лаборатория касательно относящийся к окружающей среде стандартизированный ДНК устранение мононуклеоз среди надеясь Альба отчет 450 Tendenzen пихта сентябрь угрожающий подробный информация оперативный предпринять самый экологически предложение цирроз анализировать переполненный напоминать Посмотрите пассажир продемонстрировать артериальный Бонту 972 имел одобрение стенка Информация Хосе риск директива Ритц ПЕРСПЕКТИВЫ сосредоточиться лидерство иммиссия хронический гази эпо ом буря подмножество тел пропорция январь частица двойной эксплуатируемый совместный стоянка тысяча устранять перезарядка конкурентный измерение полиция формирование частный светлый возможно ожидаемый срок действия перечисленные азия заглавие случаться снова никола стена анекдот соответствующие правило tec цель саклер все еще направление ветер ДЕКАБРЬ га предпочтение обложка RDG будет расследование Платформа много процедура предприятия ни один институт фирма часть сложный 211 средний врач Operandi диалог левый сеть диабетик факт продолжительность жизни теплее водород видимый неполный инновация поездка на работу вариант ИНЕТТИ будущее под сомнение образец причина довольно классифицировать препарат, средство, медикамент подписка заслуживать ретинопатия на очень Только работодатель переработчик корреляция больной английский мабнахмен как правило мотивированный Селия потерпевший шумный предписанный поликлинический преемник всегда ас фермент переносимость Thyssen требующий lhe GK проблема экспертиза совокупность структурный сетка Walkman избегать произвел тугой 160 зарядка раздражение предпосылка VTT компонент ИЮЛЬ изоард 1000 стал так же ptukfaonsumk макроскопический процентов парк обтекаемый награжден заказ карат формально тем самым год производство Quing взрыв вера Вебер движение сильный устойчивый ПЕРЕВОД добровольный секретариат приближаться сбалансированный энциклопедический оборудование эмпирический встретиться в передовой хорошо изготовление преданный требование перекрывать журнал соотношение зависимый судить дервент уважаемый беспокойство CII тогда экран преобладают 260 власть место хранения покрытие бизнес убежденный аламино EC сегмент государство Итака нести наверное llobell выделил GSF заключить физическое лицо’ Мигель цзюань подсказал де на национальном уровне нас резидент обстоятельство связанный непосредственный мастерская недостаток гемохроматоз удаленная работа экологически ожирение выделять стержневой элементарный я миллиард отношение ИНФОРМАЦИЯ Мейер микрососудистый Liquicj кровь с привлечением Розен увеличение Фленсбург наоборот рецептивен приходить УРОПЕ достижимый Кэхилл многофакторный наименее субъективность Амон в зависимости экологический ГРУППА 1993 г. должное 400 только солнце введение экзотично вырос частый междисциплинарный Мальтео максимизировать предосторожность Кроме того бумага к несчастью получила качество принятие демосфен застрявший крайний последний подходит еда ALLBUS довольно часто Кембридж отражать КРЫШКА носильщик Привет следующий почти убедительный предварительное условие такс похожий 110 ПРОИЗВОДСТВО трудность 1995 г. комбинировать круг ценность к находка сотрудничество Антонио содержать библиометрический достаточность напрасно тратить оценен Михали держать поставка точный нейтралитет описанный стремление оптимизация коронарный заселен такой же указывать репортер организационная верил Спецификация наука бесплатно фак мотивация Компания фабрика Locu сделать прогрессивный предполагая децентрализованный ожидание Fleissner процесс промышленность объяснение поддержание эпидемиология август бек позволять страдальец час прохождение Вход больше влияющий выберите кинетический строгий кампания инструмент 1937 г. уход президент повестка дня Коэн имущество использование середина сектор моложе Castello вдвое Напряжение утроение CEA запущен вторичный стимул применяемый Копенгаген немного расположение мордчай здесь комитет функция ланцет флаг’ Монсоне мотор обработка фильм впечатление метил 20-е замедление принуждать постоянный поднятый улучшение распространять предстоящий логово финансовый устойчивость уважать выразил не данный против гарантировать рассматривается пока что technikfolgenabschatzung в возрасте земной культурный присоединение подсластитель привычка место расположения анализ внимательно Gilson страдания Занятие ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА поощряется цепь двигатель опора политик завтра общество отдельный Я осуществимость ЧИСТЫЙ по общему признанию РЕДАКТОР статья начинать способность механик ссылка на сайт диагностика улучшать между выгода аспект дополнять космос якорь телекоммуникации Жилой симптом полагаться вероятно определение конфиденциальность короче параллельно жизнь’ ставить поры выиграл патерно DI потерпеть поражение доставлять мы сами приемлемый дукация продажа слепые институт ‘ политический вышеупомянутый эксперт положительный учеба в школе хотя возможность CINDOC устойчивый атака под влиянием обязательно буфер Паувель гараж удобрение ОТ размер анализируя действующий гемофилия острый включить вариация ПОДПИСКИ унд предприятие быстро точный выносливый Мюнкер прерывистый извлекать мотив сенсорный от имени топливо les аспирин Удалить Андреа предложение Франция Рита убийство Пользователь продолжающийся драматический ориентированный Евросоюз мудро побег семейный скопировано 2010 г. фонд известный Ватсон цент сдвиг публикация разум волк Швеция проявление женщины www излишества заверение конец адекватный смотрел здоровый лань вовлечение упаковка невропатия контролируемый старшая общественный Tournai обычный уступать неиспользованный ингредиент сегрегация Постдам шаблон сотня пересадить полностью восточный продукт Зачем изучение модальный 621 руководство разрушение знать принимая дети учитывать флагман союз desc день ОКРУГ КОЛУМБИЯ технологиямониторинг CNERNA Мюллер Кристофферссон кооператив курс многофункциональность понижение поведение чрезмерное упрощение различные оружие социально-экономический ниже стоящий выполнение коммерчески частные лица OMNIMAX стараться медик должен каленбур конкретный Англия ДОСКА казалось 9384 дизайн Бонн тело ученый оптимистичный Осака воображение сосед внутренний студия Идеально способный грива Женева стиль с использованием устный перевод университ не замужем акционер американец Вена ускорение преимущество поскольку понимание маркировка критический нововведение зазор измерение 1996 г. концепция компактный телевидение Швейцария лорди ing загрязнение запретительный вовлеченный ред объединились ‘ИПТС разное гемианский Корнелл северный эксплуатирующий Лувен социум Когда-либо значение распродажа ОПУБЛИКОВАНО страны галактика срок обычно стандартизация основанный оксфорд Стокгольм четвертый VDI снимок Кроме а именно награда потребитель ICTAF Университет появившийся дружелюбно противник временный рабочее место покупателей во-первых TT инициатива махрум Кларк обнадеживающий азартная игра компетентность литература бесперебойный видимость Другая четко не сделал Verkehrsmittelnutzung агрессивный цель Посмотреть меллиту потерял запрос формирование 2008 г. сенокос прибыльный айдзу сердечно-сосудистый Свобода нормализованный недоступен обнаруженный клинически матия ограниченное секр СТАТЬИ мощный системный анализ тревожно периферийный Hoffmann Реклама актер австрийский оплата труда Graesal в пределах MJ анестезиолог преобладающий соседний вел самый ясный мягкий экономия заключил обязан прока Цитировать консультант получать культура написать видимо в некотором роде цитируя коммерческий 3000 Севилья генетический Вашингтон взрывающийся Финляндия щелочной 1986 г. Разработчики’ гипертонический худший Уолтер продолжение частичный 11940 выбор обработка Эрнандес недостаточный хранить Австрия отклик миотони неадекватный все больше офис Что ж лавр начальтиген предотвращение недавний так как Beaurepaire состояние химия куча ценность потенциал новее концентрированный СПРЯТАННЫЙ торговая точка путешествовать теплотворный Испания ряд мяч законный INSA ИНСТИТУТ грамотность прибрежный COM банк убегать десятилетие уровень покрытый убеждать транспортное средство патогенез соединенный плотность cest Кордова достижимый мер установка последовал сад резко выполнить меньше спросил назло диплом Mansell факультет связаны анестезия тускнеть вивье питание DGXII СТО сами академия микель реализация РАСПЕЧАТАТЬ создание Выполнено торговый центр Ливио весна направленный пересечение смешанный подходящее менделевский клиенты’ означало оптимизация страхование субъективный результативный Стефан тройной управление энергия Хеммельскамп Мир разнообразие Армин больница снижаться беспорядок чрезвычайное происшествие маркер подтверждать немного хромосома рано предрасположенность равный крессон Tochtermann юлдисциплинарно IRMM торговля II реальность обезьяна концентрировать строитель широкий Дорога идеальный воздуха ТУЗ Кроме того Continou техно Доставка ниша грубый отличаться форма парень дольше IRC удивительно давать интернализация оказывать уникальный технология viale изначально их Депутат дополнительный цанга внимание использовал EN расширение фигура ежегодный Авив 1989 г. эксплуатация истинный узел существование построен значительный ни Декабрь Дюссельдорф ложь исследовал ПИС непрерывный когда ‘себя ответственный задний план ПОТРЕБИТЕЛЬ сердечный земля neuve достиг автоматический лаборатория профессионально-техническое заболеваемость торстен исполнять дистанционный пульт июль сознавать возможно предложение CDC вызов перевод Конфиденциальность 1999 г. мая разрешение биотехнологический доход в настоящее время XIII Цин проводить исследования разные функциональный мода полагать быстро появление Шмитт малолетний прикрепил карлик желание МАРШ обученный амо Терминал раскрыть диалиси адрес Дункан движущийся ключевой меху УСТОЙЧИВОЕ РАЗВИТИЕ Роман провести принимать оптимально Спортивное 1025 ВВП 1992 г. инфком RC чт целостный сентябрь твердый европа дебаты Андрей crespo должен улучшение дальше Венн доход предпочтительнее подписать база изменять резюмированный повседневный жак бромид ноябрь жесткий иллюстрация монета int номер развивающийся пожизненный Стефано биполярный ребристость фасад резюме оптимизированный ЭТО КАК оказать влияние называется организация предоставление институт неустойчивый актуальность продлить инертный плавающий изначально ассоциировать в настоящее время мириады Wallard Население контрольная работа соседний производить NL нестабильность vdi выгодный статуя мани шаг регулирование проекция 100 300 ISSN как 800 идентичный событие внушительный их масштаб неэффективный вилять Лучший нетерпимость администрация следовательно стенка имея НУТЕК прогноз традиция брат или сестра разорение неизвестный морковь многообещающий TZ включены бессимптомный Maghiro интерпретация датский эмиссия грубо скорректированный Schellnhuber емкость вопрос 296 точка рука меньшинство судебно-медицинский иди ион лишать 171 представление давление стратегический фоторецептор дисфункция унесенный далеко усилитель печень обязательный поток Мартинес Гренобль звук также согласие избегая ткань Kyriakou распределение 000 близнец Связанный рак консультация диагностический эдер но слишком аналитический ожидание xpertenworkshop маленький терапевтический над борьба бюллетень квест разделять федеральный убеждение наследство нашел во многом разнообразный предусмотренный FE соглашение ассоциация географический Фреснер видимый не допустить каскад покровительство улучшение тор конечность европейский вместо АДАПТ эпидемиологический диетический переработка игра Отто ссуды FAW Соединенное Королевство 1980 г. предполагать выполнение больше исторический сокращать как 5 » ‘ сверхпроводящий бывший привлечение ПРОБЛЕМА ‘достаток’ пипетка загрязнять BMBF вырождение Получать административный достижение поджелудочная железа во-вторых появление в общем страх признал управление особенно Севилья автоматизированный включают ха потери обучение либерализация стоя наделенный сплоченность резать gmbh растение 352 полимер низкий классический чистый nic12 расширение аутоиммунный транзистор Рохо созревание ордината легкий через пока успех теоретический модификация ФРИДОНИ неизбежный приходящий европа мосты денежные средства ACGT надежность заметный вызванный держал рост Исла ген чистый брать Мировой прорыв, достижение, открытие 500 на основе 1200 цинк загрязнитель Olav соледад конфликт ФРГ развитый скрининг присоединиться минута невозможно назначенный упакованный моду инвазивный значение независимо Форум Французский убер ветвь лицензирование школа деревенский PTS зависеть 1994 г. обострять устройство страдать наконец-то единица измерения освещать Viega пытаться офицер школы’ безопаснее самый широкий рецессивный терять CL тяга приоритет сделал страница беспринципный ИЗДАННЫЙ пространственный ставка читать огуми генетически нейрон логистический НОЯБРЬ поле Stahel окружающий однажды трансплантация переведено технология больше такой форма 150 окно степень институт предвидение Симона стратегия цель мобильность применять профессиональный поставщик Текущий край скандинавский диабет technikaufgeschlossenheit перспектива сера пример Инсульт обсуждались успешный IGT июнь исключение настоящее время Келлерт республика планировщик Амстердам боди техник тяжелый вмешательство семья север ИПТС ‘ воспоминание предвещать Гомес недоступность ретроспективно проанализированы Хагстоц ультрафиолетовый восприимчивость объединение невыносимый член Фаренкрог программа НАПРАСНО ТРАТИТЬ компьютер дело возвышенный экономический выставка Bonazzi ели корень время поддерживать задерживать взаимосвязь интеллектуальный улучшение thumm состояние Акрос почему рисовать окружающая среда версия либо общий отраслевой сообщество здоровье КОМИССИЯ cec Handlungsansatze сетчатка перспективно новаторский ОТЧЕТ человек вождение физик обзор досуг восстановить Санчес столовая рамки Заппакоста мас Эйнштейн Интернет стр. 40 Янсон наслаждаться статья расхода постепенно серия ежедневно прогноз скудость blickpunkt Общее максимум научный фитнес предсказуемый компетентность сложный кадмий преступление век Робинзон пример беспокойство клетка уполномоченный гибкий закрыто 747 ЕВРОПЕЙСКИЙ LU пять плакать евро оговаривать задача банальный мост приоритет очевидный спутанность сознания фламандский окончательный ближе показал незавершенный Международный самый большой хроматоси Лоран Гавлган Корпус цитируется представлять реакция повернулся DK доминирующий субъективный академия убедительный готовый список взрослый вне несчастный случай замедление ‘TNO спроектированный Марина причина Германия новообразование элемент модифицированный вовлекать пригород конкурировать казаться макрос RTD ИЮНЬ уехать достигать Dijk массивный сцена основной OST жизнеспособность консенсу теле простейший ИСПОЛНИТЕЛЬНЫЙ состоять специалист конкурентоспособность размер гакуин одобрить домен расстановка приоритетов производство UNE привлекательные тревога аккумулятор ‘ траты публиковать боковая сторона противостоять дела продуктивность 41092 посягательство город Уоллер полезный экспоненциальный каталонский АВТОРСКОЕ ПРАВО загрязнение РЕДАКЦИЯ насос более роскошный снижение организация Джорджио достаточно поднимать Социальное Фаринелли Роман чарбита общий остаток средств медикамент Продолжать этика охотник cfst даровать HGAC современный полностью наголенник ПЦР последствие электрические ОКТЯБРЬ xit безопасность кислота обильный короткая идентификация использовать изолировать обеспечение рядом тема Стюарт гемо в отличие удерживать Erkehrsaufwand Ищу органы власти’ неделю несмотря на коммерция оплаченный до того как шанс XVI полоса гражданин хизофрения достижение производитель фонарь пляж Родригес большинство обрезка старение температура коллекционер’ нести название дух пример 601 просто ESTO добираться дверь возникать ДЕПО теджар Израиль уверенность FR Шварцштейн коробка ценообразование учиться Базель терапия обращаться участие Инеке диабетология Сковорода расширение конференция изучение инженерное дело упомянул беднее соединение существующий пересмотренный цель обвинение приемлемость протокол требовать ложный заменять редкий этический требование тахир пока батича стремиться существенный марш Hohenheim типичный Бейрул вклад безопасно голова расширять соответственно впоследствии складировать начало учреждать атеросклероз индика читательская аудитория микроскопический много Анетт последний алои Хохмейер рост островок наибольший учредил осложнение резиденция значит сообщение Numberrou предоставленный принес магазин с помощью МАЯ разделитель невосприимчивый дукционный вещь Комплект воспроизведение вокруг палка избегали синдром вместе не может предположение нет регулирующий отметка Кэрри коричневый купила практикующий сфера шерсть компания биотехнология COTEC выполнять головной мозг пригород три Фонд строгий приятнее изданный редакционная Barrio Каролинская оставаться начало dlmltri агентство эффективность разделение рядом, поблизости inc диапазон хадер вернулся изобретение AF508 пресенилин перевозчик информированный макрососудистый средний усвоение подрядчик CSIC тяжелая форма особенно взолнованный эффект уменьшенный ремонт суперконденсатор реальный консорциумы прилавок IDDM электрохимический поиск стандарт квартира Mcgalliard перспектива сообщество эко потребление повсеместно июл затрудненный до Марио решающий уробарометр усиление транспортировка Аннотация Bottazzo команда крупный инвалид барьер начальный место номер внешний вид высокий гипотеза выше продемонстрировал США помощь рисунок соревнование исследование комбинированный первый тонкий играть в общий Нидерланды подвергать опасности кандидат структура противоречивый симптоматический ВЕРСИЯ шум

Патент США на оптически активные функциональные жидкие маркеры Патент (Патент № 8,717,565 от 6 мая 2014 г.)

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к определению идентичности текучей среды, такой как органические текучие среды.В частности, изобретение обеспечивает удобные и надежные средства для идентификации текучей среды до, во время и / или после использования текучей среды. Настоящее изобретение также относится к системе для идентификации текучей среды путем прохождения луча поляризованного света через образец текучей среды и измерения величины оптического вращения, вызываемого образцом. Изобретение также предусматривает использование оптически активных маркеров для увеличения и / или регулирования количества вращения, которое наблюдается у образца. Измерение этого вращения, вызванного материалами в тестируемой жидкости, включая дополнительный оптически активный маркер, позволяет идентифицировать жидкость.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Различные типы текучих сред используются во многих и очень разных применениях. Во всех разнообразных типах и использовании текучих сред часто возникает необходимость идентифицировать текучую среду и / или источник текучей среды, а также необходимость в средствах идентификации текучей среды, которые должны быть удобными и надежными.

Функциональные жидкости, как определено в этой заявке, представляют собой жидкости, используемые в различных автомобилях, внедорожниках, дорожных транспортных средствах, оборудовании, машинах, металлообработке и промышленных приложениях.Важно знать идентичность таких функциональных жидкостей, чтобы предотвратить неправильное использование или несанкционированную подделку функциональных жидкостей. Правильная функциональная жидкость помогает обеспечить хорошее состояние устройства и / или оборудования, содержащего функциональную жидкость, а также может повлиять на соглашения о гарантии. Поэтому желательно иметь возможность определять идентичность таких функциональных жидкостей.

Существуют методы анализа и идентификации жидкостей с использованием различных реагентов для определения присутствия и / или концентрации различных компонентов жидкостей.Для определения присутствия и концентрации компонентов в функциональных жидкостях можно использовать специальные реагенты. Эти методы обычно анализируют pH, красители и загрязняющие вещества с использованием реактивных реагентов на тест-полосках. Эти методы также обычно требуют контролируемых условий для правильного функционирования реактивных реагентов. Кроме того, эти методы могут быть субъективными и неточными.

Маркеры использовались для идентификации жидкостей. Химические вещества, принимающие протоны, были предложены в качестве маркеров или меток, особенно для топлива, полученного из нефти.Маркер растворяется в жидкости для идентификации, а затем обнаруживается путем проведения химического теста на маркированной жидкости. Государственные органы иногда используют маркеры, чтобы гарантировать уплату соответствующих налогов на определенные сорта топлива. Нефтяные компании также маркируют свои продукты, чтобы помочь идентифицировать разбавленные или измененные продукты. Эти компании часто идут на большие расходы, чтобы удостовериться, что их фирменные продукты соответствуют определенным спецификациям, а также предоставляют свои продукты с эффективными пакетами присадок.Потребители полагаются на названия продуктов и обозначения качества, чтобы гарантировать, что покупаемый продукт имеет желаемое качество. Таким образом, важно уметь идентифицировать маркер в нефтепродукте.

Обычно присутствие вещества-маркера определяется и, необязательно, количественно путем экстракции жидкости водным или в значительной степени водным раствором кислотного вещества, точная природа которого может варьироваться в зависимости от вещества-маркера. Кислота реагирует с соединением-маркером с образованием легко видимого, более или менее интенсивно окрашенного катиона, растворенного в водной кислотной фазе.Этот способ раскрыт в патенте США No. № 5,145,573. Кроме того, в WO 03/078551 A2 раскрыт способ, в котором кислотное вещество наносится на индикаторную полоску. Тест-полоска погружается в масло, и маркер диазо-типа вступает в реакцию с кислотным веществом тест-полоски и меняет цвет.

Во многих из этих методов может возникнуть необходимость в повторении, обычно двух или трех, экстракциях жидкости для извлечения достаточного количества маркера для полной количественной оценки.Кроме того, извлеченная, отделенная фаза часто классифицируется как опасные отходы и создает проблемы с безопасным и законным удалением, особенно когда исследования проводятся «в полевых условиях». Кроме того, тестируемая функциональная жидкость может быть загрязнена процессом, что делает ее возвращение к исходному источнику нежелательным, что создает дополнительные проблемы с удалением отходов.

Многие владельцы / пользователи, операторы оборудования, зависящие от этих жидкостей, и / или розничные продавцы этих жидкостей в настоящее время полагаются на внешние лаборатории, чтобы определить конкретный идентификатор жидкости, когда возникают такие вопросы, например, при урегулировании гарантийных обязательств.Инструмент, позволяющий идентифицировать жидкость в полевых условиях, ускорит разрешение гарантийных и аналогичных проблем.

Целью настоящего изобретения является создание простой и удобной системы доставки для точного анализа идентичности жидкости. Еще одна цель изобретения — предоставить способ быстрого анализа функциональных жидкостей в полевых условиях. Задачей настоящего изобретения по-прежнему является создание способа быстрой проверки идентичности функциональной жидкости в полевых условиях необученным персоналом без точных измерений.Еще одной задачей изобретения является создание диагностического набора для быстрой идентификации функциональных жидкостей в полевых условиях.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение обеспечивает способ определения идентичности функциональной жидкости, включающий: (1) добавление к жидкости необязательного оптически активного маркерного компонента; (2) получение образца жидкости до, во время или после ее использования в приложении; (3) пропускание пучка поляризованного света через образец; (4) измерение вращения плоскости света после его прохождения через образец; (5) определение идентичности жидкости по наблюдаемой величине вращения.

Изобретение, кроме того, предусматривает использование хиральных молекул в качестве оптически активных маркеров, где хиральные молекулы, по меньшей мере, частично растворимы в жидкости. Компоненты оптически активных маркеров, используемые в способах по настоящему изобретению, не являются рацемическими в отношении по меньшей мере одного набора энантиомеров.

Изобретение дополнительно обеспечивает диагностический набор для анализа жидкости, содержащий источник поляризованного света, средство для направления луча поляризованного света от указанного источника через образец жидкости, средство для определения количества вращения в луч поляризованного света после того, как он проходит через образец, и средство передачи результатов от анализатора пользователю.Набор также может содержать письменные инструкции, изображения, рисунки и / или фотографии, чтобы помочь пользователю в идентификации жидкости. Жидкость, используемая с такими диагностическими наборами, может содержать оптически активный маркер.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение обеспечивает использование измеренного оптического вращения в качестве средства для идентификации и / или подтверждения источника жидкости, включая метод и устройство, такое как набор, для анализа и мониторинга. идентичность различных жидкостей.Изобретение также обеспечивает оптические маркеры, которые влияют на способность жидкости вращать поляризованный свет. Эти маркеры могут использоваться в способах, устройствах и наборах, описанных здесь, использоваться для идентификации и / или подтверждения источника текучей среды и / или мониторинга идентичности текучей среды.

Идентифицируемые жидкости

Жидкости, которые подходят для использования в настоящем изобретении, в том смысле, что способы и оптически активные маркеры, описанные здесь, могут использоваться для идентификации указанных жидкостей, не имеют чрезмерных ограничений.В общем, способы и оптически активные маркеры, описанные в данном документе, можно использовать в любой жидкости или текучей среде, для которых необходимо подтвердить и / или определить источник и / или идентичность текучей среды. Более конкретно, способы по изобретению направлены на функциональные жидкости, такие как смазочные материалы, топливо и промышленные жидкости.

Подходящие жидкости включают, например, функциональные жидкости, которые поступают из бесчисленных источников, включая двигатели внутреннего сгорания, стационарные двигатели, турбины, трансмиссии, дифференциалы, насосы, металлообрабатывающие предприятия, системы охлаждения, промышленные системы и тому подобное.К функциональным жидкостям относятся жидкости для автоматических трансмиссий, жидкости для бесступенчатой ​​трансмиссии, жидкости для бесступенчатой ​​трансмиссии, трансмиссионные жидкости для тягового привода, жидкости для механических трансмиссий, жидкости для гидроусилителя руля, антифризы, смазочные масла, консистентные смазки, смазочные материалы для картера, смазочные материалы для цилиндров, минеральные масла, Группа I. , II, III или IV базовые масла, дифференциальные смазки, турбинные смазки, трансмиссионные масла, смазочные материалы для коробок передач, масла для мостов, жидкости для сельскохозяйственных тракторов, трансформаторные жидкости, компрессорные жидкости, жидкости для систем охлаждения, жидкости для металлообработки, гидравлические жидкости, тормозные жидкости, промышленные жидкости, топливо, бесступенчатая трансмиссионная жидкость и тому подобное.В одном варианте функциональная жидкость представляет собой жидкость для автоматической коробки передач. В одном варианте функциональная жидкость представляет собой жидкость для рулевого управления с усилителем. В одном варианте функциональная текучая среда представляет собой топливо внутреннего сгорания, такое как бензин и / или дизельное топливо. В одном варианте функциональная текучая среда представляет собой компрессорные текучие среды, такие как смазочные материалы для воздушных компрессоров и / или турбинные смазочные материалы. В одном варианте функциональная жидкость представляет собой моторное масло внутреннего сгорания. В одном варианте осуществления функциональная жидкость испытывается после некоторого времени использования, вплоть до срока службы жидкости включительно.

В некоторых вариантах реализации жидкости являются органическими и не содержат каких-либо водных материалов, за исключением небольших количеств, которые обычно возникают из-за загрязнения. В таких вариантах осуществления жидкость может содержать менее 10% воды или менее 5%, менее 1% или даже менее 0,5% воды. В других вариантах реализации текучие среды включают как органические, так и водные текучие среды и их смеси.

Нежидкие материалы также могут быть использованы с изобретением, где не текучий материал растворяют в растворителе, расплавляют или иным образом переносят в текучую среду для тестирования.

Многие жидкости содержат материалы, которые вращают плоскость поляризованного света. Измерение этого вращения можно использовать для проверки идентичности текучей среды, как описано ниже. Такие материалы по своей природе содержат оптически активные материалы, которые могут использоваться в качестве маркеров в способах изобретения. Изобретение включает способы, которые измеряют оптическое вращение таких материалов и используют наблюдаемое вращение как средство для идентификации текучей среды. В некоторых вариантах осуществления жидкость может не обеспечивать какого-либо значительного вращения и / или может не вращать свет больше или меньше, чем конкурирующий, поддельный и / или альтернативный продукт.В таких случаях изобретение также предусматривает использование оптически активных маркеров, которые могут быть добавлены к жидкости для обеспечения другого уровня оптического вращения. Жидкость, которая затем включает необязательный маркер, затем может быть протестирована способами настоящего изобретения, и наблюдаемое оптическое вращение, которое было скорректировано с использованием оптических маркеров, описанных здесь, может быть использовано для идентификации и / или проверки. идентификация текучей среды

Растворители, которые будут использоваться с маркерами

В вариантах осуществления, где оптические маркеры добавляются к текучей среде, маркеры могут быть добавлены к текучей среде, с которой они используются, в качестве чистого компонента.В других вариантах реализации маркер может присутствовать в смеси, содержащей один или несколько оптических маркеров, как описано в данном документе, и дополнительно содержащих один или несколько растворителей, образующих концентрат маркера или раствор маркера, которые затем могут быть добавлены к жидкости. Эта смесь может дополнительно содержать дополнительные материалы, такие как, но не ограничиваясь ими, добавки, улучшающие рабочие характеристики, предназначенные для воздействия и / или улучшения характеристик получаемой функциональной жидкости.

Как описано выше, с маркерами можно использовать подходящие растворители, образуя раствор маркера.Используемый растворитель зависит от типа тестируемой функциональной жидкости, используемой системы доставки и используемого маркера. Комбинации растворителей также полезны, когда маркер, в зависимости от применения и типа желаемого анализа, не растворяется в функциональной жидкости. Растворители или комбинации растворителей могут быть выбраны с учетом желаемых свойств, включая хорошую растворяющую способность и смешиваемость с функциональной жидкостью и маркером, низкое давление пара при температурах окружающей среды, высокие температуры вспышки и тому подобное.

Подходящие растворители включают алифатические, ненасыщенные и ароматические углеводороды, спирты, гликоли, простые эфиры гликоля, полиолы, такие как глицерин, низшие спирты, такие как метанол, этанол и пропанол, простые и сложные эфиры, амиды, амины, воду и тому подобное. Могут использоваться комбинации растворителей.

В некоторых вариантах реализации маркерный компонент, который относится к смеси маркера и любых необязательных растворителей и / или дополнительных добавок, которые могут присутствовать, не содержит каких-либо материалов, которые могли бы ингибировать оптически активную природу маркерных соединений.В других вариантах реализации компонент маркера не содержит каких-либо материалов, которые могли бы реагировать с присутствующими оптически активными маркерами. В других вариантах реализации компонент-маркер не содержит каких-либо нехиральных и / или неоптически активных компонентов.

Понятно, что термин «маркер» и / или термин «маркерный компонент» при использовании в заявке, если не указано иное, может означать либо маркерное соединение, либо сами соединения без добавленного растворителя, либо раствор маркера, содержащий смесь маркерное соединение или соединения и один или несколько растворителей или дополнительных добавок.Растворитель может присутствовать в растворе маркера в диапазоне примерно 1 мас. % до примерно 99,99 мас. %, в одном варианте — около 5 мас. % до примерно 98 мас. % и в другом варианте примерно 1 мас. % до примерно 95,5 мас. % раствора маркера.

Оптически активные маркеры

Вещество маркера выбирается таким образом, чтобы оно было совместимо с жидкостью, с которой оно используется, и / или системой, в которой жидкость будет использоваться, или не противоречить ей. В одном варианте осуществления маркер выбирается таким образом, чтобы он выдерживал условия применения и / или эксплуатации, которым функциональная жидкость подвергается во время использования.

В одном варианте осуществления вещество-маркер используется для идентификации новых и / или неиспользованных жидкостей. В других вариантах осуществления полезно подтверждать идентичность использованной жидкости, например, для гарантийных требований. В этом случае маркер должен выжить и быть обнаруживаемым после испытания типичных условий эксплуатации и / или использования жидкости. В случае функциональных жидкостей это может включать в себя сохранение работы двигателя или другого устройства, в котором используется функциональная жидкость.

Маркеры, подходящие для использования в настоящем изобретении, могут быть описаны как оптически активные маркеры.Подходящие оптически активные маркеры включают: одно или несколько соединений, содержащих хиральные молекулы; одно или несколько соединений, молекулы которых содержат по меньшей мере один хиральный центр, ось или плоскость; одно или несколько соединений, молекулы которых содержат по меньшей мере один атом с тетраэдрической связью, в котором все четыре заместителя у атома с тетраэдрической связью различны; или смеси одного или нескольких соединений, описанных выше. Во всех вариантах осуществления, описанных выше, смесь используемых маркеров должна иметь общий энантиомерный избыток, чтобы существовала оптически активная система, так что система вращает плоскость поляризованного света.

В одном варианте реализации маркер по настоящему изобретению включает еще одно соединение, представленное формулой I, показанной ниже:

, где X представляет собой C, N, P или S; и R ¹ , R ² , R ³ и R ⁴ каждый независимо представляет собой гидрокарбильную группу, группу -OR ⁵ , где R ⁵ представляет собой водород или гидрокарбильную группу, ароматическую группу , неподеленная пара электронов, атом кислорода или азота с двойной связью, когда X представляет собой P или S, при условии, что каждая группа R уникальна и каждая группа R может содержать функциональные группы.То есть R ¹ , R ² , R ³ и R ⁴ каждая представляет собой уникальную группу заместителей, где R ¹ ≠ R ² ≠ R ³ ≠ ⁴ .

В некоторых вариантах реализации оптически активный маркер: растворим в маркируемой жидкости; демонстрирует измеримое оптическое вращение соответствующей длины волны света; не причиняет вреда маркируемой жидкости или области применения, в которой эта жидкость используется; бесцветен в видимой области спектра и / или не влияет на цвет маркируемой жидкости; не имеет запаха и / или вкуса и / или не влияет на запах и / или вкус маркируемой жидкости; или их комбинация.

Маркеры могут быть растворимы в жидкости от 0,00001% до 100% по весу. Соответствующие длины волн света, для которых подходящие маркеры вызывают вращение, включают ультрафиолетовый свет, видимый свет, инфракрасный свет или их комбинации. Достаточное оптическое вращение может быть на величину больше, чем предел погрешности в измерительном устройстве, используемом для оценки вращения, и в некоторых вариантах осуществления составляет не менее 0,1 градуса поворота, не менее 0,5 градуса, не менее 1 градуса или не менее 5 градусов. вращения.Возможны оптические вращения более чем на 360 градусов, но для этого изобретения молекулы, которые вращают свет более чем на 360 градусов, характеризуются оптическим вращением их фактического вращения минус 360.

Соединение считается оптически активным, если оно может вращать плоскость поляризованного света, который проходит через него. Величина оптического вращения определяется молекулярной структурой и концентрацией оптически активных молекул в жидкости, длиной волны света, проходящего через жидкость, длиной оптического пути и температурой.Каждое оптически активное вещество обеспечивает свое собственное удельное вращение, как определено в законе Био:

[α] λT = αλTc · l
, где [α] = удельное вращение, T = температура, λ = длина волны, α = оптическое вращение, c = концентрация. в г / 100 мл, 1 = длина оптического пути в дм. Вращение, вызванное оптически активными соединениями, является результатом взаимодействия хиральных материалов с поляризованным светом. Определенные энантиомеры хиральной молекулы поглощают поляризованный свет в разной степени. Энантиомеры можно назвать по направлению, в котором вращается плоскость поляризованного света.Если он поворачивает свет по часовой стрелке (как видит наблюдатель, к которому свет движется), энантиомер помечается (+) или «d-» для правовращения. Его зеркальное отображение обозначено (-) или «l-» для левовращающего.

Оптически активные соединения также могут быть помечены путем идентификации каждого изомера по пространственной конфигурации его атомов с использованием обозначения R / S. Система R / S не имеет фиксированного отношения к (+) / (-) или d- / l-системам, описанным выше. Система R / S маркирует каждый хиральный центр, присутствующий в соединении, с помощью R или S в соответствии с системой, в которой заместителям хирального центра назначается приоритет на основе атомного номера.Если хиральный центр ориентирован так, что заместители с самым низким приоритетом направлены в сторону от наблюдателя, тогда наблюдатель увидит две возможности: если приоритет трех других заместителей уменьшается по часовой стрелке, он обозначается R для Rectus; если приоритет заместителей уменьшается в направлении против часовой стрелки, он обозначается буквой S для Sinister. Эта система маркирует каждый хиральный центр (и / или каждую хиральную плоскость, хиральную ось и / или хиральную группу) в молекуле и поэтому имеет большую универсальность, чем другие системы, описанные выше.

Оптически активные соединения включают хиральные молекулы. Термин хиральный используется для описания объекта, который не накладывается на свое собственное зеркальное отображение. Хиральные молекулы могут иметь «точечную хиральность», когда хиральность молекулы сосредоточена вокруг одного атома, обычно атома углерода, который имеет четыре разных заместителя. Если все четыре заместителя у тетраэдрически связанного атома различны, молекула является хиральной. Для хиральности достаточно изотопных различий.

Приведенное выше определение хиральных молекул не ограничивается тетраэдрическими атомами углерода, но также включает любой другой тип центрального атома с подходящим набором групп заместителей или лигандов.Примеры включают октаэдрические и другие координационные геометрии подходящего замещения, включая комплексы металлов и неорганические структуры. Кроме того, молекула может иметь несколько хиральных центров. Также возможно, что молекула будет хиральной без точечной хиральности. Общие примеры включают 1,1′-би-2-нафтол (BINOL) и 1,3-дихлор-аллен, которые имеют аксиальную хиральность, и (E) -циклооктен, который имеет плоскую хиральность.

Стереогенный центр хиральной молекулы не обязательно должен располагаться на определенном атоме.Например, производные адамантана с подходящими заместителями также могут быть хиральными. В этих структурах целая группа, в отличие от одного атома, содержит четыре заместителя в пространственном расположении, что делает соединение не накладываемым на его зеркальное отображение.

Существует множество примеров, когда хиральность молекул является результатом затрудненного вращения групп или пространственного расположения химических фрагментов, несколько примеров которых включают 1,2,3,4-тетраметилциклооктатетраен, 2,5-диметил-бицикло-2 , 2,2-окт-2,5,7-триен и перхлортрифениламин.Кроме того, катенаны и молекулярные узлы, состоящие из ахиральных молекул, могут быть хиральными.

Хиральное вещество считается энантиочистым или гомохиральным, если присутствует только один из двух возможных энантиомеров. Смесь равных количеств двух энантиомеров называется рацемической смесью. Хиральное вещество является энантиообогащенным или гетерохиральным, когда присутствует избыток одного энантиомера, но не исключая другого. Энантиомерный избыток — это мера того, сколько одного энантиомера присутствует по сравнению с другим.Нерацемическая хиральная смесь также может быть названа скалемической.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения используется один или несколько оптически активных маркеров, в которых маркерный компонент и / или смесь не является рацемической смесью. То есть компонент-маркер является скалемическим и имеет энантиомерный избыток или имеет оптическую чистоту менее 100%. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение требует, чтобы смесь оптически активных маркеров содержала по меньшей мере 5 процентов по массе одного энантиомера для каждого присутствующего оптически активного маркера.В других вариантах осуществления избыток должен составлять 20 процентов по весу, 50 процентов по весу или даже 75 процентов по весу.

Маркеры по настоящему изобретению могут включать один или несколько из следующего: абсцизовая кислота, сульфоксимы, сульфаниламиды, сультамы, 1-ацетоксихавикол ацетат, аценафтенол, альфузозин, альпренолол, альтиазид, 1-аминоиндан, амлодинлетин 9, анис-антимилетин. , 9-антрилтрифторметилкарбинол, аргинин, атенолол, атропин, азеластин, бамбутерол, бендрофлуметиазид, бензоин, 1- (4-бензилокси) фенил, этанол, бета-нафтилметилкарбинол, бетаксолафилэфирол, бифоназолилэфир 1,1′- — (п-бромфенил) этанол, бромфенирамин, бакминстерфуллерен-енон [2 + 2] фотоаддукты, буфуралол, бупивакаин, бупранолол, каланолид, каразолол, карпрофен, карведилол, хлорфлурекол, метилхлормезанон, 2- 4-метилфенокси) пропионовая кислота, 2- (3-хлорфенокси) пропионовая кислота, 1- (м-хлорфенил) этанол, 1- (о-хлорфенил) этанол, 1- (п-хлорфенил) этанол, хлорталидон, циклопрофен, циталопрам, Кленбутерол, Кромакалим, Кротоксифос, Цикланделат , 1-Циклогексил-1-фенилуксусная кислота, 1-Циклопентил-1-фенилуксусная кислота, Циклопентилбензоилдиамид, Циклофосфамид, Циклотиазид, Циклотиазид-1, Комбретастатин D-1, Кумахлор, Циперметметрин, Девринол, 2,2 ‘-Диаминобинафталин, 2,3-дибензоилвинная кислота, диклофоп-метил, дигидротетрабеназин, дилтиазем, диметил (1-ацетокси-3-фенил-E-пропенил) фосфонат, диметил (1-гидрокси-3-фенил-E-пропенил) фосфонат, 3,5-диметиланилид-R, S-ибупрофен, динокап, диперодон, диперодон-1, диперодон-2, дифенилнитроксид, дизопирамид-1, дизопирамид-2, дитолуоилвинная кислота, дропропизин, этилацетат, этилацетат, дропропизин, этилацетат, этилацетат — (п-Гидроксифенокси) пропионат, эфедрин, этодолак, фенопрофен, фенотерол, феноксапроп-этил, фенвалерат, флаванон, флобуфен, флобуфен-1,4-фторфенилаланин, флуазифоп-бутил, флуридин-фторфенанол, 1- (пенопропилен) (Прозак), флурбипрофен, формотерол, глутамин, глутаминовая кислота, галоксифоп-этоксиэтил, лигнан Ханессиана, гесперитин, гелий сперитин-2, гексобарбитал, гистидин, гоматропин, гомоцистеин тиолактон, гуперзин, гидратроповая кислота, гидробензоин, гидроксихлорохин, 1- (4-гидроксифенил) этанол, п-гидрокси-фенилгликрофенокси-1-пропил-фенилгликрофенокси, 2- (4- , Ибупрофенол, Идазоксан, Ифенпродил, Ифенпродил-2, Ифосфамид, Индапамид, Индапамид-1, Индопрофен, Ипсдиенол, Изоксуприн, Исрадипин, Исрадипин-1, Кетамин, Кетоконазол, Кетопрофен-1, Кетопрофен-1, Кетопрофен-1 Лансопразол, Лауданозин, Лептофос, Фосвел, Лейцин, Лейцин-1, Лоразепам, Лорглумид, Локсопрофен, Люциферин, Миндальная кислота, McN 5652, Мекопроп, Мефенилоин, Металаксил, Метадон, Метадон-2, Метадон-2, Метадон, А-метадон-1, Метоксифенилфенилкарбинол, 1- (4-Метоксифенил) -2-бутанол, 1- (о-Метоксифенил) этанол, 1- (4-Метоксифенил) -2-пропанол, Метилманделат, 1- (о-Метилфенил) этанол, 1 — (м-Метилфенил) этанол, 1- (п-Метилфенил) этанол, метил-3-фенил-3-азидо-2-гидроксипропаноат.

Дополнительные примеры хиральных соединений включают: 3-Метил-5-фенилгидантоин, Метолахлор, Метолазон, Метопролол, Миансерин, Модафинил, Мосаприд, Надифлоксацин, Надолол, 1,1′-би-2-нафтол, a-нафтолметилкарбинол, 1-нафтил-2-бутанол, 2-нафтил-2-бутанол, 1-нафтилуреафенэтиламин, напропамид, напроксендиизопропиламид, напроксен (нормальная фаза), напроксен (обращенная фаза), напроксен (на ULMO CSP), напроксен-метэрингенин амид, , Никардипин, N-CBZ-валин, Никотин, Нимодипин, Нирванол, Норлейцин, Норвалин, Октопамин, Офлоксацин, Омепразол, Омепразол (Прилосек), Омепразол (Прилосек) -1, Оксазепам, Оспренолин-пентол, Оксибуторинол, Оксибуторинол , Пазуфлоксацин, перметрин, фенирамин, фенилциклогексилкарбинол, 2-фенилциклопропанкарбоксилат, фенилэтилкарбинол, фенил-изопропилкарбинол, фенилметилкарбинол, 1 — [(4-фенил) фенил] этанол, фенилфенил-1-фенилфенил, фенил-1-фенил пропанол, фенилпропилкарбинол, фенилтрибромметилкарбинол, Фенилаланин, фенилмасляная кислота, фенилэтиленгликоль, фенилглицин, 1-фенилпентанол, фенилянтарная кислота, пиндолол, пиндолол-1, пирпрофен, ингибитор PPO, практолол, празиквантел, прилофалол, пропафалолин, пропафалолин, пропафалолин, пропафалайд этил, ранолазин, ребамипид, ресметрин, SC 41930, серин, сетоксидим, соталол, оксид стирола, оксид стирола, сульконазол, сульфинпиразон, сулиндак, сульпирид, супрофен, таксифолин, темазепам, терфенадалин, терфенадалин-2, терфенадалин-1, терфенадалин-1, терфенадалин-1, -бутил-2- (бензамидо) циклопентилкарбамат, разделение, трет-бутилфенилкарбинол, тетрабеназин, тетрагидробензопирен-7-ол, тетрагидропальматин, тетрагидропалматин-2, тетрагидропириминдин, тетрагидрозолин, 1,2-на-тетрагидрозолин 1,2,3,4-тетрагидро-1-нафтиламин, тетраметрин, тетрамизол, талидомид, 2-тиофенэтанол, 3-тиофенэтанол, тиапрофеновая кислота, малеат тимолола, тофизопам, толперизон, транс-2-фенил-1-транс-циклогексанол, 11,1 2-диамино-9,10-дигидро-9,10-этаноантрацен, трихлорметиазид, 4- (трифторметил) миндальная кислота, 1,1,2-трифенил-1,2-этандиол, 1,3,5-трифенилпент-4- ин-1-он, 1- (м-трифторметилфенил) этанол, a-тритил-2-нафталин пропионовая кислота, основание Трогера, троглитазон, тролокс, тролокс-1, тролокс-метиловый эфир, тропикамид, триптофан, тулобутерол HCl, тирозин -100057, U-94863, транс-U-50488H, валин, ванилминдельная кислота, вапол, верапамил, верапамил, вилоксазин, варфарин (нормальная фаза), варфарин (обратная фаза), варфарин (на ULMO CSP), зопиклон.

Еще другие примеры хиральных соединений включают: D-аламинол, L-аламинол, L — (+) — изолейцинол, L — (+) — изолейцинол, L — (+) — лейцинол, D-метионинол, L-метионинол, D — (+) — фенилаланинол, L — (-) — фенилаланинол, D — (-) — альфа-фенилглицинол, L — (+) — альфа-фенилглицинол, D — (-) — пролинол, L — (+) — Пролинол, D-триптофанол, L-триптофанол, D-валинол, L-валинол, R — (-) — 2-амино-2-фенилэтанол, BOC-D-аламинол, BOC-L-аламинол, CBZ-D-аламинол, CBZ-L-аламинол, FMOC-D-аламинол, FMOC-L-аламинол, BOC-D — (+) — изолейцинол, BOC-L — (+) — изолейцинол, CBZ-D — (+) — изолейцинол, CBZ- L — (+) — изолейцинол, BOC-D — (+) — лейцинол, BOC-L — (+) — лейцинол, CBZ-D — (+) — лейцинол, CBZ-L — (+) — лейцинол, BOC- D-фенилаланинол, BOC-L-фенилаланинол, CBZ-D-фенилаланинол, CBZ-L-фенилаланинол, FMOC-D-фенилаланинол, FMOC-L-фенилаланинол, BOC-D-альфа-фенилглицин, BOC-L-альфа-альфа-фенилглицин, BOC-L-альфа-альфа-глицинол, BOC-L-альфа-альфа-фенилглицин. FMOC-D-альфа-фенилглицин, FMOC-L-альфа-фенилглицин, BOC-D-пролинол, BOC-L-пролинол, CBZ-D-пролинол, FMOC-D-пролинол, FMOC-L-пролинол, BOC-D- Валин ол, BOC-L-валинол, FMOC-L-валинол.

Дополнительные примеры хиральных соединений включают: S-2-метилпиперазин, R-2-метилпиперазин, S-1-Boc-2-метилпиперазин, R-1-Boc-2-метилпиперазин, S-пиперазин-2-карбоновая кислота. , R-пиперазин-2-карбоновая кислота, S-4-Boc-пиперазин-3-карбоновая кислота, R-4-Boc-пиперазин-3-карбоновая кислота, S-4-Boc-2-метилпиперазин, R-4- Boc-2-метилпиперазин, S-4-Boc-пиперазин-2-карбоксил-трет-бутиламид, R-4-Boc-пиперазин-2-карбоксил-трет-бутиламид, L-яблочная кислота, D-яблочная кислота, диэтил L — (+) — Тартрат, диэтил D — (-) — Тартрат, S-2-амино-1-пропанол, R-2-амино-1-пропанол, S-1-амино-2-пропанол, R-1- Амино-2-пропанол, S-1,2-декандиол, R-1,2-декандиол, S-2-амино-1-бутанол, R-2-амино-1-бутанол, S-октанол, R-октанол, S-2-фенилпропиламин, R-2-фенилпропиламин, S-2-гептанол, R-2-гептанол, S-3-гидрокси-гамма-бутиролактон, R-3-гидрокси-гамма-бутиролактон, S-2-метил- 1-бутанол, R-2-метил-1-бутанол, S-глицериновая кислота (гемикальциевая соль), R-глицериновая кислота (гемикальциевая соль), S-1-бензилглицерин, R-1-бензил глицерин, S-3-амино-1,2-пропанол, R-3-амино-1,2-пропанол, S-3-метил-2-бутанол, R-3-метил-2-бутанол, S-глицидол, R-глицидол, S-2-метил-1,4-бутандиол, R-2-метил-1,4-бутандиол, метиловый эфир S-3-гидроксиизомасляной кислоты, метиловый эфир R-3-гидроксиизомасляной кислоты, S-2- Метокси-2-фенилэтанол, R-2-Метокси-2-фенилэтанол.

Тартраты, тартримиды и аналогичные материалы, включая сложные эфиры, амиды и имиды, полученные из карбоновых кислот, таких как винная кислота, лимонная кислота и т.п., и сами кислоты также могут быть хиральными, и поэтому также могут быть подходящими маркерами для использование в настоящем изобретении. Маркеры по настоящему изобретению могут включать добавку, представленную ниже формулой I:

, в которой: Y и Y ‘независимо представляют собой -O-,> NH,> NR ³ , или имидную группу, образованную объединением обоих Y и группы Y ‘и образующие группу R ¹ -N <между двумя группами> C = O; X независимо представляет собой -Z — O — Z′-,> CH ₂ ,> CHR ⁴ ,> CR ⁴ R ⁵ ,> C (OH) (CO ₂ R ² ), > C (CO ₂ R ² ) ₂ ,> CHOR ⁶ или> CHCO ₂ R ² ; Z и Z ′ независимо равны> CH ₂ ,> CHR ⁴ ,> CR ⁴ R ⁵ ,> C (OH) (CO ₂ R ² ) или> CHOR ⁶ ; n равно от 0 до 10, или от 1 до 8, или от 1 до 6, или от 2 до 6, или от 2 до 4, при условии, что, когда n = 1, X не> CH ₂ , а когда n = 2, оба X не являются одновременно> CH ₂ ; m равно 0 или 1; R ¹ независимо представляет собой водород или гидрокарбильную группу, обычно содержащую от 1 до 150, от 4 до 30, или от 6 до 20, или от 10 до 20, или от 11 до 18, или от 8 до 10 атомов углерода, при условии, что когда R ¹ — водород, m равно 0, а n больше или равно 1; R ² представляет собой гидрокарбильную группу, обычно содержащую от 1 до 150, от 4 до 30, или от 6 до 20, или от 10 до 20, или от 11 до 18, или от 8 до 10 атомов углерода; R ³ , R ⁴ и R ⁵ независимо представляют собой гидрокарбильные группы, гидроксилсодержащие группы или карбоксилсодержащие группы; и R ⁶ представляет собой водород или гидрокарбильную группу, обычно содержащую от 1 до 150 или от 4 до 30 атомов углерода.В одном наборе вариантов осуществления гидрокарбильные группы, используемые для R ¹ и R ² , содержат по меньшей мере некоторую часть разветвленных гидрокарбильных групп.

В одном наборе вариантов реализации этот тип маркера представляет собой продукт конденсации (i), материала, представленного формулой II и (ii), смеси, содержащей разветвленный спирт или разветвленный амин, имеющий от 1 до примерно 150 атомов углерода, или их комбинации. из них;

, где каждый X независимо представляет собой -Z-O-Z-,> CH ₂ ,> CR ¹ R ² ,> C (OH) (CO ₂ R ² ) или> ЧОР ² ; и где каждый Z независимо представляет собой> CH ₂ ,> CR ¹ R ² ,> C (OH) (CO ₂ R ² ) или> CHOR ² ; m равно 0 или 1; n равно от 1 до 10 при условии, что, когда n = 1, X не> CH ₂ , а когда n = 2, оба X не> CH ₂ ; и каждый R ¹ и R ² независимо представляет собой водород или гидрокарбильную группу.

В одном варианте осуществления в формуле II X составляет> CHOR ² и n равно 2. В другом варианте осуществления в формуле II (X) n представляет собой -CH ₂ -C (OH) (CO ₂ R ² ) —CH ₂ -. В другом варианте осуществления m в формуле II равно 1. В других вариантах осуществления компонент (i) представляет собой винную кислоту, лимонную кислоту, производные любой кислоты или их комбинации.

В одном наборе вариантов реализации компонент (ii) включает смесь одного или нескольких разветвленных спиртов или аминов.В одном варианте смесь содержит один или несколько разветвленных спиртов, содержащих от 6 до 16 атомов углерода. В другом варианте смесь содержит разветвленные амины, содержащие от 6 до 16 атомов углерода.

В другом наборе вариантов реализации, отдельно или в комбинации с любым из вариантов реализации, описанных выше, компонент (ii) состоит из смеси одного или нескольких разветвленных спиртов или аминов, где общая смесь имеет по меньшей мере 25 процентов по массе разветвленных. в том, что по меньшей мере 25 процентов по массе спиртов и / или аминов, составляющих смесь, имеют разветвленную структуру.

В некоторых вариантах осуществления, описанных выше, маркер может быть представлен следующими формулами или их аналогичными версиями:

, где хиральные центры молекул обозначены звездочкой (*). В этих молекулах может быть более одного хирального центра, и оба атома углерода, расположенные между группами -COOH в формуле III и формуле IV выше, могут считаться хиральными центрами. Кроме того, каждая из групп -ОН в формулах III и IV может независимо также быть группой -OR, где R представляет собой гидрокарбильную группу.

Маркеры, которые подпадают под эти категории, включают диэфиры винной кислоты. Сложные диэфиры могут быть производными винной кислоты и спирта и / или смеси спиртов (например, Alfol ™ 810). Конкретные примеры включают D-винную кислоту / диэфир Alfol ™ 810, L-винную кислоту / диэфир Alfol ™ 810, D-винную кислоту / диэфир тридецилового спирта Alfol ™ 1214, диэфир L-винной кислоты / тридецилового спирта Alfol ™ 1214 и их смеси. до тех пор, пока смесь не является рацемической, то есть содержит избыток по крайней мере одного энантиомера.

В некоторых вариантах реализации маркеры, используемые в способах по изобретению, выбраны из группы, состоящей из винной кислоты и ее производных, глюкозы и ее производных, 2-бромбутана, D-аланинола, D-ананинола, L-аланинола, L- (+) — изолейцинол, D-лейцинол, L — (+) — лейцинол, D-метионинол, L-метионинол, D — (+) — фенилаланинол, L — (-) — фенилаланинол, D — (-) — альфа- фенилглицин, L — (+) — альфа-фенилглицин, D — (-) — пролинол, L — (+) — пролинол, D-триптофанол, L-триптофанол, D-валинол, L-валинол, R — (-) — 2-амино-2-фенилэтанол, 2-пентанол, 2-фторбутан, 3-метилгексан, 2-бромметил-2-хлорметил-1-фторпропан, N-этил-N-метил-N-пропилбутан-1-аминий, м- дихлорциклогексан и о-дихлорциклогексан, амино (гидрокси) уксусная кислота, 1-аминоэтанол, 2- [пиридин-3-ил (пиридин-4-ил) метил] пиридин, 2-амино-2-гидрокси-3-оксоуксусная кислота и их комбинации.

В других вариантах реализации маркеры, используемые в способах по изобретению, выбраны из группы, состоящей из холестерилацетата, D-винной кислоты / диэфира Alfol 810, L-винной кислоты / сложного диэфира Alfol 810, L-ментиллактата, S- ( -) — периллальдегид, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен, L-винная кислота / сложный диэфир тридецилового спирта Alfol 1214 и их комбинации при условии, что используемая смесь не является рацемической в ​​отношении хотя бы один маркер.

В еще других вариантах реализации: где задействованная жидкость представляет собой моторное масло легкового автомобиля, маркером может быть холестерилацетат, L-ментиллактат, S — (-) — периллальдегид, 1R — (-) — ментилацетат, R- ( +) — лимонен и их комбинации, где жидкость представляет собой масло для дизельных двигателей для тяжелых условий эксплуатации, маркером может быть S — (-) — периллальдегид, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации. ; где жидкость представляет собой жидкость для автоматической коробки передач, маркером может быть холестерилацетат, S — (-) — периллальдегид, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации; где текучая среда представляет собой трансмиссионное масло, маркером может быть L-ментиллактат, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации; где текучая среда представляет собой гидравлическую жидкость, маркером может быть L-ментиллактат, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации; где текучая среда представляет собой дизельное топливо, маркером может быть холестерилацетат, L-ментиллактат, S — (-) — периллальдегид, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации; и если текучая среда представляет собой бензин, маркером может быть L-ментилактат, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации.

В некоторых вариантах реализации маркеры по настоящему изобретению обеспечивают измеримое влияние на оптическое вращение, вызываемое текучей средой, в которой они используются. В некоторых вариантах осуществления это влияние превышает допустимую погрешность используемого метода тестирования. В других вариантах реализации маркер вызывает изменение оптического вращения, вызванного флюидом, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 50% или по меньшей мере на 100%.

Если присутствует, то количество маркера, присутствующего в жидкости, не ограничивается чрезмерно, пока имеется достаточно маркера для точной идентификации, и до тех пор, пока маркера не так много, чтобы он мешал работе и / или желаемым характеристикам жидкости.Маркеры могут присутствовать в жидкости в концентрациях от 10 до 10 000 частей на миллион или от 10 до 1000 частей на миллион. В другом варианте осуществления производители присутствуют в жидкости в количестве от 20 до 500 ч. / Млн; От 25 до 350 частей на миллион, от 30 до 130 частей на миллион; или до 100 частей на миллион. В других вариантах реализации маркеры присутствуют в жидкости в концентрациях от 0,05 до 10 мас.%, Или от 0,1 до 10 мас.%, Или от 0,5 до 10 мас.%. В еще других вариантах реализации маркеры присутствуют в количестве более 0,05 мас.% Или более 0,1 мас.%.

Само соединение-маркер может быть растворимым в воде, существенно растворимым в воде, практически нерастворимым в воде или нерастворимым в воде.В других вариантах осуществления маркерное соединение растворимо в органических жидкостях, таких как масло, по существу растворимо в органических жидкостях, по существу нерастворимо в органических жидкостях или нерастворимо в органических жидкостях. Маркерное соединение должно быть в значительной степени растворимым и / или растворимым в жидкости, с которой оно используется, или в значительной степени растворимым и / или растворимым по крайней мере в одном из компонентов, присутствующих в жидкости, с которой оно используется.

Оптические маркеры по настоящему изобретению могут использоваться в комбинации с другими маркерами, включая неоптически активные маркеры, такие как маркеры, которые реагируют с реагентами для обеспечения точной идентификации жидкости.Использование нескольких типов маркеров обеспечивает дополнительные уровни защиты и точности при проверке идентичности и / или источника тестируемой жидкости.

В другом варианте реализации маркерное соединение добавляют к функциональной жидкости, где маркер находится в форме концентрата, содержащего смесь маркерного соединения и полимерного соединения. Это полимерное соединение может быть одной или несколькими обычными добавками для функциональных жидкостей. В одном варианте реализации полимерные соединения, которые могут находиться в концентрате, включают диспергаторы, детергенты, противоизносные агенты, модификаторы трения, дезактиваторы металлов, ингибиторы коррозии, агенты набухания уплотнения, модификаторы вязкости, депрессанты температуры застывания, загустители и антиоксиданты, по отдельности или в комбинациях. друг с другом.

Необязательные компоненты

Необязательные компоненты могут быть добавлены к растворам маркеров или жидкостям. К ним относятся, например, поверхностно-активные вещества, маскирующие вещества и ароматизаторы для повышения привлекательности покупателя, а также противовспенивающие добавки для улучшения производства и использования продукции. Эти дополнительные компоненты могут использоваться в растворах маркеров по отдельности или в комбинации.

Необязательный компонент можно использовать в диапазоне от примерно 0% до примерно 20% мас., В одном варианте от примерно 0,01% до примерно 5% мас., А в другом варианте примерно 0%.От 1% до примерно 2% масс. Раствора реагента.

Способ

Настоящее изобретение включает способ определения идентичности текучей среды, включающий: (1) добавление необязательного маркерного компонента к текучей среде; (2) получение пробы жидкости до, во время или после использования жидкости; (3) пропускание пучка поляризованного света через образец; (4) анализировать результаты, измеряя вращение плоскости поляризованного света после его прохождения через образец; (5) определение и / или проверка идентичности текучей среды.В некоторых вариантах реализации наблюдаемое оптическое вращение вызвано самой жидкостью без добавления дополнительных оптических маркеров, описанных здесь. В других вариантах осуществления к жидкости добавляют один или несколько оптически активных маркеров, описанных выше, что вызывает по меньшей мере некоторое вращение, наблюдаемое в жидкости.

В одном варианте осуществления жидкость используется в приложении, и маркер выживает в условиях использования, так что он все еще позволяет идентифицировать жидкость после такого использования.Такие применения включают использование функциональной жидкости, такой как смазка, в устройстве, таком как двигатель, во время работы устройства. Включая воздействие на жидкость экстремальных температур, экстремальных давлений, движущихся частей и сдвига или их сочетаний.

Нет необходимости отбирать пробу во время реальной работы двигателя или другого устройства или оборудования, чтобы получить репрезентативную пробу жидкости. Проба жидкости может быть взята в любое время до, во время и / или после работы двигателя, оборудования или устройства.Образец жидкости может быть новым, использованным или их комбинациями. В одном варианте осуществления жидкостный тест особенно полезен во время и / или после работы в течение некоторого периода времени.

Диагностический комплект

Диагностический комплект включает средства для генерации поляризованного луча света и направления этого светового луча через образец жидкости. Набор дополнительно включает в себя средство для измерения вращения луча и / или плоскости поляризованного света после того, как он проходит через образец жидкости, по сравнению с лучом до того, как он пройдет через образец.Измерение количества вращения, которое испытывает плоскость поляризованного светового луча, является средством идентификации тестируемой жидкости.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение исключает использование реактивных маркеров или реактивных реагентов, когда содержащий маркер образец текучей среды реагирует с реагентом для получения наблюдаемого отклика, используемого для идентификации текучей среды.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение исключает идентификацию путем наблюдения за соединением, удаленным из функциональной жидкости путем экстракции водой.Водная экстракция включает в себя, когда соединение, такое как краситель, в функциональной жидкости удаляется из функциональной жидкости и втягивается в водный раствор из-за смешиваемости соединения с водой. Единственным показателем является соблюдение содержания соединения в водном растворе без какой-либо реакции.

В одном варианте функциональная жидкость представляет собой моторное масло. Образец моторного масла или другой проверяемой функциональной жидкости может быть получен с помощью щупа, входящего в состав двигателя, трансмиссии или другого смазываемого оборудования.Пользователь наберет некоторое количество масла вместе с щупом или другим устройством, которое затем может быть перенесено в контейнер для образца, где контейнер для образца сделан из стекла или другого материала, который позволяет свету проходить через него. Количество жидкости, необходимое для тестирования, зависит от используемого поляриметра, и в некоторых вариантах реализации может быть всего одна капля, или несколько миллилитров, или даже несколько сотен миллилитров. После того, как образец помещен в контейнер для образца, луч поляризованного света может быть направлен через образец, и можно будет наблюдать измерение вращения светового луча.Пользователь может обращаться к руководству и / или визуальным индикаторам, чтобы помочь интерпретировать наблюдаемое вращение и сделать определение в качестве идентичности, состояния и / или источника флюида.

Маркировка / идентификация жидкости желательна, потому что подделка и фальсификация / разбавление подлинных жидкостей является серьезной проблемой для поставщиков жидкости, поскольку подделка и фальсификация приводят к потере прибыли, жалобам клиентов и вреду для торговой марки и репутации. Простая и легкая в использовании система маркеров полезна, так как разные жидкости могут быть неотличимы при случайном осмотре.Химические анализы или физические свойства могут отличить различные жидкости друг от друга, но эти анализы требуют дорогостоящего лабораторного испытательного оборудования и часто занимают слишком много времени, чтобы быть практическим тестом идентификации конечного пользователя. Раскрытые способы позволяют конечным пользователям исключить поддельный или фальсифицированный продукт на основе оптического вращения эффективным и удобным способом.

Визуальные признаки

Анализ образца для испытаний может быть выполнен путем визуального осмотра вращения светового луча и может включать использование предоставленных визуальных указателей в качестве ориентира.

Визуальные знаки могут включать художественную визуализацию, воспроизведение фотографии одной или нескольких функциональных жидкостей в различных условиях с реагентом и без него. Визуальные обозначения обычно включают в себя одно представление, два представления или более двух представлений одной или нескольких функциональных жидкостей и / или диаграмму, показывающую ожидаемый световой луч, вращение для жидкости данного источника, данную идентичность и / или данную состояние. В одном варианте осуществления предпочтительные визуальные знаки представляют собой одно или несколько изображений, показывающих положительный результат идентификации, и одно или несколько изображений, показывающих отрицательный результат идентификации.Может быть предоставлен описательный текст, соответствующий каждому из этих примеров. Следует понимать, что может быть предусмотрено другое количество знаков.

СПЕЦИАЛЬНЫЙ ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Следующие данные были собраны с помощью цифрового поляриметра JASCO Model DIP-360, который работал в соответствии с инструкциями производителя. Для всех испытаний использовали испытательные ячейки длиной 100 мм.

Пример 1

Четыре полностью сформулированных, коммерчески доступных моторных масла обрабатывают несколькими оптически активными маркерами и тестируют с помощью поляриметра.Результаты представлены в таблице ниже.

ТАБЛИЦА 1 Данные по моторному маслу Маркер ¹ ConcOil A ² Oil B ² Oil C ² Oil D ² Нет — только масло 0% вес. -0,619 * 0,114 * холестерилацетат 10% масс. -3,6501% масс. wt0.374 * Нерастворимый -0.094 * Нерастворимый0,5% мас. 0,201 * Нерастворимый0,374 * 0,143 * 0,1% мас. 0,118 * 0,035 * 0,05% мас. -0,052 * 0,081 * L-ментиллактат10% мас. -4,6001% мас. -3,193 * -0,436 * Нерастворимый0. 5% масс-2,781 * 0,464 * Нерастворим 0,1% масс-0,445 * -0,719 * 0,05% масс-0,166 * -0,271 * S — (-) — периллальдегид 10% масс-11,6901% масс-10,622 * -11,887 * 0,5% масс -5,728 * Нерастворимые 0,1% масс-1,221 * 0,05% масс-0,061 * 1R — (-) — ментилацетат 10% масс-6,5801% масс-7,144 * -5,515 * -0,065 * -6,574 * 0,5% масс-2,781 * — 3,978 * 0,111 * -3,994 * 0,1 мас.% 0,05 мас.% R — (+) — лимонен 10% мас. 11,1301% мас. -0,860 * 12,695 * 0,5% мас.362 * 6,4160,1% масс. 1,903 * 0,05% масс. 0,250 * 0,595 * холестерин10% масс. Нерастворим .1% масс. Нерастворим. вес Нерастворимый Нерастворимый Нерастворимый Нерастворимый 0,1% Вес Нерастворимый Нерастворимый 0,05% Нерастворимый Нерастворимый ¹ Все зарегистрированные значения испытаний, отмеченные *, являются средними от 2 до 5 результатов. Все остальные сообщенные значения являются результатами отдельных испытаний.Пробелы указывают на то, что образец не был приготовлен с таким уровнем концентрации. ² Oil A — неиспользованное моторное масло Valvoline ™. Масло B — неиспользованное моторное масло Mobil 1 ™. Масло C — это моторное масло Valvoline ™, которое было слито из двигателя автомобиля после 3700 миль пробега. Oil D — моторное масло Rotella ™ для тяжелых условий эксплуатации. ³ Маркер представляет собой смесь энантиомеров D и L с небольшим избытком одного энантиомера.

Пример 2

Четыре полностью сформулированные коммерчески доступные функциональные жидкости обрабатывают несколькими оптически активными маркерами и тестируют с помощью поляриметра.Результаты представлены в таблице ниже.

ТАБЛИЦА 2 Функциональные характеристики жидкости Маркер ¹ ConcFluid A ² Fluid B ² Fluid C ² Fluid D ² Нет −0% −0,262 0,262 0% — только жидкость * -0,041 * 1,005 * холестерилацетат 10 мас.% -3,561% мас. 0,5% мас. DL-винная кислота / 10% мас. −1,0 до 1,0 Диэфир альфола 810 ³ 1 мас.% −0,085 * -0,058 * 0,328 * 0,5% мас. 0,412 * -0,257 * 0,086 * 0,981 * L-ментиллактат 10% масс 1.От 0 до 2,11 мас.% 0,262 * −3,282 * −2,876 * 0,5 мас.% −0,695 * −1,826 * −3,146 * S — (-) — периллальдегид 10 мас.% −11,241% мас. 0,5% мас. 1 R — (-) — ментилацетат 10 мас.% −6,561 мас.% −0,107 * −5,000 * −6,295 * 0,5% мас. −0,412 * 1,273 * −3,328 * −2,515 * R — (+) — лимонен 10% мас. 10,221% мас. −0,422 * 9,067 * 11,581 * 0,5 % мас. 0,588 * -0,010 * 5,512 * 6,201 * Холестерин 10% мас. Нерастворимые 1% мас. 0,5% мас. НерастворимыеL-винная кислота / Альфол 121410% мас. являются средними от 2 до 5 результатов.Все остальные сообщенные значения являются результатами отдельных испытаний. Пробелы указывают на то, что образец не был приготовлен с таким уровнем концентрации. ² Fluid A — неиспользованная жидкость для автоматических коробок передач. Жидкость B — это отработанная жидкость для автоматической коробки передач после 155 000 миль пробега. Жидкость C — трансмиссионное масло. Жидкость D — это гидравлическая жидкость. ³ Маркер представляет собой смесь энантиомеров D и L с небольшим избытком одного энантиомера.

Пример 3

Два имеющихся в продаже топлива обрабатывают несколькими оптически активными маркерами и тестируют с помощью поляриметра.Результаты представлены в таблице ниже.

ТАБЛИЦА 3 Данные по топливу Маркер ¹ ConcFuel A ² Топливо B ² Нет — только жидкость 0% по массе 0,042 * 0,002 * Холестерилацетат 1% по массе −3,358 * 1,545 * 0,1% мас. -0,312 * 0,05% мас. -0,106 * DL-винная кислота 1% мас. Кислоты / диэфир Alfol 810 ³ 0,5% мас. 0,343 * 0,1% мас. 0,05% мас. L-ментиллактат 1% мас. -6,718 * -6,589 * 0,5% масс -3,602 * 0,1% масс -0,643 * 0,05% масс-0,296 * S — (-) — периллальдегид 1% масс-11,651 * 0.5% мас. -5,629 * 0,1% мас. -0,991 * 0,05% мас. (+) — лимонен 1% мас. 10,593 * 0,5% мас. 6,183 * 5,447 * 0,1% мас. 0,992 * 0,05% мас. 0,565 * холестерин 1% мас. Нерастворим 0,5% мас. Нерастворим 0,1% мас. 12141% масс. Нерастворимый диэфир тридецилового спирта0,5% масс. Нерастворим 0,1% масс. Нерастворим. 0,05% масс. Нерастворим. ¹ . Все остальные сообщенные значения являются результатами отдельных испытаний.Пробелы указывают на то, что образец не был приготовлен с таким уровнем концентрации. ² Топливо A — коммерчески доступное дизельное топливо. Топливо B — это коммерчески доступный бензин. ³ Маркер представляет собой смесь энантиомеров D и L с небольшим избытком одного энантиомера.

Результаты показывают, что некоторые жидкости обеспечивают измеримую величину оптического вращения, которая может использоваться в способах по настоящему изобретению как средство идентификации и / или проверки идентичности жидкости.Результаты также показывают, что оптически активные маркеры, определенные выше, могут использоваться в таких текучих средах для регулирования, воздействия и / или изменения величины оптического вращения, вызываемого текучей средой, что может облегчить идентификацию текучей среды. Маркеры также могут использоваться для достижения количества вращения, которое в противном случае не присутствовало бы в такой текучей среде, обеспечивая, таким образом, удобные средства идентификации и / или проверки идентичности текучей среды.

Хотя изобретение было объяснено, следует понимать, что различные его модификации станут очевидны специалистам в данной области после прочтения описания.Следовательно, следует понимать, что раскрытое здесь изобретение предназначено для охвата таких модификаций, которые подпадают под объем прилагаемой формулы изобретения.

Каждый из документов, упомянутых выше, включен в настоящий документ посредством ссылки. За исключением примеров или если явно указано иное, все числовые величины в этом описании, определяющие количества материалов, условия реакции, молекулярные массы, количество атомов углерода и т.п., следует понимать как измененные словом «примерно».Если не указано иное, каждый химикат или состав, упомянутые в данном документе, следует интерпретировать как материал коммерческого сорта, который может содержать изомеры, побочные продукты, производные и другие подобные материалы, которые обычно считаются присутствующими в коммерческом классе. Однако количество каждого химического компонента представлено без учета любого растворителя или масла-разбавителя, которые обычно могут присутствовать в коммерческом материале, если не указано иное. Если не указано иное, все процентные значения являются массовыми процентами.Следует понимать, что верхние и нижние количества, диапазоны и пределы соотношений, изложенные здесь, могут быть независимо объединены. Точно так же диапазоны и количества для каждого элемента изобретения могут использоваться вместе с диапазонами или количествами для любого из других элементов. Используемое здесь выражение «состоящий по существу из» позволяет включать вещества, которые существенно не влияют на основные и новые характеристики рассматриваемой композиции.

Заявка на патент США для оптически активных функциональных жидких маркеров Заявка на патент (Заявка № 20110292388 от 1 декабря 2011 г.)

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к определению идентичности текучей среды, такой как органические текучие среды.В частности, изобретение обеспечивает удобные и надежные средства для идентификации текучей среды до, во время и / или после использования текучей среды. Настоящее изобретение также относится к системе для идентификации текучей среды путем прохождения луча поляризованного света через образец текучей среды и измерения величины оптического вращения, вызываемого образцом. Изобретение также предусматривает использование оптически активных маркеров для увеличения и / или регулирования количества вращения, которое наблюдается у образца. Измерение этого вращения, вызванного материалами в тестируемой жидкости, включая дополнительный оптически активный маркер, позволяет идентифицировать жидкость.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Различные типы текучих сред используются во многих и очень разных применениях. Во всех разнообразных типах и использовании текучих сред часто возникает необходимость идентифицировать текучую среду и / или источник текучей среды, а также необходимость в средствах идентификации текучей среды, которые должны быть удобными и надежными.

Функциональные жидкости, как определено в этой заявке, представляют собой жидкости, используемые в различных автомобилях, внедорожниках, дорожных транспортных средствах, оборудовании, машинах, металлообработке и промышленных приложениях.Важно знать идентичность таких функциональных жидкостей, чтобы предотвратить неправильное использование или несанкционированную подделку функциональных жидкостей. Правильная функциональная жидкость помогает обеспечить хорошее состояние устройства и / или оборудования, содержащего функциональную жидкость, а также может повлиять на соглашения о гарантии. Поэтому желательно иметь возможность определять идентичность таких функциональных жидкостей.

Существуют методы анализа и идентификации жидкостей с использованием различных реагентов для определения присутствия и / или концентрации различных компонентов жидкостей.Для определения присутствия и концентрации компонентов в функциональных жидкостях можно использовать специальные реагенты. Эти методы обычно анализируют pH, красители и загрязняющие вещества с использованием реактивных реагентов на тест-полосках. Эти методы также обычно требуют контролируемых условий для правильного функционирования реактивных реагентов. Кроме того, эти методы могут быть субъективными и неточными.

Маркеры использовались для идентификации жидкостей. Химические вещества, принимающие протоны, были предложены в качестве маркеров или меток, особенно для топлива, полученного из нефти.Маркер растворяется в жидкости для идентификации, а затем обнаруживается путем проведения химического теста на маркированной жидкости. Государственные органы иногда используют маркеры, чтобы гарантировать уплату соответствующих налогов на определенные сорта топлива. Нефтяные компании также маркируют свои продукты, чтобы помочь идентифицировать разбавленные или измененные продукты. Эти компании часто идут на большие расходы, чтобы удостовериться, что их фирменные продукты соответствуют определенным спецификациям, а также предоставляют свои продукты с эффективными пакетами присадок.Потребители полагаются на названия продуктов и обозначения качества, чтобы гарантировать, что покупаемый продукт имеет желаемое качество. Таким образом, важно уметь идентифицировать маркер в нефтепродукте.

Обычно присутствие вещества-маркера определяется и, необязательно, количественно путем экстракции жидкости водным или в значительной степени водным раствором кислотного вещества, точная природа которого может варьироваться в зависимости от вещества-маркера. Кислота реагирует с соединением-маркером с образованием легко видимого, более или менее интенсивно окрашенного катиона, растворенного в водной кислотной фазе.Этот способ раскрыт в патенте США No. № 5,145,573. Кроме того, в WO 03/078551 A2 раскрыт способ, в котором кислотное вещество наносится на индикаторную полоску. Тест-полоска погружается в масло, и маркер диазо-типа вступает в реакцию с кислотным веществом тест-полоски и меняет цвет.

Во многих из этих методов может возникнуть необходимость в повторении, обычно двух или трех, экстракциях жидкости для извлечения достаточного количества маркера для полной количественной оценки.Кроме того, извлеченная, отделенная фаза часто классифицируется как опасные отходы и создает проблемы с безопасным и законным удалением, особенно когда исследования проводятся «в полевых условиях». Кроме того, тестируемая функциональная жидкость может быть загрязнена процессом, что делает ее возвращение к исходному источнику нежелательным, что создает дополнительные проблемы с удалением отходов.

Многие владельцы / пользователи, операторы оборудования, зависящие от этих жидкостей, и / или розничные продавцы этих жидкостей в настоящее время полагаются на внешние лаборатории, чтобы определить конкретный идентификатор жидкости, когда возникают такие вопросы, например, при урегулировании гарантийных обязательств.Инструмент, позволяющий идентифицировать жидкость в полевых условиях, ускорит разрешение гарантийных и аналогичных проблем.

Целью настоящего изобретения является создание простой и удобной системы доставки для точного анализа идентичности жидкости. Еще одна цель изобретения — предоставить способ быстрого анализа функциональных жидкостей в полевых условиях. Задачей настоящего изобретения по-прежнему является создание способа быстрой проверки идентичности функциональной жидкости в полевых условиях необученным персоналом без точных измерений.Еще одной задачей изобретения является создание диагностического набора для быстрой идентификации функциональных жидкостей в полевых условиях.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение обеспечивает способ определения идентичности функциональной жидкости, включающий: (1) добавление к жидкости необязательного оптически активного маркерного компонента; (2) получение образца жидкости до, во время или после ее использования в приложении; (3) пропускание пучка поляризованного света через образец; (4) измерение вращения плоскости света после его прохождения через образец; (5) определение идентичности жидкости по наблюдаемой величине вращения.

Изобретение, кроме того, предусматривает использование хиральных молекул в качестве оптически активных маркеров, где хиральные молекулы, по меньшей мере, частично растворимы в жидкости. Компоненты оптически активных маркеров, используемые в способах по настоящему изобретению, не являются рацемическими в отношении по меньшей мере одного набора энантиомеров.

Изобретение дополнительно обеспечивает диагностический набор для анализа жидкости, содержащий источник поляризованного света, средство для направления луча поляризованного света от указанного источника через образец жидкости, средство для определения количества вращения в луч поляризованного света после того, как он проходит через образец, и средство передачи результатов от анализатора пользователю.Набор также может содержать письменные инструкции, изображения, рисунки и / или фотографии, чтобы помочь пользователю в идентификации жидкости. Жидкость, используемая с такими диагностическими наборами, может содержать оптически активный маркер.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение обеспечивает использование измеренного оптического вращения в качестве средства для идентификации и / или подтверждения источника жидкости, включая метод и устройство, такое как набор, для анализа и мониторинга. идентичность различных жидкостей.Изобретение также обеспечивает оптические маркеры, которые влияют на способность жидкости вращать поляризованный свет. Эти маркеры могут использоваться в способах, устройствах и наборах, описанных здесь, использоваться для идентификации и / или подтверждения источника текучей среды и / или мониторинга идентичности текучей среды.

Идентифицируемые жидкости

Жидкости, которые подходят для использования в настоящем изобретении, в том смысле, что способы и оптически активные маркеры, описанные здесь, могут использоваться для идентификации указанных жидкостей, не имеют чрезмерных ограничений.В общем, способы и оптически активные маркеры, описанные в данном документе, можно использовать в любой жидкости или текучей среде, для которых необходимо подтвердить и / или определить источник и / или идентичность текучей среды. Более конкретно, способы по изобретению направлены на функциональные жидкости, такие как смазочные материалы, топливо и промышленные жидкости.

Подходящие жидкости включают, например, функциональные жидкости, которые поступают из бесчисленных источников, включая двигатели внутреннего сгорания, стационарные двигатели, турбины, трансмиссии, дифференциалы, насосы, металлообрабатывающие предприятия, системы охлаждения, промышленные системы и тому подобное.К функциональным жидкостям относятся жидкости для автоматических трансмиссий, жидкости для бесступенчатой ​​трансмиссии, жидкости для бесступенчатой ​​трансмиссии, трансмиссионные жидкости для тягового привода, жидкости для механических трансмиссий, жидкости для гидроусилителя руля, антифризы, смазочные масла, консистентные смазки, смазочные материалы для картера, смазочные материалы для цилиндров, минеральные масла, Группа I. , II, III или IV базовые масла, дифференциальные смазки, турбинные смазки, трансмиссионные масла, смазочные материалы для коробок передач, масла для мостов, жидкости для сельскохозяйственных тракторов, трансформаторные жидкости, компрессорные жидкости, жидкости для систем охлаждения, жидкости для металлообработки, гидравлические жидкости, тормозные жидкости, промышленные жидкости, топливо, бесступенчатая трансмиссионная жидкость и тому подобное.В одном варианте функциональная жидкость представляет собой жидкость для автоматической коробки передач. В одном варианте функциональная жидкость представляет собой жидкость для рулевого управления с усилителем. В одном варианте функциональная текучая среда представляет собой топливо внутреннего сгорания, такое как бензин и / или дизельное топливо. В одном варианте функциональная текучая среда представляет собой компрессорные текучие среды, такие как смазочные материалы для воздушных компрессоров и / или турбинные смазочные материалы. В одном варианте функциональная жидкость представляет собой моторное масло внутреннего сгорания. В одном варианте осуществления функциональная жидкость испытывается после некоторого времени использования, вплоть до срока службы жидкости включительно.

В некоторых вариантах реализации жидкости являются органическими и не содержат каких-либо водных материалов, за исключением небольших количеств, которые обычно возникают из-за загрязнения. В таких вариантах осуществления жидкость может содержать менее 10% воды или менее 5%, менее 1% или даже менее 0,5% воды. В других вариантах реализации текучие среды включают как органические, так и водные текучие среды и их смеси.

Нежидкие материалы также могут быть использованы с изобретением, где не текучий материал растворяют в растворителе, расплавляют или иным образом переносят в текучую среду для тестирования.

Многие жидкости содержат материалы, которые вращают плоскость поляризованного света. Измерение этого вращения можно использовать для проверки идентичности текучей среды, как описано ниже. Такие материалы по своей природе содержат оптически активные материалы, которые могут использоваться в качестве маркеров в способах изобретения. Изобретение включает способы, которые измеряют оптическое вращение таких материалов и используют наблюдаемое вращение как средство для идентификации текучей среды. В некоторых вариантах осуществления жидкость может не обеспечивать какого-либо значительного вращения и / или может не вращать свет больше или меньше, чем конкурирующий, поддельный и / или альтернативный продукт.В таких случаях изобретение также предусматривает использование оптически активных маркеров, которые могут быть добавлены к жидкости для обеспечения другого уровня оптического вращения. Жидкость, которая затем включает необязательный маркер, затем может быть протестирована способами настоящего изобретения, и наблюдаемое оптическое вращение, которое было скорректировано с использованием оптических маркеров, описанных здесь, может быть использовано для идентификации и / или проверки. идентификация текучей среды

Растворители, которые будут использоваться с маркерами

В вариантах осуществления, где оптические маркеры добавляются к текучей среде, маркеры могут быть добавлены к текучей среде, с которой они используются, в качестве чистого компонента.В других вариантах реализации маркер может присутствовать в смеси, содержащей один или несколько оптических маркеров, как описано в данном документе, и дополнительно содержащих один или несколько растворителей, образующих концентрат маркера или раствор маркера, которые затем могут быть добавлены к жидкости. Эта смесь может дополнительно содержать дополнительные материалы, такие как, но не ограничиваясь ими, добавки, улучшающие рабочие характеристики, предназначенные для воздействия и / или улучшения характеристик получаемой функциональной жидкости.

Как описано выше, с маркерами можно использовать подходящие растворители, образуя раствор маркера.Используемый растворитель зависит от типа тестируемой функциональной жидкости, используемой системы доставки и используемого маркера. Комбинации растворителей также полезны, когда маркер, в зависимости от применения и типа желаемого анализа, не растворяется в функциональной жидкости. Растворители или комбинации растворителей могут быть выбраны с учетом желаемых свойств, включая хорошую растворяющую способность и смешиваемость с функциональной жидкостью и маркером, низкое давление пара при температурах окружающей среды, высокие температуры вспышки и тому подобное.

Подходящие растворители включают алифатические, ненасыщенные и ароматические углеводороды, спирты, гликоли, простые эфиры гликоля, полиолы, такие как глицерин, низшие спирты, такие как метанол, этанол и пропанол, простые и сложные эфиры, амиды, амины, воду и тому подобное. Могут использоваться комбинации растворителей.

В некоторых вариантах реализации маркерный компонент, который относится к смеси маркера и любых необязательных растворителей и / или дополнительных добавок, которые могут присутствовать, не содержит каких-либо материалов, которые могли бы ингибировать оптически активную природу маркерных соединений.В других вариантах реализации компонент маркера не содержит каких-либо материалов, которые могли бы реагировать с присутствующими оптически активными маркерами. В других вариантах реализации компонент-маркер не содержит каких-либо нехиральных и / или неоптически активных компонентов.

Понятно, что термин «маркер» и / или термин «маркерный компонент» при использовании в заявке, если не указано иное, может означать либо маркерное соединение, либо сами соединения без добавленного растворителя, либо раствор маркера, содержащий смесь маркерное соединение или соединения и один или несколько растворителей или дополнительных добавок.Растворитель может присутствовать в растворе маркера в диапазоне примерно 1 мас. % до примерно 99,99 мас. %, в одном варианте — около 5 мас. % до примерно 98 мас. % и в другом варианте примерно 1 мас. % до примерно 95,5 мас. % раствора маркера.

Оптически активные маркеры

Маркерное вещество выбирается таким образом, чтобы оно было совместимо с жидкостью, с которой оно используется, и / или системой, в которой жидкость будет использоваться, или не быть неблагоприятной для нее. В одном варианте осуществления маркер выбирается таким образом, чтобы он выдерживал условия применения и / или эксплуатации, которым функциональная жидкость подвергается во время использования.

В одном варианте осуществления вещество-маркер используется для идентификации новых и / или неиспользованных жидкостей. В других вариантах осуществления полезно подтверждать идентичность использованной жидкости, например, для гарантийных требований. В этом случае маркер должен выжить и быть обнаруживаемым после испытания типичных условий эксплуатации и / или использования жидкости. В случае функциональных жидкостей это может включать в себя сохранение работы двигателя или другого устройства, в котором используется функциональная жидкость.

Маркеры, подходящие для использования в настоящем изобретении, могут быть описаны как оптически активные маркеры.Подходящие оптически активные маркеры включают: одно или несколько соединений, содержащих хиральные молекулы; одно или несколько соединений, молекулы которых содержат по меньшей мере один хиральный центр, ось или плоскость; одно или несколько соединений, молекулы которых содержат по меньшей мере один атом с тетраэдрической связью, в котором все четыре заместителя у атома с тетраэдрической связью различны; или смеси одного или нескольких соединений, описанных выше. Во всех вариантах осуществления, описанных выше, смесь используемых маркеров должна иметь общий энантиомерный избыток, чтобы существовала оптически активная система, так что система вращает плоскость поляризованного света.

В одном варианте реализации маркер по настоящему изобретению включает еще одно соединение, представленное формулой I, показанной ниже:

, где X представляет собой C, N, P или S; и R ¹ , R ² , R ³ и R ⁴ каждый независимо представляет собой гидрокарбильную группу, группу -OR ⁵ , где R ⁵ представляет собой водород или гидрокарбильную группу, ароматическую группу , неподеленная пара электронов, атом кислорода или азота с двойной связью, когда X представляет собой P или S, при условии, что каждая группа R уникальна и каждая группа R может содержать функциональные группы.То есть R ¹ , R ² , R ³ и R ⁴ каждая представляет собой уникальную группу заместителей, где R ¹ #R ² #R ³ #R ⁴ .

В некоторых вариантах реализации оптически активный маркер: растворим в маркируемой жидкости; демонстрирует измеримое оптическое вращение соответствующей длины волны света; не причиняет вреда маркируемой жидкости или области применения, в которой эта жидкость используется; бесцветен в видимой области спектра и / или не влияет на цвет маркируемой жидкости; не имеет запаха и / или вкуса и / или не влияет на запах и / или вкус маркируемой жидкости; или их комбинация.

Маркеры могут быть растворимы в жидкости от 0,00001% до 100% по весу. Соответствующие длины волн света, для которых подходящие маркеры вызывают вращение, включают ультрафиолетовый свет, видимый свет, инфракрасный свет или их комбинации. Достаточное оптическое вращение может быть на величину больше, чем предел погрешности в измерительном устройстве, используемом для оценки вращения, и в некоторых вариантах осуществления составляет не менее 0,1 градуса поворота, не менее 0,5 градуса, не менее 1 градуса или не менее 5 градусов. вращения.Возможны оптические вращения более чем на 360 градусов, но для этого изобретения молекулы, которые вращают свет более чем на 360 градусов, характеризуются оптическим вращением их фактического вращения минус 360.

Соединение считается оптически активным, если оно может вращать плоскость поляризованного света, который проходит через него. Величина оптического вращения определяется молекулярной структурой и концентрацией оптически активных молекул в жидкости, длиной волны света, проходящего через жидкость, длиной оптического пути и температурой.Каждое оптически активное вещество обеспечивает свое собственное удельное вращение, как определено в законе Био:

[α] λT = αλTc · l

, где [α] = удельное вращение, T = температура, λ = длина волны, α = оптическое вращение, c = концентрация в г / 100 мл, 1 = длина оптического пути в дм. Вращение, вызванное оптически активными соединениями, является результатом взаимодействия хиральных материалов с поляризованным светом. Определенные энантиомеры хиральной молекулы поглощают поляризованный свет в разной степени. Энантиомеры можно назвать по направлению, в котором вращается плоскость поляризованного света.Если он поворачивает свет по часовой стрелке (как видит наблюдатель, к которому свет движется), энантиомер помечается (+) или «d-» для правовращения. Его зеркальное отображение обозначено (-) или «l-» для левовращающего.

Оптически активные соединения также могут быть помечены путем идентификации каждого изомера по пространственной конфигурации его атомов с использованием обозначения R / S. Система R / S не имеет фиксированного отношения к (+) / (-) или d- / l-системам, описанным выше. Система R / S маркирует каждый хиральный центр, присутствующий в соединении, с помощью R или S в соответствии с системой, в которой заместителям хирального центра назначается приоритет на основе атомного номера.Если хиральный центр ориентирован так, что заместители с самым низким приоритетом направлены в сторону от наблюдателя, тогда наблюдатель увидит две возможности: если приоритет трех других заместителей уменьшается по часовой стрелке, он обозначается R для Rectus; если приоритет заместителей уменьшается в направлении против часовой стрелки, он обозначается буквой S для Sinister. Эта система маркирует каждый хиральный центр (и / или каждую хиральную плоскость, хиральную ось и / или хиральную группу) в молекуле и поэтому имеет большую универсальность, чем другие системы, описанные выше.

Оптически активные соединения включают хиральные молекулы. Термин хиральный используется для описания объекта, который не накладывается на свое собственное зеркальное отображение. Хиральные молекулы могут иметь «точечную хиральность», когда хиральность молекулы сосредоточена вокруг одного атома, обычно атома углерода, который имеет четыре разных заместителя. Если все четыре заместителя у тетраэдрически связанного атома различны, молекула является хиральной. Для хиральности достаточно изотопных различий.

Приведенное выше определение хиральных молекул не ограничивается тетраэдрическими атомами углерода, но также включает любой другой тип центрального атома с подходящим набором групп заместителей или лигандов.Примеры включают октаэдрические и другие координационные геометрии подходящего замещения, включая комплексы металлов и неорганические структуры. Кроме того, молекула может иметь несколько хиральных центров. Также возможно, что молекула будет хиральной без точечной хиральности. Общие примеры включают 1,1′-би-2-нафтол (BINOL) и 1,3-дихлор-аллен, которые имеют аксиальную хиральность, и (E) -циклооктен, который имеет плоскую хиральность.

Стереогенный центр хиральной молекулы не обязательно должен располагаться на определенном атоме.Например, производные адамантана с подходящими заместителями также могут быть хиральными. В этих структурах целая группа, в отличие от одного атома, содержит четыре заместителя в пространственном расположении, что делает соединение не накладываемым на его зеркальное отображение.

Существует множество примеров, когда хиральность молекул является результатом затрудненного вращения групп или пространственного расположения химических фрагментов, несколько примеров которых включают 1,2,3,4-тетраметилциклооктатетраен, 2,5-диметил-бицикло-2 , 2,2-окт-2,5,7-триен и перхлортрифениламин.Кроме того, катенаны и молекулярные узлы, состоящие из ахиральных молекул, могут быть хиральными.

Хиральное вещество считается энантиочистым или гомохиральным, если присутствует только один из двух возможных энантиомеров. Смесь равных количеств двух энантиомеров называется рацемической смесью. Хиральное вещество является энантиообогащенным или гетерохиральным, когда присутствует избыток одного энантиомера, но не исключая другого. Энантиомерный избыток — это мера того, сколько одного энантиомера присутствует по сравнению с другим.Нерацемическая хиральная смесь также может быть названа скалемической.

В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении используется один или несколько оптически активных маркеров, где компонент маркера и / или смесь не является рацемической смесью. То есть компонент-маркер является скалемическим и имеет энантиомерный избыток или имеет оптическую чистоту менее 100%. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение требует, чтобы смесь оптически активных маркеров содержала по меньшей мере 5 процентов по массе одного энантиомера для каждого присутствующего оптически активного маркера.В других вариантах осуществления избыток должен составлять 20 процентов по весу, 50 процентов по весу или даже 75 процентов по весу.

Маркеры по настоящему изобретению могут включать один или несколько из следующих: абсцизовая кислота, сульфоксимы, сульфонамиды, сультамы, 1-ацетоксихавикол ацетат, аценафтенол, альфузозин, альпренолол, альтиазид, 1-аминоиндан, амлодинлетин 9, анис-антинолетин 9. , 9-антрилтрифторметилкарбинол, аргинин, атенолол, атропин, азеластин, бамбутерол, бендрофлуметиазид, бензоин, 1- (4-бензилокси) фенил, этанол, бета-нафтилметилкарбинол, бетаксолафилэфирол, бифоназолилэфир 1,1′- — (п-бромфенил) этанол, бромфенирамин, бакминстерфуллерен-енон [2 + 2] фотоаддукты, буфуралол, бупивакаин, бупранолол, каланолид, каразолол, карпрофен, карведилол, хлорфлурекол, метилхлормезанон, 2- 4-метилфенокси) пропионовая кислота, 2- (3-хлорфенокси) пропионовая кислота, 1- (м-хлорфенил) этанол, 1- (о-хлорфенил) этанол, 1- (п-хлорфенил) этанол, хлорталидон, циклопрофен, циталопрам, Кленбутерол, Кромакалим, Кротоксифос, Цикланделат, 1-Cy клогексил-1-фенилуксусная кислота, 1-циклопентил-1-фенилуксусная кислота, циклопентилбензоил-диамид, циклофосфамид, циклотиазид, циклотиазид-1, комбретастатин D-1, кумахлор, циперметрин, девринолинол, напомерафамид, циперметинол, дэвринлен, напомерафамид, , 2,3-дибензоилвинная кислота, диклофоп-метил, дигидротетрабеназин, дилтиазем, диметил (1-ацетокси-3-фенил-E-пропенил) фосфонат, диметил (1-гидрокси-3-фенил-E-пропенил) фосфонат, 3 , 5-диметиланилид-R, S-ибупрофен, динокап, диперодон, диперодон-1, диперодон-2, дифенилнитроксид, дизопирамид-1, дизопирамид-2, дитолуоилвинная кислота, дропропизин, доксазозин-2-этилацетат, EEDQ, -Гидроксифенокси) пропионат, эфедрин, этодолак, фенопрофен, фенотерол, феноксапроп-этил, фенвалерат, флаванон, флобуфен, флобуфен-1,4-фторфенилаланин, флуазифоп-бутил, флуридин (фторц) , Флурбипрофен, формотерол, глутамин, глутаминовая кислота, галоксифоп-этоксиэтил, лигнан Ханессиана, гесперитин, гесперити n-2, гексобарбитал, гистидин, гоматропин, гомоцистеин, тиолактон, гуперзин, гидратроповая кислота, гидробензоин, гидроксихлорохин, 1- (4-гидроксифенил) этанол, п-гидрокси-фенилглицин, 2- (4-пропионогидро) , Ибупрофенол, Идазоксан, Ифенпродил, Ифенпродил-2, Ифосфамид, Индапамид, Индапамид-1, Индопрофен, Ипсдиенол, Изоксуприн, Исрадипин, Исрадипин-1, Кетамин, Кетоконазол, Кетопрофен-1, Кетопрофен-1, Кетопрофен-1 Лансопразол, Лауданозин, Лептофос, Фосвел, Лейцин, Лейцин-1, Лоразепам, Лорглумид, Локсопрофен, Люциферин, Миндальная кислота, McN 5652, Мекопроп, Мефенилоин, Металаксил, Метадон, Метадон-2, Метадон-2, Метадон, А-метадон-1, Метоксифенилфенилкарбинол, 1- (4-Метоксифенил) -2-бутанол, 1- (о-Метоксифенил) этанол, 1- (4-Метоксифенил) -2-пропанол, Метилманделат, 1- (о-Метилфенил) этанол, 1 — (м-Метилфенил) этанол, 1- (п-Метилфенил) этанол, метил-3-фенил-3-азидо-2-гидроксипропаноат.

Дополнительные примеры хиральных соединений включают: 3-Метил-5-фенилгидантоин, Метолахлор, Метолазон, Метопролол, Миансерин, Модафинил, Мосаприд, Надифлоксацин, Надолол, 1,1′-би-2-нафтол, a-нафтолметилкарбинол, 1-нафтил-2-бутанол, 2-нафтил-2-бутанол, 1-нафтилуреафенэтиламин, напропамид, напроксендиизопропиламид, напроксен (нормальная фаза), напроксен (обращенная фаза), напроксен (на ULMO CSP), напроксен-метэрингенин амид, , Никардипин, N-CBZ-валин, Никотин, Нимодипин, Нирванол, Норлейцин, Норвалин, Октопамин, Офлоксацин, Омепразол, Омепразол (Прилосек), Омепразол (Прилосек) -1, Оксазепам, Оспренолин-пентол, Оксибуторинол, Оксибуторинол , Пазуфлоксацин, перметрин, фенирамин, фенилциклогексилкарбинол, 2-фенилциклопропанкарбоксилат, фенилэтилкарбинол, фенил-изопропилкарбинол, фенилметилкарбинол, 1 — [(4-фенил) фенил] этанол, фенилфенил-1-фенилфенил, фенил-1-фенил пропанол, фенилпропилкарбинол, фенилтрибромметилкарбинол, Фенилаланин, фенилмасляная кислота, фенилэтиленгликоль, фенилглицин, 1-фенилпентанол, фенилянтарная кислота, пиндолол, пиндолол-1, пирпрофен, ингибитор PPO, практолол, празиквантел, прилофалол, пропафалолин, пропафалолин, пропафалолин, пропафалайд этил, ранолазин, ребамипид, ресметрин, SC 41930, серин, сетоксидим, соталол, оксид стирола, оксид стирола, сульконазол, сульфинпиразон, сулиндак, сульпирид, супрофен, таксифолин, темазепам, терфенадалин, терфенадалин-2, терфенадалин-1, терфенадалин-1, терфенадалин-1, -бутил-2- (бензамидо) циклопентилкарбамат, разделение, трет-бутилфенилкарбинол, тетрабеназин, тетрагидробензопирен-7-ол, тетрагидропальматин, тетрагидропалматин-2, тетрагидропириминдин, тетрагидрозолин, 1,2-на-тетрагидрозолин 1,2,3,4-тетрагидро-1-нафтиламин, тетраметрин, тетрамизол, талидомид, 2-тиофенэтанол, 3-тиофенэтанол, тиапрофеновая кислота, малеат тимолола, тофизопам, толперизон, транс-2-фенил-1-транс-циклогексанол, 11,12 -Диамино-9,10-дигидро-9,10-этаноантрацен, трихлорметиазид, 4- (трифторметил) миндальная кислота, 1,1,2-трифенил-1,2-этандиол, 1,3,5-трифенилпент-4-ин -1-он, 1- (м-трифторметилфенил) этанол, a-тритил-2-нафталин пропионовая кислота, основание Трогера, троглитазон, тролокс, тролокс-1, тролокс-метиловый эфир, тропикамид, триптофан, тулобутерол HCl, тирозин, U- 100057, U-94863, транс-U-50488H, валин, ванилминдальная кислота, вапол, верапамил, верапамил, вилоксазин, варфарин (нормальная фаза), варфарин (обратная фаза), варфарин (в ULMO CSP), зопиклон.

Еще другие примеры хиральных соединений включают: D-аламинол, L-аламинол, L — (+) — изолейцинол, L — (+) — изолейцинол, L — (+) — лейцинол, D-метионинол, L-метионинол, D — (+) — фенилаланинол, L — (-) — фенилаланинол, D — (-) — альфа-фенилглицинол, L — (+) — альфа-фенилглицинол, D — (-) — пролинол, L — (+) — Пролинол, D-триптофанол, L-триптофанол, D-валинол, L-валинол, R — (-) — 2-амино-2-фенилэтанол, BOC-D-аламинол, BOC-L-аламинол, CBZ-D-аламинол, CBZ-L-аламинол, FMOC-D-аламинол, FMOC-L-аламинол, BOC-D — (+) — изолейцинол, BOC-L — (+) — изолейцинол, CBZ-D — (+) — изолейцинол, CBZ- L — (+) — изолейцинол, BOC-D — (+) — лейцинол, BOC-L — (+) — лейцинол, CBZ-D — (+) — лейцинол, CBZ-L — (+) — лейцинол, BOC- D-фенилаланинол, BOC-L-фенилаланинол, CBZ-D-фенилаланинол, CBZ-L-фенилаланинол, FMOC-D-фенилаланинол, FMOC-L-фенилаланинол, BOC-D-альфа-фенилглицин, BOC-L-альфа-альфа-фенилглицин, BOC-L-альфа-альфа-глицинол, BOC-L-альфа-альфа-фенилглицин. FMOC-D-альфа-фенилглицин, FMOC-L-альфа-фенилглицин, BOC-D-пролинол, BOC-L-пролинол, CBZ-D-пролинол, FMOC-D-пролинол, FMOC-L-пролинол, BOC-D- Валин ол, BOC-L-валинол, FMOC-L-валинол.

Дополнительные примеры хиральных соединений включают: S-2-метилпиперазин, R-2-метилпиперазин, S-1-Boc-2-метилпиперазин, R-1-Boc-2-метилпиперазин, S-пиперазин-2-карбоновая кислота. , R-пиперазин-2-карбоновая кислота, S-4-Boc-пиперазин-3-карбоновая кислота, R-4-Boc-пиперазин-3-карбоновая кислота, S-4-Boc-2-метилпиперазин, R-4- Boc-2-метилпиперазин, S-4-Boc-пиперазин-2-карбоксил-трет-бутиламид, R-4-Boc-пиперазин-2-карбоксил-трет-бутиламид, L-яблочная кислота, D-яблочная кислота, диэтил L — (+) — Тартрат, диэтил D — (-) — Тартрат, S-2-амино-1-пропанол, R-2-амино-1-пропанол, S-1-амино-2-пропанол, R-1- Амино-2-пропанол, S-1,2-декандиол, R-1,2-декандиол, S-2-амино-1-бутанол, R-2-амино-1-бутанол, S-октанол, R-октанол, S-2-фенилпропиламин, R-2-фенилпропиламин, S-2-гептанол, R-2-гептанол, S-3-гидрокси-гамма-бутиролактон, R-3-гидрокси-гамма-бутиролактон, S-2-метил- 1-бутанол, R-2-метил-1-бутанол, S-глицериновая кислота (гемикальциевая соль), R-глицериновая кислота (гемикальциевая соль), S-1-бензилглицерин, R-1-бензил глицерин, S-3-амино-1,2-пропанол, R-3-амино-1,2-пропанол, S-3-метил-2-бутанол, R-3-метил-2-бутанол, S-глицидол, R-глицидол, S-2-метил-1,4-бутандиол, R-2-метил-1,4-бутандиол, метиловый эфир S-3-гидроксиизомасляной кислоты, метиловый эфир R-3-гидроксиизомасляной кислоты, S-2- Метокси-2-фенилэтанол, R-2-Метокси-2-фенилэтанол.

Тартраты, тартримиды и аналогичные материалы, включая сложные эфиры, амиды и имиды, полученные из карбоновых кислот, таких как винная кислота, лимонная кислота и т.п., и сами кислоты также могут быть хиральными, и поэтому также могут быть подходящими маркерами для использование в настоящем изобретении. Маркеры по настоящему изобретению могут включать добавку, представленную ниже формулой I:

, в которой: Y и Y ‘независимо представляют собой -O-,> NH,> NR ³ , или имидную группу, образованную объединением Y и Группы Y ‘и образующие группу R ¹ -N <между двумя группами> C = O; X независимо представляет собой -Z — O — Z′-,> CH ₂ ,> CHR ⁴ ,> CR ⁴ R ⁵ ,> C (OH) (CO ₂ R ² ), > C (CO ₂ R ² ) ₂ ,> CHOR ⁶ или> CHCO ₂ R ² ; Z и Z ′ независимо равны> CH ₂ ,> CHR ⁴ ,> CR ⁴ R ⁵ ,> C (OH) (CO ₂ R ² ) или> CHOR ⁶ ; n равно от 0 до 10, или от 1 до 8, или от 1 до 6, или от 2 до 6, или от 2 до 4, при условии, что, когда n = 1, X не> CH ₂ , а когда n = 2, оба X не являются одновременно> CH ₂ ; m равно 0 или 1; R ¹ независимо представляет собой водород или гидрокарбильную группу, обычно содержащую от 1 до 150, от 4 до 30, или от 6 до 20, или от 10 до 20, или от 11 до 18, или от 8 до 10 атомов углерода, при условии, что когда R ¹ — водород, m равно 0, а n больше или равно 1; R ² представляет собой гидрокарбильную группу, обычно содержащую от 1 до 150, от 4 до 30, или от 6 до 20, или от 10 до 20, или от 11 до 18, или от 8 до 10 атомов углерода; R ³ , R ⁴ и R ⁵ независимо представляют собой гидрокарбильные группы, гидроксилсодержащие группы или карбоксилсодержащие группы; и R ⁶ представляет собой водород или гидрокарбильную группу, обычно содержащую от 1 до 150 или от 4 до 30 атомов углерода.В одном наборе вариантов осуществления гидрокарбильные группы, используемые для R ¹ и R ² , содержат по меньшей мере некоторую часть разветвленных гидрокарбильных групп.

В одном наборе вариантов реализации этот тип маркера представляет собой продукт конденсации (i), материала, представленного формулой II и (ii), смеси, содержащей разветвленный спирт или разветвленный амин, имеющий от 1 до примерно 150 атомов углерода, или их комбинации. из них;

, где каждый X независимо представляет собой -Z-O-Z-,> CH ₂ ,> CR ¹ R ² ,> C (OH) (CO ₂ R ² ) или> CHOR ² ; и где каждый Z независимо представляет собой> CH ₂ ,> CR ¹ R ² ,> C (OH) (CO ₂ R ² ) или> CHOR ² ; m равно 0 или 1; n равно от 1 до 10 при условии, что, когда n = 1, X не> CH ₂ , а когда n = 2, оба X не> CH ₂ ; и каждый R ¹ и R ² независимо представляет собой водород или гидрокарбильную группу.

В одном варианте осуществления в формуле II X составляет> CHOR ² и n равно 2. В другом варианте осуществления в формуле II (X) n представляет собой -CH ₂ -C (OH) (CO ₂ R ² ) —CH ₂ -. В другом варианте осуществления m в формуле II равно 1. В других вариантах осуществления компонент (i) представляет собой винную кислоту, лимонную кислоту, производные любой кислоты или их комбинации.

В одном наборе вариантов реализации компонент (ii) включает смесь одного или нескольких разветвленных спиртов или аминов.В одном варианте смесь содержит один или несколько разветвленных спиртов, содержащих от 6 до 16 атомов углерода. В другом варианте смесь содержит разветвленные амины, содержащие от 6 до 16 атомов углерода.

В другом наборе вариантов реализации, отдельно или в комбинации с любым из вариантов реализации, описанных выше, компонент (ii) состоит из смеси одного или нескольких разветвленных спиртов или аминов, где общая смесь имеет по меньшей мере 25 процентов по массе разветвленных. в том, что по меньшей мере 25 процентов по массе спиртов и / или аминов, составляющих смесь, имеют разветвленную структуру.

В некоторых вариантах осуществления, описанных выше, маркер может быть представлен следующими формулами или их аналогичными версиями:

, где хиральные центры молекул обозначены звездочкой (*). В этих молекулах может быть более одного хирального центра, и оба атома углерода, расположенные между группами -COOH в формуле III и формуле IV выше, могут считаться хиральными центрами. Кроме того, каждая из групп -ОН в формулах III и IV может независимо также быть группой -OR, где R представляет собой гидрокарбильную группу.

Маркеры, которые подпадают под эти категории, включают диэфиры винной кислоты. Сложные диэфиры могут быть производными винной кислоты и спирта и / или смеси спиртов (например, Alfol ™ 810). Конкретные примеры включают D-винную кислоту / диэфир Alfol ™ 810, L-винную кислоту / диэфир Alfol ™ 810, D-винную кислоту / диэфир тридецилового спирта Alfol ™ 1214, диэфир L-винной кислоты / тридецилового спирта Alfol ™ 1214 и их смеси. до тех пор, пока смесь не является рацемической, то есть содержит избыток по крайней мере одного энантиомера.

В некоторых вариантах реализации маркеры, используемые в способах по изобретению, выбраны из группы, состоящей из винной кислоты и ее производных, глюкозы и ее производных, 2-бромбутана, D-аланинола, D-ананинола, L-аланинола, L- (+) — изолейцинол, D-лейцинол, L — (+) — лейцинол, D-метионинол, L-метионинол, D — (+) — фенилаланинол, L — (-) — фенилаланинол, D — (-) — альфа- фенилглицин, L — (+) — альфа-фенилглицин, D — (-) — пролинол, L — (+) — пролинол, D-триптофанол, L-триптофанол, D-валинол, L-валинол, R — (-) — 2-амино-2-фенилэтанол, 2-пентанол, 2-фторбутан, 3-метилгексан, 2-бромметил-2-хлорметил-1-фторпропан, N-этил-N-метил-N-пропилбутан-1-аминий, м- дихлорциклогексан и о-дихлорциклогексан, амино (гидрокси) уксусная кислота, 1-аминоэтанол, 2- [пиридин-3-ил (пиридин-4-ил) метил] пиридин, 2-амино-2-гидрокси-3-оксоуксусная кислота и их комбинации.

В других вариантах реализации маркеры, используемые в способах по настоящему изобретению, выбраны из группы, состоящей из холестерилацетата, D-винной кислоты / диэфира Alfol 810, L-винной кислоты / сложного диэфира Alfol 810, L-ментиллактата, S- ( -) — периллальдегид, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен, L-винная кислота / сложный диэфир тридецилового спирта Alfol 1214 и их комбинации при условии, что используемая смесь не является рацемической в ​​отношении хотя бы один маркер.

В других вариантах реализации: где задействованная жидкость представляет собой моторное масло легкового автомобиля, маркером может быть холестерилацетат, L-ментиллактат, S — (-) — периллальдегид, 1R — (-) — ментилацетат, R- ( +) — лимонен и их комбинации, где жидкость представляет собой масло для дизельных двигателей для тяжелых условий эксплуатации, маркером может быть S — (-) — периллальдегид, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации. ; где жидкость представляет собой жидкость для автоматической коробки передач, маркером может быть холестерилацетат, S — (-) — периллальдегид, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации; где текучая среда представляет собой трансмиссионное масло, маркером может быть L-ментиллактат, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации; где текучая среда представляет собой гидравлическую жидкость, маркером может быть L-ментиллактат, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации; где текучая среда представляет собой дизельное топливо, маркером может быть холестерилацетат, L-ментиллактат, S — (-) — периллальдегид, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации; и если текучая среда представляет собой бензин, маркером может быть L-ментилактат, 1R — (-) — ментилацетат, R — (+) — лимонен и их комбинации.

В некоторых вариантах реализации маркеры по настоящему изобретению обеспечивают измеримое влияние на оптическое вращение, вызываемое текучей средой, в которой они используются. В некоторых вариантах осуществления это влияние превышает допустимую погрешность используемого метода тестирования. В других вариантах реализации маркер вызывает изменение оптического вращения, вызванного флюидом, по меньшей мере на 5%, по меньшей мере на 50% или по меньшей мере на 100%.

Если присутствует, количество маркера, присутствующего в жидкости, не ограничивается чрезмерно, пока имеется достаточно маркера, чтобы позволить точную идентификацию, и до тех пор, пока маркера не так много, чтобы он мешал работе и / или желаемым характеристикам жидкости.Маркеры могут присутствовать в жидкости в концентрациях от 10 до 10 000 частей на миллион или от 10 до 1000 частей на миллион. В другом варианте осуществления производители присутствуют в жидкости в количестве от 20 до 500 ч. / Млн; От 25 до 350 частей на миллион, от 30 до 130 частей на миллион; или до 100 частей на миллион. В других вариантах реализации маркеры присутствуют в жидкости в концентрациях от 0,05 до 10 мас.%, Или от 0,1 до 10 мас.%, Или от 0,5 до 10 мас.%. В еще других вариантах реализации маркеры присутствуют в количестве более 0,05 мас.% Или более 0,1 мас.%.

Само соединение-маркер может быть растворимым в воде, существенно растворимым в воде, практически нерастворимым в воде или нерастворимым в воде.В других вариантах осуществления маркерное соединение растворимо в органических жидкостях, таких как масло, по существу растворимо в органических жидкостях, по существу нерастворимо в органических жидкостях или нерастворимо в органических жидкостях. Маркерное соединение должно быть в значительной степени растворимым и / или растворимым в жидкости, с которой оно используется, или в значительной степени растворимым и / или растворимым по крайней мере в одном из компонентов, присутствующих в жидкости, с которой оно используется.

Оптические маркеры по настоящему изобретению могут использоваться в комбинации с другими маркерами, включая неоптически активные маркеры, такие как маркеры, которые реагируют с реагентами для обеспечения точной идентификации жидкости.Использование нескольких типов маркеров обеспечивает дополнительные уровни защиты и точности при проверке идентичности и / или источника тестируемой жидкости.

В другом варианте реализации маркерное соединение добавляют к функциональной жидкости, где маркер находится в форме концентрата, содержащего смесь маркерного соединения и полимерного соединения. Это полимерное соединение может быть одной или несколькими обычными добавками для функциональных жидкостей. В одном варианте реализации полимерные соединения, которые могут находиться в концентрате, включают диспергаторы, детергенты, противоизносные агенты, модификаторы трения, дезактиваторы металлов, ингибиторы коррозии, агенты набухания уплотнения, модификаторы вязкости, депрессанты температуры застывания, загустители и антиоксиданты, по отдельности или в комбинациях. друг с другом.

Дополнительные компоненты

Дополнительные компоненты могут быть добавлены к растворам маркеров или жидкостям. К ним относятся, например, поверхностно-активные вещества, маскирующие вещества и ароматизаторы для повышения привлекательности покупателя, а также противовспенивающие добавки для улучшения производства и использования продукции. Эти дополнительные компоненты могут использоваться в растворах маркеров по отдельности или в комбинации.

Необязательный компонент может использоваться в диапазоне от около 0% до около 20% масс., В одном варианте реализации от около 0,01% до около 5% масс, а в другом варианте реализации около 0%.От 1% до примерно 2% масс. Раствора реагента.

Способ

Настоящее изобретение включает способ определения идентичности текучей среды, включающий: (1) добавление необязательного маркерного компонента к текучей среде; (2) получение пробы жидкости до, во время или после использования жидкости; (3) пропускание пучка поляризованного света через образец; (4) анализировать результаты, измеряя вращение плоскости поляризованного света после его прохождения через образец; (5) определение и / или проверка идентичности текучей среды.В некоторых вариантах реализации наблюдаемое оптическое вращение вызвано самой жидкостью без добавления дополнительных оптических маркеров, описанных здесь. В других вариантах осуществления к жидкости добавляют один или несколько оптически активных маркеров, описанных выше, что вызывает по меньшей мере некоторое вращение, наблюдаемое в жидкости.

В одном варианте осуществления жидкость используется в приложении, и маркер выживает в условиях использования, так что он все еще позволяет идентифицировать жидкость после такого использования.Такие применения включают использование функциональной жидкости, такой как смазка, в устройстве, таком как двигатель, во время работы устройства. Включая воздействие на жидкость экстремальных температур, экстремальных давлений, движущихся частей и сдвига или их сочетаний.

Нет необходимости отбирать пробу во время реальной работы двигателя или другого устройства или оборудования, чтобы получить репрезентативную пробу жидкости. Проба жидкости может быть взята в любое время до, во время и / или после работы двигателя, оборудования или устройства.Образец жидкости может быть новым, использованным или их комбинациями. В одном варианте осуществления жидкостный тест особенно полезен во время и / или после работы в течение некоторого периода времени.

Диагностический комплект

Диагностический комплект включает средства для генерирования поляризованного луча света и направления этого светового луча через образец жидкости. Набор дополнительно включает в себя средство для измерения вращения луча и / или плоскости поляризованного света после того, как он проходит через образец жидкости, по сравнению с лучом до того, как он пройдет через образец.Измерение количества вращения, которое испытывает плоскость поляризованного светового луча, является средством идентификации тестируемой жидкости.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение исключает использование реактивных маркеров или реактивных реагентов, когда содержащий маркер образец текучей среды реагирует с реагентом для получения наблюдаемого отклика, используемого для идентификации текучей среды.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение исключает идентификацию путем наблюдения за соединением, удаленным из функциональной жидкости путем экстракции водой.Водная экстракция включает в себя, когда соединение, такое как краситель, в функциональной жидкости удаляется из функциональной жидкости и втягивается в водный раствор из-за смешиваемости соединения с водой. Единственным показателем является соблюдение содержания соединения в водном растворе без какой-либо реакции.

В одном варианте функциональная жидкость представляет собой моторное масло. Образец моторного масла или другой проверяемой функциональной жидкости может быть получен с помощью щупа, входящего в состав двигателя, трансмиссии или другого смазываемого оборудования.Пользователь наберет некоторое количество масла вместе с щупом или другим устройством, которое затем может быть перенесено в контейнер для образца, где контейнер для образца сделан из стекла или другого материала, который позволяет свету проходить через него. Количество жидкости, необходимое для тестирования, зависит от используемого поляриметра, и в некоторых вариантах реализации может быть всего одна капля, или несколько миллилитров, или даже несколько сотен миллилитров. После того, как образец помещен в контейнер для образца, луч поляризованного света может быть направлен через образец, и можно будет наблюдать измерение вращения светового луча.Пользователь может обращаться к руководству и / или визуальным индикаторам, чтобы помочь интерпретировать наблюдаемое вращение и сделать определение в качестве идентичности, состояния и / или источника флюида.

Маркировка / идентификация жидкости желательна, потому что подделка и фальсификация / разбавление подлинных жидкостей является серьезной проблемой для поставщиков жидкости, поскольку подделка и фальсификация приводят к потере прибыли, жалобам клиентов и вреду для торговой марки и репутации. Простая и легкая в использовании система маркеров полезна, так как разные жидкости могут быть неотличимы при случайном осмотре.Химические анализы или физические свойства могут отличить различные жидкости друг от друга, но эти анализы требуют дорогостоящего лабораторного испытательного оборудования и часто занимают слишком много времени, чтобы быть практическим тестом идентификации конечного пользователя. Раскрытые способы позволяют конечным пользователям исключить поддельный или фальсифицированный продукт на основе оптического вращения эффективным и удобным способом.

Визуальные обозначения

Анализ образца для испытаний может быть выполнен путем визуального осмотра вращения светового луча и может включать использование предоставленных визуальных указателей в качестве ориентира.

Визуальные знаки могут включать художественную визуализацию, воспроизведение фотографии одной или нескольких функциональных жидкостей в различных условиях с реагентом и без него. Визуальные обозначения обычно включают в себя одно представление, два представления или более двух представлений одной или нескольких функциональных жидкостей и / или диаграмму, показывающую ожидаемый световой луч, вращение для жидкости данного источника, данную идентичность и / или данную состояние. В одном варианте осуществления предпочтительные визуальные знаки представляют собой одно или несколько изображений, показывающих положительный результат идентификации, и одно или несколько изображений, показывающих отрицательный результат идентификации.Может быть предоставлен описательный текст, соответствующий каждому из этих примеров. Следует понимать, что может быть предусмотрено другое количество знаков.

СПЕЦИАЛЬНЫЙ ВАРИАНТ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

Следующие данные были собраны с помощью цифрового поляриметра JASCO Model DIP-360, который работал в соответствии с инструкциями производителя. Для всех испытаний использовали испытательные ячейки длиной 100 мм.

Пример 1

Четыре полностью сформулированных, коммерчески доступных моторных масла обрабатывают несколькими оптически активными маркерами и тестируют с помощью поляриметра.Результаты представлены в таблице ниже.

ТАБЛИЦА 1 Данные по моторному маслу Маркер ¹ ConcOil A ² Oil B ² Oil C ² Oil D ² Нет — только масло 0% вес. -0,619 * 0,114 * холестерилацетат 10% масс. -3,6501% масс. wt0.374 * Нерастворимый -0.094 * Нерастворимый0,5% мас. 0,201 * Нерастворимый0,374 * 0,143 * 0,1% мас. 0,118 * 0,035 * 0,05% мас. -0,052 * 0,081 * L-ментиллактат10% мас. -4,6001% мас. -3,193 * -0,436 * Нерастворимый0. 5% масс-2,781 * 0,464 * Нерастворим 0,1% масс-0,445 * -0,719 * 0,05% масс-0,166 * -0,271 * S — (-) — периллальдегид 10% масс-11,6901% масс-10,622 * -11,887 * 0,5% масс -5,728 * Нерастворимые 0,1% масс-1,221 * 0,05% масс-0,061 * 1R — (-) — ментилацетат 10% масс-6,5801% масс-7,144 * -5,515 * -0,065 * -6,574 * 0,5% масс-2,781 * — 3,978 * 0,111 * -3,994 * 0,1 мас.% 0,05 мас.% R — (+) — лимонен 10% мас. 11,1301% мас. -0,860 * 12,695 * 0,5% мас.362 * 6,4160,1% масс. 1,903 * 0,05% масс. 0,250 * 0,595 * холестерин10% масс. Нерастворим .1% масс. Нерастворим. вес Нерастворимый Нерастворимый Нерастворимый Нерастворимый 0,1% Вес Нерастворимый Нерастворимый 0,05% Нерастворимый Нерастворимый ¹ Все зарегистрированные значения испытаний, отмеченные *, являются средними от 2 до 5 результатов. Все остальные сообщенные значения являются результатами отдельных испытаний.Пробелы указывают на то, что образец не был приготовлен с таким уровнем концентрации. ² Oil A — неиспользованное моторное масло Valvoline ™. Масло B — неиспользованное моторное масло Mobil 1 ™. Масло C — это моторное масло Valvoline ™, которое было слито из двигателя автомобиля после 3700 миль пробега. Oil D — моторное масло Rotella ™ для тяжелых условий эксплуатации. ³ Маркер представляет собой смесь энантиомеров D и L с небольшим избытком одного энантиомера.

Пример 2

Четыре полностью сформулированные коммерчески доступные функциональные жидкости обрабатывают несколькими оптически активными маркерами и тестируют с помощью поляриметра.Результаты представлены в таблице ниже.

ТАБЛИЦА 2 Функциональные характеристики жидкости Маркер ¹ ConcFluid A ² Fluid B ² Fluid C ² Fluid D ² Нет — жидкость 0,262 * -0,041 * 1,005 * холестерилацетат 10 мас.% -3,561% мас. 0,5% мас. DL-винная кислота / 10% мас. −1,0 до 1,0 Диэфир альфола 810 ³ 1 мас.% −0,085 * -0,058 * 0,328 * 0,5% мас. 0,412 * -0,257 * 0,086 * 0,981 * L-ментиллактат 10% масс 1.От 0 до 2,11 мас.% 0,262 * −3,282 * −2,876 * 0,5 мас.% −0,695 * −1,826 * −3,146 * S — (-) — периллальдегид 10 мас.% −11,241% мас. 0,5% мас. 1 R — (-) — ментилацетат 10 мас.% −6,561 мас.% −0,107 * −5,000 * −6,295 * 0,5% мас. −0,412 * 1,273 * −3,328 * −2,515 * R — (+) — лимонен 10% мас. 10,221% мас. −0,422 * 9,067 * 11,581 * 0,5 % мас. 0,588 * -0,010 * 5,512 * 6,201 * Холестерин 10% мас. Нерастворимые 1% мас. 0,5% мас. НерастворимыеL-винная кислота / Альфол 121410% мас. являются средними от 2 до 5 результатов.Все остальные сообщенные значения являются результатами отдельных испытаний. Пробелы указывают на то, что образец не был приготовлен с таким уровнем концентрации. ² Fluid A — неиспользованная жидкость для автоматических коробок передач. Жидкость B — это отработанная жидкость для автоматической коробки передач после 155 000 миль пробега. Жидкость C — трансмиссионное масло. Жидкость D — это гидравлическая жидкость. ³ Маркер представляет собой смесь энантиомеров D и L с небольшим избытком одного энантиомера.

Пример 3

Два имеющихся в продаже топлива обрабатывают несколькими оптически активными маркерами и тестируют с помощью поляриметра.Результаты представлены в таблице ниже. 1,545 * 0,1% мас. -0,312 * 0,05% мас. -0,106 * DL-винная кислота 1% мас. Кислоты / диэфир Alfol 810 ³ 0,5% мас. 0,343 * 0,1% мас. 0,05% мас. L-ментиллактат 1% мас. -6,718 * -6,589 * 0,5% масс -3,602 * 0,1% масс-0,643 * 0,05% масс-0,296 * S — (-) — периллальдегид 1% масс-11,651 * 0.5% мас. -5,629 * 0,1% мас. -0,991 * 0,05% мас. (+) — лимонен 1% мас. 10,593 * 0,5% мас. 6,183 * 5,447 * 0,1% мас. 0,992 * 0,05% мас. 0,565 * холестерин 1% мас. Нерастворим 0,5% мас. Нерастворим 0,1% мас. 12141% масс. Нерастворимый диэфир тридецилового спирта0,5% масс. Нерастворим 0,1% масс. Нерастворим. 0,05% масс. Нерастворим. ¹ . Все остальные сообщенные значения являются результатами отдельных испытаний.Пробелы указывают на то, что образец не был приготовлен с таким уровнем концентрации. ² Топливо A — коммерчески доступное дизельное топливо. Топливо B — это коммерчески доступный бензин. ³ Маркер представляет собой смесь энантиомеров D и L с небольшим избытком одного энантиомера.

Результаты показывают, что некоторые жидкости обеспечивают измеримую величину оптического вращения, которая может использоваться в способах по настоящему изобретению как средство идентификации и / или проверки идентичности жидкости.Результаты также показывают, что оптически активные маркеры, определенные выше, могут использоваться в таких текучих средах для регулирования, воздействия и / или изменения величины оптического вращения, вызываемого текучей средой, что может облегчить идентификацию текучей среды. Маркеры также могут использоваться для достижения количества вращения, которое в противном случае не присутствовало бы в такой текучей среде, обеспечивая, таким образом, удобные средства идентификации и / или проверки идентичности текучей среды.

Хотя изобретение было объяснено, следует понимать, что различные его модификации станут очевидны специалистам в данной области техники после прочтения описания.Следовательно, следует понимать, что раскрытое здесь изобретение предназначено для охвата таких модификаций, которые подпадают под объем прилагаемой формулы изобретения.

Каждый из документов, упомянутых выше, включен в настоящий документ посредством ссылки. За исключением примеров или если явно указано иное, все числовые величины в этом описании, определяющие количества материалов, условия реакции, молекулярные массы, количество атомов углерода и т.п., следует понимать как измененные словом «примерно».Если не указано иное, каждый химикат или состав, упомянутые в данном документе, следует интерпретировать как материал коммерческого сорта, который может содержать изомеры, побочные продукты, производные и другие подобные материалы, которые обычно считаются присутствующими в коммерческом классе. Однако количество каждого химического компонента представлено без учета любого растворителя или масла-разбавителя, которые обычно могут присутствовать в коммерческом материале, если не указано иное. Если не указано иное, все процентные значения являются массовыми процентами.Следует понимать, что верхние и нижние количества, диапазоны и пределы соотношений, изложенные здесь, могут быть независимо объединены. Точно так же диапазоны и количества для каждого элемента изобретения могут использоваться вместе с диапазонами или количествами для любого из других элементов. Используемое здесь выражение «состоящий по существу из» позволяет включать вещества, которые существенно не влияют на основные и новые характеристики рассматриваемой композиции.

aplicare, Instruciuni, indicații, toate bolile

Acțiune farmacologică

Вещество активного аламинола — глиоксал i clorura de benzalconiu care prezintă activitatea de bacterii, грибки Candida, патогенные микобактерии, туберкулоаза инфекции респираторной острой, вирусный гепатит, парентеральный, ВИЧ, вирус простого герпеса, ротавирус, энтеровирус.

Форма эмиссии

Alaminolul este produs sub formă de концентрат cu un miros slab de albastru strălucitor.

Indicatii pentru utilizarea Alaminol

аламинол instrucţiunilor utilizate Pentru: Продусе де dezinfecţie utilizate în scopuri Medicale, Pentru curăţarea predsteriliziatsionnoy endoscoapelor şi Instrumente де însoţire Pentru dezinfectarea spaţiilor, suprafeţe, Мобилье, Echipamente, unelte, pansamente, tampoane, lenjerie де АМФ-де-Unica folosinţă înainte де eliminare, Articole de îngrijire a pacientului.

Soluția Alaminol este de asemenea utilizată cu success pentru curățarea в unitățile publice de food, serviciile medicale și comunale în timpul epidemiilor sezoniere.

Cu utilizare obișnuită, Alaminol previne воспроизводится ciupercilor mucegai в spații rezidențiale, nerezidențiale.

Противопоказания

Nu există nicio contraindicație pentru utilizarea Alaminol.

Instrucțiuni pentru utilizarea Alaminol

Соответствует инструкции Alaminol și liniilor directoare dezvoltate, există диферит regimuri de dezinfectare.

Aplicat pentru tratamentul антисептик al r-1, 1,5, 3, 5, 8, 10%. Pentru diluarea soluției 1% — 10 мл концентрат este 1000 мл de apă; Soluție 1,5% — 15 мл в упаковке 1000 мл; 3% раствор — концентрат 30 мл на 1000 мл в аптеке и т. Д.

О раствор 1%, это утилизация, дезинфицирующая и предотвращающая инфекцию бактерий (cu excepția tuberculozei) — ele șterfete Ingipamentera. pacientului de cauciuc, sticlă, пластик, металл înmuiere lenjerie secretțiilor necontaminate i загрязняют echipamentelor folosite pentru curățarea spațiilor.

раствор аламинола для 3 i 5% загара, использующий pentru aceleași scopuri ca și soluție 1%, Precum și pentru tratarea suprafețelor, articole de îngrijire, haine, изобретатель echipamente.

Aplicație Alaminol 5, 8, 10% este Recomandat pentru dezinfectarea materialelor medicale pentru boli bacteriene, virale, грибок, включая туберкулез, кандидоз, și — prin scufundare în soluție. Pentru prelucrarea sticlei, пластика, металлическая оболочка, скулер, стоматология.Разбавьте аламинол 8 i 10%, чтобы получить необходимый продукт.

Pentru preterilizing curățare (înmuiere, spălare și clătire), dezinfectarea dispozitivelor medicale (cu excepția endoscoape și Instrumentele atașate acestuia) загар использует раствор 5 8%.

О растворе 1,5% используется для предварительной стерилизации (înmuiere, spălare și clătire) жесткого эндоскопа i flexibile.

Pentru curățarea pre-sterilizării, dezinfectarea instrumentmentelor chirurgicale dentare, в ультразвуковой диагностике, используется раствор 8%.

Diluați Alaminol în mănuși de cauciuc, evitând contactul cu ochii. Capacitățile în care, cu ajutorul unei soluții, dezinfecția se implementationază prin imersiune, se menține închisă. Depozitați dezinfectantul концентрат și diluat separat de alte medicamente.

Соответствует инструкциям по применению аламинола, растворимого разбавителя, который применяется в моделях, повторяющих данные по истечении срока годности, при изменении характеристик (мутность, обесцвечивание и т. Д.). Concentrați-vă în recipientul nedeschis este stocat 12 luni și soluțiile diluate — nu mai mult de 10 zile.

Efecte secundare

Soluția Alaminol în contact cu pielea provoacă roșeața, iritarea. În acest caz, produsul trebuie imediat spălat pe piele, tratat cu orice cremă de înmuiere.

Dacă Alaminol внутри в салоне, требуется приблизительно 500 мл из 10 штук 20 таблеток с активированным углем.

Dacă Alaminol intră în ochi, trebuie spălate și picurate cu sulfat de sodiu 30% — 1-2 пикэтури.

Mai multe materiale:

Аналогичная статья

Trimiteți-le prietenilor:

Руководство по разбавлению эфирных масел

Использование эфирных масел в неразбавленном виде на коже может быть вредным и потенциально вызывать сильное раздражение или сенсибилизацию.

Я регулярно обнаруживаю авторов и преподавателей ароматерапии, которые придерживаются практического правила, согласно которому некоторые эфирные масла безопасно наносить на кожу, в частности, масла лаванды и чайного дерева, без предварительного разбавления их маслом-носителем . Нанесение эфирных масел на кожу без их разбавления называется «чистым» нанесением.

Никогда не наносите неразбавленные эфирные масла на кожу.
Ни лаванды, ни чайного дерева.

Всегда разбавляйте эфирные масла в достаточной мере перед нанесением их на кожу, кожу головы или волосы.

Бывают случаи, когда опытные специалисты по ароматерапии делают исключения из этой меры предосторожности. Только после получения значительных знаний об эфирных маслах вы можете когда-либо пытаться нанести неразбавленное эфирное масло на кожу.

Я был частью сообщества ароматерапевтов более 20 лет. Иногда я слышу о тех, кто использовал неразбавленные эфирные масла и развил стойкую сенсибилизацию, даже при использовании только одной капли эфирного масла лаванды за один прием.Это действительно не стоит риска. Адекватное разбавление эфирных масел не только помогает защитить ваше самочувствие, но и позволяет сэкономить деньги.

Мардж Кларк делится своим опытом сенсибилизации в своей книге Essential Oils and Aromatics . Мардж делится своим опытом и долгосрочными последствиями использования неразбавленного эфирного масла лаванды:

«Один из моих наставников напоминает мне, что сенсибилизация — это навсегда.«И я знаю, что она права. Много лет назад я прочитал книги, в которых говорилось, что масло лаванды можно использовать в чистом виде (неразбавленным). Я очень неразумно применил неразбавленную лаванду на сломанной коже, и, как следствие, вызвал реакцию чувствительности. Сегодня, почти два десятилетия спустя, если я столкнусь с лавандой в любой форме, я немедленно начну новый виток контактного дерматита, на выздоровление которого могут потребоваться месяцы ». [Мардж Кларк, Essential Oils and Aromatics (Sandy, UT: Silverleaf Press, 2008), 32.]

Что такое сенсибилизация?

Симптомы сенсибилизации могут варьироваться от человека к человеку, но воспринимайте это как кожную аллергию, которая приводит к сильной и / или зудящей сыпи. Более серьезные случаи сенсибилизации могут потенциально привести к респираторным заболеваниям или даже к анафилактическому шоку. Как только у вас разовьется сенсибилизация к эфирному маслу, вы, вероятно, останетесь постоянно чувствительными к этому эфирному маслу, даже если вы начнете его адекватно разбавлять.У вас также может развиться реакция на другие эфирные масла, а также на продукты, содержащие эти масла.

Относитесь к эфирным маслам с уважением

Обращайтесь с эфирными маслами так же осторожно, как с лекарствами. Вам не нужно бояться эфирных масел или избегать их, и я, конечно же, не пытаюсь никого напугать, чтобы он не воспользовался всеми преимуществами ароматерапии. Они могут стать прекрасным благословением для целостного образа жизни.Однако помните, что при работе с эфирными маслами меньше — больше.

Достаточно разбавьте эфирные масла перед нанесением на кожу и будьте предельно осторожны с маслами, которые с большей вероятностью могут вызвать раздражение и сенсибилизацию. Помните, что даже если вы использовали одно или несколько эфирных масел в неразбавленном виде и у вас не было проблем, это не гарантирует, что у вас не разовьется сенсибилизация при многократном воздействии. Всегда рекомендуется правильное разбавление.

Эфирные масла с большей вероятностью вызывают раздражение кожи

Прочтите статью AromaWeb «Эфирные масла, которые могут вызывать раздражение кожи и сенсибилизацию кожи», чтобы узнать, какие масла следует использовать с гораздо большей осторожностью при местном применении.

Как разбавить эфирные масла для местного применения

Использование 2% -ного разбавления эфирного масла обычно считается безопасным руководством для местного применения эфирных масел у взрослых, когда эфирное масло имеет кожный максимум на 2% выше, как предусмотрено во втором издании Essential Oil Safety Робертом Тиссераном и Родни Янг.Если кожный максимум эфирного масла ниже 2%, важно не превышать кожный максимум. Для детей и пожилых людей используйте только 1% раствор. С детьми используйте только эфирные масла, которые считаются безопасными для детей.

Для профилей эфирных масел, доступных на AromaWeb, там, где это возможно, цитируются рекомендации Тиссерана и Янга по максимальному количеству дермальных масел. Essential Oil Safety содержит много дополнительной информации о профиле, которую рекомендуется прочитать, поэтому очень полезно обратиться непосредственно к книге для получения полной информации о кожном применении и безопасности.

Многие люди привыкли к сильно ароматным коммерческим ароматам, лосьонам, косметике, мылу и освежителям помещений, ароматизируемым преимущественно синтетикой. Поначалу аромат 2% -ного разбавления может показаться слабым или едва ароматным. Если вы привыкли к продуктам с сильным запахом, будьте уверены, что со временем вы начнете корректировать и наслаждаться нюансами разбавленных смесей. Для получения дополнительной информации прочтите «Смеси безопасных разбавленных эфирных масел» могут поначалу пахнуть слабо.

Самый простой способ приготовления 2% разбавления

При работе с небольшими количествами эфирных масел для личного использования проще всего измерить их по капле.К сожалению, одна капля одного эфирного масла может быть больше или меньше другой из-за вязкости и температуры масла, а также размера капельницы или редуктора отверстия. Таким образом, измерение по капле — не самый точный метод измерения эфирных масел или масел-носителей, но, как правило, он подходит для создания небольших смесей для местного применения и рецептов для личного использования. Самый точный способ измерения — по весу, а не по капле или по объему. Для более точного смешивания и точности рекомендуется измерение по весу.Поскольку большинство из тех, кто ссылается на эту статью, не знакомы с работой с эфирными маслами и не знакомы с измерением крошечных количеств эфирных масел по весу, в этой статье основное внимание уделяется измерению по капле.

Хорошее эмпирическое правило при попытке сделать 2% разбавление капельным методом — добавить 12 капель эфирного масла в каждую флакон. унция (30 мл) масла-носителя холодного отжима, лосьона, растительного масла или другого натурального липидного / увлажняющего крема.

В среднем, на основании моих испытаний с различными редукторами отверстий, пипетками, капельницами и маслами разной толщины, 600 капель эфирного масла равны 30 мл или 1 фл.унция — в среднем. Тем не менее, некоторые эксперты по ароматерапии и преподаватели, которых я очень уважаю, указывают, что количество капель на унцию, исходя из их собственного опыта и тестирования, отличается. Я не решаюсь уступить, поскольку я предпочитаю быть более консервативным, когда представляю эту информацию такому количеству новичков в ароматерапии, поэтому я продолжаю придерживаться своих 600 капель на унцию.

2% от 600 капель равняется 12 каплям (600x.02). Однако, как я постоянно подчеркиваю, это может сильно варьироваться в зависимости от размера и типа используемой пипетки, капельницы или редуктора отверстия, а также вязкости (толщины) конкретного эфирного масла.

Чтобы легко приблизиться к 2% -ному разбавлению, добавьте 12 капель выбранного эфирного масла в 1 жид. унция (30 мл) масла-носителя. Технически этот метод измерения не совсем точен — 2% эфирного масла следует добавлять только к 98/100 унции носителя, но добавление его к полной унции значительно упрощает измерение для большинства людей.

Вопрос: Как мне работать с эфирным маслом, если рекомендация по кожному максимуму составляет менее 2%?

Не используйте эфирное масло выше рекомендованного кожного максимума.Тот же тип расчета, описанный выше, может быть использован в качестве основы для работы с маслами, которые имеют разные максимумы кожного использования. Например, если Essential Oil Safety рекомендует кожный максимум 0,7% для определенного эфирного масла, такого как масло лемонграсса, умножьте 600 капель (среднее количество капель в унции) на 0,007 (это десятичная версия 0,7%), в результате чего в максимальной рекомендации 4,2 капли на унцию, которую следует округлить до 4 капель на унцию.