Наращивание однофазным гелем пошагово: как пользоваться? Техника применения однофазного геля — Рамблер/новости

Наращивание однофазным гелем пошагово: как пользоваться? Техника применения однофазного геля — Рамблер/новости

05.04.1985

Содержание

Однофазный Гель Для Наращивания Как Наносить Пошагово – Telegraph



⚡ 👉🏻👉🏻👉🏻 ИНФОРМАЦИЯ ДОСТУПНА ЗДЕСЬ ЖМИТЕ 👈🏻👈🏻👈🏻

Сейчас многие мастера предлагают выполнить наращивание однофазниками. Если вам интересно разобраться в этой технологии, понять все ее плюсы, тогда смотрите наш мастер-класс с пошаговыми фото!
Итак, любой однофазный продукт для маникюра предполагает, что с его помощью мы делаем основу (базу), выстраиваем архитектуру и выполняем закрепление.
Но, для начала, конечно, стандартно подготавливаем руки. Делаем маникюр (обрезной или аппаратный — на ваше усмотрение).
Затем следует поднять чешуйки ногтевой пластины. Для этого осторожно и бережно делаем опил, используя пилку для натуральных ногтей (240/320 гр).
Некоторые мастера используют для этого шага баф, однако это в корне не верно, т.к. ногтевые чешуйки не приподнимаются, а наоборот приглаживаются.
Далее необходимо обезжирить ногтевую пластину.
Большинство однофазников не требуют предварительного нанесения праймера, поэтому опускаем этот шаг.
Удобно пользоваться формами, если выполняется наращивание однофазным гелем.
Базу не используем — делаем первый тонкий слой прозрачным однофазником.
Далее наносим второй слой, уже выстраивая на формах длину ногтей.
Следующий слой, уже с выстраиванием апекса, мы выполнили камуфлирующим однофазником, но можно было продолжать работать тем же продуктом (прозрачным гелем).
Далее следует стандартный опил (используем пилку для искусственных ногтей).
Вот так выглядят ноготки после наращивания. Они готовы к дизайну и покрытию!
Такие ногти носятся очень хорошо (если не нарушалась в процессе работы технология и сам однофазник хорошего качества).
Работать с однофазными гель-лаками для наращивания очень легко и просто. Они помогают сэкономить достаточно много времени.
Друзья, ставьте лайки и подписывайтесь на канал! Мы очень стараемся готовить для вас полезные и интересные материалы.

Материалы и оборудование для наращивания ногтей, ресниц, волос для себя и для салонов. Акрил, гель, лаки, фимо, фотодизайн, декор для ногтей.

Магазин / Новости /
Дизайн ногтей / Технология наращивания гелевых ногтей на формы (однофазная) пошагово

Применение однофазного геля в процессе обучения начинающих мастеров ногтевой эстетики уже давно оправдало себя и по легкости восприятия технологии, и по сравнительной экономии. На первых порах редко к…

Однофазный гель для наращивания ногтей: что это такое и как использовать?
Однофазный гель для наращивания ногтей: как пользоваться?
Как пользоваться однофазным гелем ? Быстрое наращивание | Яндекс Дзен
Технология наращивания гелевых ногтей на формы ( однофазная ) пошагово
Наращивание ногтей гелем – пошаговая инструкция на Имкосметик
Однофазный гель для наращивания ногтей: что это такое, как пользоваться
Гели однофазные , двухфазные и трехфазные: что такое и как пользоваться…
Однофазный гель для наращивания ногтей. Как пользоваться, какой лучше…
Как пользоваться однофазным гелем для наращивания ногтей?
Как самостоятельно нарастить ногти гелем в домашних условиях — пошаговая…
Однофазный гель как использовать. — YouTube
Однофазный гель — что это такое, как использовать для наращивания ногтей…
Как наносить однофазный гель -лак, пошаговая техника нанесения
Наращивание ногтей гелем . Пошаговая инструкция с фото для начинающих.
Наращивание ногтей однофазным гелем : особенности и преимущества технологии
Где Лучше Купить Гель Лак
Luxury Long Hair Estel
Sister Гель Лак Купить
Однофазный Гель Для Наращивания Как Наносить Пошагово

Палитры Адрикоко: гелевые и полигелевые материалы от Adricoco

Опубликовано: 10 декабря 2020 г. в 08:00
Обновлено: 22 декабря 2020 г. в 16:39

Материалы для моделирования, укрепления, наращивания и ремонта ногтей бренда Adricoco относятся к категории бюджетных покрытий, выпускаются в небольших и удобных для творчества на выезде объемах, имеют все критично-важные свойства для работы при большом потоке клиентов с разным типом ногтевой пластины. Для каждой конкретной задачи, вставшей перед nail-мастером, в арсенале Адрикоко уже есть нужный цвет, текстура и параметры, позволяющие быстро и грамотно создать даже сложный дизайн, не отказывая клиентке в желании носить красивый и изощренный нейл-наряд. Давайте полюбуемся на палитры укрепляющих и моделирующих гелей, гелей-желе и биогелей и познакомимся с их ключевыми особенностями!


Гель для наращивания моделирующий Classic Gel


Экономичный материал средней консистенции предназначен для стандартной процедуры наращивания ногтей на формах и типсах. Выпускается в удобной непрозрачной таре-баночке, объемом 10 мл, что позволяет легко контролировать темпы расхода продукта. Гель является однофазным, самовыравнивающимся, поэтому с ним комфортно и легко работать мастеру с любым уровнем подготовки. Повышенная прочность материала после сушки в лампе обеспечивает продолжительную носкость маникюра, надежно защищает ногти от любых повреждений и ударов. Моделирование или дизайн, выполненные данным гелем, выглядят эстетично и натурально, с красивым глянцевым блеском и визуально максимально приближены к натуральным ногтям за счет особой структуры покрытия. Гель полимеризуется в LED-лампе 1 минуту, либо 2 минуты в UV-аппарате.


Приобрести заинтересовавшие Вас оттенки можно на нашем сайте по ссылке.

Гель-желе для моделирования Jelly Gel


Гель-желе Адрикоко — это однофазный, мягкий, тягучий материал, обладающий податливой консистенцией, высокой вязкостью, нужной плотностью цветов (от полупрозрачного до плотного). Jelly gel применяется в процедурах моделирования и наращивания, коррекции и камуфлирования эстетических недостатков натуральных ногтей. Данные покрытия относятся к типу камуфлирующих, скульптурных моделирующих гелей. Благодаря обширной палитре оттенков гелей мастер без труда сможет точно подобрать нужный для клиентки цвет, который будет сливаться с подтоном натуральных ногтей и замаскирует дефекты ногтевой пластины.

Гель наносится при помощи любой кисти для гелевых текстур, которой привычно работать мастеру. Его податливая консистенция способствует равномерной выкладке материала, позволяя сформировать идеальную архитектуру ногтя. Продукт не течет при любой температуре, тонко и равномерно распределяется по поверхности, не затекает за зоны боковых валиков и кутикулы, без бугров и наплывов распределяется по всем углам. Он перекрывает границу родного ногтевого ложа, чем максимально облегчает работу nail-мастера в процессе формирования ногтей любой длины и формы без потери качества, с минимальными затратами времени и расходных материалов. Наносится на ноготь в 2 слоя, полимеризуется в LED–лампе в течение 1 минуты, в UV-аппарате — 2 минуты. Выбрать интересующие оттенки можно тут.


Биогель укрепляющий Bio Gel


Укрепляющие биогели Адрикоко представляют собой материалы средней консистенции с остаточной липкостью, состав которых включает натуральные природные компоненты, а также иные ингредиенты, безопасные для использования в маникюре. Биогель разработан для укрепления, восстановления, наращивания и донаращивания ногтей. Он наносится втирающими движениями тонким слоем на подготовленную ногтевую пластину с помощью кисти, перекрывать закрепителем. Характеристики покрытия позволяют скрывать эстетические недостатки натуральных ногтей, которые во время носки будет оздоравливать биогелем. Материал следует полимеризовать в LED-аппарате 1 минуту, в UV-лампе — 2 минуты. Пополнить Вашу коллекцию оздоравливающих ногти биогелей можно в данном разделе нашего сайта.


Моделирующий гель Sculptural Gel


Sculptural Gel — это жесткий гель вязкой консистенции, способный самовыравниваться при нанесении, имеющий хорошие адгезивные свойства, удобный в работе. Он не имеет резкого запаха, отлично удерживает массу во время выкладки, быстро полимеризуется в лампе (2 минуты в UV-аппарате или 1 минуту в LED-лампе). Материал применяется для наращивания и укрепления натуральных ногтей, а также для моделирования искусственной ногтевой пластины на типсах или формах. Цветовая гамма Sculptural Gel включает широкую палитру тонов: от пигментированных цветов, подходящих для соло-дизайнов, до полупрозрачных пастелей для воздушной и нежной френч-гаммы. Гель прочен в носке, служит идеальной основой для любого дизайна гель-лаками, а также может стать эстетичным самодостаточным покрытием.


Приобрести палитру Sculptural Gel можно на нашем сайте по ссылке.

Гель-краски для дизайна ногтей Paint gel


Гель-краски для дизайна ногтей Adrococo — это материалы с остаточной липкостью, удобной в работе текстурой применяемые для художественного декорирования и росписи натуральных и нарощенных ногтей. Уникальная текстура особенно подходит для создания тонких линий. Продукт в носке не трескается и не скалывается, для большей стойкости требует фиксации топом. Полимеризуется в UV-лампе 2 минуты, в LED-лампе 1 минуту.

Приобрести понравившиеся цвета можно по ссылочке.


Гель для дизайна «Glow Bomb»


Гели «Glow Bomb» — это густые покрытия с остаточной липкостью и обилием блестящих и переливающихся разноразмерных голографических частиц бирюзового цвета, применяемые для художественного nail-арта. Они легко и равномерно распределяются по поверхности ногтевой пластины, не текут при выкладке, требуют перекрытия закрепителем. Полимеризуются в UV-лампе 2 минуты/в LED-лампе – 1 минуту. Готовый образ впечатляет яркими цветными переливами, эффектным мерцанием и отличной стойкостью.



Выбрать и купить заинтересовавшие оттенки можно на нашем сайте по ссылке.

Гель для дизайна «Brilliant party»


Декоративные гели «Brilliant party» от Adricoco — это жидкая фольга для создания идеального сверкающего покрытия, которое не требует наслоения и наносится в одно движение. Она представляет собой насыщенную смесь микроблесток разной формы и величины в прозрачной базе, придающую ногтям равномерное блестящие покрытие, подобное настоящей фольге. Палитра из семи трендовых оттенков позволит nail-мастеру создать яркие образы с металлическим блеском и превосходным сиянием. Материал удобен в работе, имеет высокую пигментированность, не затекает, ложится без полос и разводов.


Приобрести заинтересовавшие вас оттенки жидкой фольги бренда Adricoco можно на нашем сайте по ссылке.

полезные советы | Самые красивые дома

Сегодня сомнений не вызывает тот факт, что терапия комбинированного типа является самым эффективным способом лечения грибка ногтей, именно поэтому главным фактором является. Сделано в Глорион – Харьков Если Вы хотите вылечить грибок ногтей, обращайтесь в центр лазерной косметологии Лазерхауз. Мы воплотим Ваши мечты в реальность!

Микозы, лечение микоза, дерматолог, грибковые заболевания, клиника.
Если прервать лечение, то грибок может сохраниться в ногте, и заболевание начнется заново. Кстати, именно поэтому долгое время существовал только один способ борьбы с онихомикозом(грибковым. Харьков, ул.

Грибок на ногтях и его лечение Грибок на ногтях и его лечение. Как бороться с грибковой инфекцией ногтей На ваши вопросы отвечает доктор медицинских наук, профессор, академик РАЕН, заслуженный врач Российской Федерации, директор.
ЕВРОПЕЙСКАЯ ДЕРМАТОЛОГИЯ, медицинский центр, болезни кожи, простатит.

. Харьков, грибок ногтей лечение Харьков, медицинский центр Харьков, ультразвук Харьков, дерматологическая клиника в Харькове, профилактика кожных заболеваний в Харькове, медицинский центр дерматологии.

Грибок ногтей поражает очень сильно ноготь, и подногтевое пространство, может и на начальной стадии можно как-то бороться с грибком ногтей мазями, но я очень сомневаюсь. А то лечение, что ты предлагаешь.
Лечение грибка ногтей , Клиники, цены и стоимость лечения грибка ногтей.
Несмотря на широкий ассортимент противогрибковых средств, имеющихся в каждой аптеке, не стоит браться за лечение грибка ногтей самостоятельно, поскольку выбор лекарственного препарата должен.

Грибок ногтей: диагностика и лечение , Новости медицины и здоровья на.

Отметим, что лечение грибка ногтей таким народным средством, как чайный гриб, может вызывать довольно сильную боль, но зато позволяет достигать быстрого и стойкого выздоровления. Гецко: в Харькове многое.
Лечение грибка ногтя , 2 ответов, 0 комментариев. Консультация-форум.
ЛЕЧЕНИЕ ГРИБКА НОГТЯ. Задать новый вопрос в консультации «Дерматология и венерология/Дерматолог». Украина Харьков. Меня зовут Елена, мне 32 года.
Вросший ноготь вросший ноготь, вросший ноготь лечение, лазер вросший.
В Харькове, в “ИНСТИТУТЕ ЗДОРОВЬЯ” врачи освоили метод лечения вросшего ногтя с помощью зелёного лазера. А сопутствующее лечение назначаются, если выявлен грибок – онихомикоз.

Gel Process — обзор

11.4.4 Другие методы отделки

Золь – гель процесс — это новый метод производства твердых материалов из небольших молекул. Этот метод обычно используется для производства оксидов металлов, особенно оксидов кремния и титана. Процесс включает преобразование мономеров в коллоидный раствор (золь), который действует как предшественник интегрированной сетки (геля) либо дискретных частиц, либо сетчатых полимеров. Золь-гель подход — это дешевый и низкотемпературный метод, который позволяет точно контролировать химический состав продукта.В золь можно вводить небольшие количества легирующих добавок, которые можно равномерно диспергировать и использовать для создания ультратонких функциональных покрытий на текстильных поверхностях.

Недавно был разработан промышленно жизнеспособный процесс производства прочных инсектицидных тканей на основе золь-гель-технологии. Перметрин был включен на хлопчатобумажные ткани с помощью нанопокрытия из оксида кремния, нанесенного обычным набивным материалом с последующим отверждением. Было оценено влияние параметров золь-гель процесса, таких как содержание твердого кремнезема и соотношение перметрин / тетраэтилортосиликат (TEOS), на инсектицидную активность и свойства получаемых тканей.Нанесение нанозольного покрытия привело к появлению тканей с сильным отпугиванием комаров без изменения их гибкости и мягкости. Более того, этот метод позволяет контролировать содержание инсектицида, просто добавляя необходимое количество в ванну для покрытия. Стойкость к стирке оценивалась на текстильной ткани с содержанием перметрина 500 мг / м 2 ткани, показав хороший инсектицидный эффект даже после 50 циклов стирки (Ardanuy et al ., 2013).

Utexbel NV в патенте EP 1598475 описывает изобретение, касающееся текстильной ткани, обладающей свойствами отпугивания насекомых, и способа ее производства.Раствор, содержащий репеллент от насекомых, такой как перметрин, и связующий агент, содержащий акрилат и эластомер, наносят на ткань для увеличения удерживающей способности репеллентного продукта на ткани. Утверждается, что разработанная ткань сохраняет свои свойства отпугивания насекомых даже после последовательной стирки (Casteur, Gribomont, 2009). Daiwa Chemicals производит отделочное средство от комаров Aninsen CLC-3600. Этот продукт можно наносить на текстильные изделия, не изменяя их характеристик, и обладает хорошей стойкостью к стирке.Текстиль, обработанный Aninsen CLC-3600, защищает от комаров.

Beiersdorf AG в патенте EP 1675997 описывает хлопчатобумажный текстильный материал, отпугивающий насекомых, который пропитан препаратом, содержащим этиловый эфир 3- ( N n -бутил- N -ацетиламино) пропионовой кислоты. Основное применение разработанного текстиля — это средство от насекомых с более быстрой и устойчивой эффективностью (Hahn et al ., 2006). Avondale Mills, Inc. в патенте EP 0609600 разработала ткань с покрытием из репеллента насекомых, содержащую перметрин, пластификатор и барьер, покрывающий покрытие, для защиты перметрина от разложения ультрафиолетовым светом и кислородом.Барьер может представлять собой акриловое покрытие, алюминиевую фольгу, уретановое покрытие или внешний тканевый барьер, такой как навес или тент (Mckinney et al ., 1999).

No Fly Zone от Burlington Labs — это средство от насекомых на основе перметрина, которое навсегда приклеивается к тканям перед производством одежды, обеспечивая надежную защиту от комаров и других насекомых. Активный ингредиент перметрин представляет собой синтетическую форму природного репеллента, содержащегося в цветке хризантемы.Хотя на рынке существует множество предметов одежды, в которых применяется средство от насекомых на основе перметрина в окончательной форме одежды, эта технология основана на применении перметрина в процессе производства ткани. В нем используется запатентованная система связывания смолы на основе нанотехнологий, посредством которой перметрин сшивается на тканях в эффективном и безопасном процессе, который обеспечивает постоянное нанесение и обеспечивает высокую степень износостойкости после 25 и более стирок в домашних условиях, в том числе до 85% удерживания на некоторых тканях после 50 стирок.Покрытие можно наносить на различные ткани, включая полиэстер, полиамид, хлопок и шерсть, а также на ткани, содержащие технические волокна, такие как Nomex. В этой технологии отпугивания используются контактные инсектициды и / или репелленты, и она эффективна против нескольких видов ползающих и летающих насекомых (http://noflyzonerepellency.com/about.html).

Из-за развития устойчивости к пиретроиду у Anopheles gambiae возникла необходимость в разработке химических альтернатив для использования на противомоскитных сетках.Эффективность сеток от насекомых, обработанных ДЭТА и этилбутилацетиламинопропионатом, оценивалась в экспериментальных хижинах против пиретроид-устойчивых популяций Anopheles gambiae и Culex quinquefasciatus . Число Anopheles gambiae , заходящих в хижины, уменьшилось, но не было значительного уменьшения числа заходящих Culex quinquefasciatus . Аналогичный результат был получен при кормлении кровью, и исследование подтвердило, что ограниченный контакт с ДЭТА вызывает смертность.Продукт на основе ДЭТА обеспечивает лучшую и более длительную защиту, а биотесты подтвердили, что остаточная активность сохраняется до 6 недель (N’Guessan et al ., 2006).

Недавно, N N — репеллент от комаров на основе диэтилбензамида был нанесен на хлопчатобумажные ткани простым методом набивки. Обработанные хлопчатобумажные ткани оценивали с помощью теста «рука в клетке». Было обнаружено, что ткань, обработанная 12% N N -диэтилбензамидом, дает 100% репеллент от комаров, но когда концентрация увеличивается, репеллентная активность также увеличивается.Результаты показали, что ткани, обработанные с концентрацией 14%, оказались очень эффективными и могут использоваться в гигиенических и медицинских целях (Krishnaveni, 2013).

Еще одна попытка была предпринята для создания репеллентов от комаров из натуральных трав для джинсовой ткани. Три травяных экстракта Ricinus communis , Senna auriculata и Euphorbia herita были нанесены на четыре типа джинсовых тканей непосредственно с помощью метода сухой прокладки. Эти травяные экстракты были объединены, чтобы выбрать лучшую комбинацию трав для создания экологичного натурального репеллента от комаров.Изучена стойкость готовой ткани к стирке, и результаты показали хорошую эффективность отделки даже после 30 стирок (Sumithra and Raja, 2012).

В другом исследовании оценивалась эффективность и остаточная активность хлопчатобумажных тканей, обработанных составом для отделки, содержащим циперметрин и сшивающий агент. Было обнаружено, что метод нанесения покрытия более эффективен, чем метод пропитки. Контактная токсичность на обработанных тканях до и после стирки, а также при хранении была проверена на комаров.Анализы репеллентности насекомых проводили на обработанных образцах и сравнивали с контрольным образцом, и обработанные образцы показали превосходную эффективность отпугивания насекомых. Результаты биотеста показали, что обработанные ткани можно хранить при комнатной температуре (25 ° C) в течение 18 месяцев без потери своей эффективности. Результаты также показали, что стирка тканей, обработанных инсектицидом, существенно не снижает инсектицидный эффект. Благодаря этим характеристикам циперметрин предлагается в качестве потенциально хорошего инсектицида для обработки москитных сеток (Hebeish et al ., 2010).

Другое изобретение касается использования композиции репеллента от комаров в качестве добавки к моющему раствору для придания репеллентных свойств необработанной ткани в процессе бытовой или промышленной стирки. Этот метод также полезен для восстановления или изменения репеллентных свойств от комаров деградированной или не деградированной ткани, отпугивающей комаров, посредством процесса стирки. Композиция репеллента от комаров включала одно или несколько соединений, выбранных из группы, состоящей из ДЭТА, пикаридина, перметринов, пиретроидов и натуральных масел, таких как экстракт лемонграсса или герани, и ткань подвергалась процессу прививки через линкеры, которые смешивались с комарами. репеллент (Vancini, 2013).

Все о гелевой фазе — Soap Queen

Выглядело ли когда-нибудь ваше мыло, полученное холодной обработкой, гелеобразным после нескольких часов пребывания в форме? Скорее всего, он проходит через гелевую фазу. Это часть процесса омыления, когда мыло нагревается до 180 ° F. Это не влияет на качество конечных полос, но влияет на то, как они выглядят.

Вы можете выбрать, следует ли форсировать гелеобразную фазу, в зависимости от вашего рецепта и личных предпочтений.

Форсирование гелевой фазы
Есть несколько причин, по которым вы можете захотеть загустеть мыло:

  • Вам нужны яркие цвета.Гелевая фаза помогает цветам выделяться и придает полосам слегка блестящий вид. Узнайте больше о том, как раскрасить мыло ручной работы здесь.
  • Вы используете натуральные красители. Без гелевой фазы они могут иметь тусклый вид и другой оттенок. Например, гелеобразное мыло, окрашенное порошком корня марены, имеет темно-красный оттенок. Нежеланная версия — приглушенно-лиловый. Смотрите обе версии в этом посте.
  • Вы используете LabColors. Гелевая фаза делает их ярче и обеспечивает их точный цвет.Многослойное мыло с лавандой после гелеобразования меняет цвет от серого до пурпурного.
  • Вы спешите. Из-за более высоких температур гелеобразное мыло быстрее затвердевает и деформируется. Мыло еще нужно отвердеть в течение 4-6 недель.

Высокие температуры являются ключом к форсированию гелевой фазы. Начните с щелока и масел при температуре около 120–130 ° F. Когда мыло окажется в форме, накройте его разделочной доской, а затем полотенцем или одеялом.

Если в помещении для производства мыла прохладнее, можно поставить его на грелку, настроенную на средний уровень.Проверьте его через 30 минут, чтобы убедиться, что он не перегревается — это может вызвать вулканы, тепловые туннели или глицериновые реки. Если становится слишком жарко, выключите грелку и снимите одеяло. Если нет, оставьте еще на 30-60 минут. Затем выключите грелку, но оставьте на ней мыло на ночь. Узнайте больше о том, как изолировать мыло здесь.

Предотвращение гелеобразования
Вот почему вы можете захотеть предотвратить это:

  • Вы предпочитаете матовое мыло. Негелевые батончики выглядят кремовыми и имеют пастельные тона, которые нравятся некоторым производителям.
  • Вы делаете мыло холодной обработки на молоке. Если он станет слишком горячим, он может обгореть, что приведет к обесцвечиванию и появлению неприятного запаха. То же самое может случиться с альтернативными жидкостями, такими как кофе, вино, чай и т. Д.
  • То же самое и с мылом с добавками, такими как фрукты или мед. Мы рекомендуем поддерживать низкие температуры, чтобы не допустить ожогов.
  • Вы работаете с мыльной глазурью. Если он станет слишком горячим, он может потерять форму.

Это чистое медовое мыло хранят в холоде, чтобы предотвратить ожоги.

Чтобы мыло оставалось прохладным, начните с щелока и масел при температуре около 90–100 ° F. После того, как он окажется в форме, положите его в холодильник или морозильную камеру на 24 часа. Вы также можете положить мыло в прохладное место, например, в гараж или подвал, и пропустить через него вентилятор.

Третий вариант — не накрывать мыло при комнатной температуре. Он может образовывать гель или нет, в зависимости от температуры масла и щелока, а также от того, насколько тепло в помещении. Иногда это может привести к частичной гелеобразной фазе, когда одна часть мыла (обычно середина) немного темнее остальных.Опять же, это влияет только на внешний вид полосок — они по-прежнему будут отлично ощущаться на коже.

Эти полоски загустели только посередине, что привело к разнице в цвете.

Как и все в мыловарении, лучший способ выяснить, что вы предпочитаете, — это поэкспериментировать. Попробуйте все три метода, а затем выберите свой любимый.

Этот пост был обновлен в феврале 2019 года.

Пилотное исследование фазы 1/2 местного геля метотрексат-лаурокапрам для лечения пациентов с грибовидным микозом на ранней стадии

Цели: Оценить безопасность и переносимость геля для местного применения, сочетающего метотрексат и лаурокапрам, и получить предварительную информацию о терапевтическом потенциале метотрексата-лаурокапрама у пациентов с грибовидным микозом на ранней стадии (стадии IA или IB).

Дизайн: Открытое пилотное исследование фазы 1/2.

Параметр: Два академических справочных центра.

Пациенты:

Десять пациентов 18 лет и старше с гистологически подтвержденным грибовидным микозом стадии IA или IB.Вмешательство. Гелевый состав метотрексат-лаурокапрам наносили на всю поверхность тела, за исключением половых органов, перианальных областей, сосков, лица и кожи под грудью, через день в течение 24 недель подряд.

Основные показатели результатов: Безопасность метотрексата-лаурокапрама оценивалась в этом исследовании путем анализа побочных эффектов и лабораторных данных.Результаты эффективности включали изменения в состоянии и оценке степени тяжести поражения, уменьшение площади поражений в образце и общую оценку исследователя.

Результаты: Нежелательные явления — кожные реакции легкой степени тяжести. Клинически значимых лабораторных отклонений не наблюдалось. Основываясь на общей оценке исследователя в конце фазы лечения (24 неделя), 7 (78%) из 9 пациентов продемонстрировали ответ на лечение метотрексатом-лаурокапрамом от слабого до умеренного.Статистическая значимость (P = 0,049) была достигнута для уплотнения и зуда, тенденция (P = 0,10) наблюдалась для эритемы, и не было обнаружено никаких изменений для шелушения (P = 0,37).

Выводы: Эти данные показывают, что местное применение метотрексата-лаурокапрама безопасно и в целом хорошо переносится. Это лечение может открыть новые терапевтические возможности для пациентов с грибовидным микозом.

Метод кудрявой девушки: ваше полное руководство 2021

Метод Curly Girl: Когда вы увидите результаты?

Если вы будете следовать этим шагам и использовать подходящие средства для волос, вы должны увидеть изменения сразу после первой процедуры Curly Girl, например, менее вьющиеся волосы. И если вы будете продолжать в том же духе, то через шесть недель вы сможете увидеть действительно хорошие результаты.

Однако вам придется проявить настойчивость и поэкспериментировать с вашими продуктами.Мы также рекомендуем вам время от времени проверять свой локон и тип волос, так как это может измениться после того, как вы начнете использовать метод Curly Girl. Ваши потребности в волосах изменятся в результате питания волос.

Через год вы увидите полные результаты применения метода Curly Girl Method в вашей укладке волос: блестящие, послушные, увлажненные и гладкие кудри!

Возможные проблемы на этапе перехода

К сожалению, не все сразу испытают момент «аллилуйя».Возможно, вашим волосам придется привыкнуть к новому распорядку прически. Как долго ваши волосы адаптируются и с какими проблемами вы столкнетесь? Фаза перехода у всех разная. Чтобы дать вам представление о том, чего вы можете — но не обязательно — ожидать, мы перечислили ряд часто возникающих проблем.

Жирные волосы

При использовании шампуня кожа головы производит слишком много кожного жира. Ваша кожа головы реагирует на сушащий эффект, который сульфаты оказывают на кожный жир на коже головы.Если вы только начинаете пользоваться методом кудрявой девушки, вашей коже головы нужно время, чтобы отрегулировать выработку кожного сала, чтобы восстановить его баланс.

Более вьющиеся волосы

В начале использования метода «вьющиеся девушки» некоторые люди больше страдали от вьющихся волос, чем раньше. Это потому, что ваши волосы, наконец, могут дышать и больше не обременены силиконом и теплом. Если вы будете использовать совместное мытье, увлажняющие процедуры и продукты без силикона, проблема исчезнет через несколько недель.

Также прочтите: Как обрабатывать вьющиеся волосы

Пушистые волосы

Если вы чувствуете, что волосы пушистые, мягкие и вьющиеся, вероятно, у вас чрезмерно обработанные волосы.Хотя вьющиеся волосы обычно сухие и нуждаются в большом количестве влаги, некоторые продукты могут перегружать волосы. Особенно, если у вас очень тонкие волосы. В этом случае очистите волосы шампунем без сульфатов и нанесите на волосы более легкие кондиционеры и увлажняющие средства. Не используйте кондиционер глубокого действия слишком часто.

Смена сезона влияет на ваши локоны

В разные времена года требуется разный уход. Летом используйте более легкие продукты, чтобы не заглушать волосы. Используйте меньше несмываемого кондиционера для волос, чтобы предотвратить вьющиеся волосы и сделать их более четкими.Зимой это происходит с точностью до наоборот. Используйте более тяжелые продукты и больше несмываемого кондиционера для борьбы с сухим зимним воздухом.

Как вы справляетесь с описанными выше проблемами? Прежде всего, дайте вашим волосам время приспособиться к новому распорядку. Также:

  • Бороться с — понятным — побуждением вернуться к фенам, утюжкам для волос и изделиям с сульфатами. Поверьте: упорные кудряшки действительно вознаграждаются!
  • Вы можете постепенно удалять сульфаты из волос и постепенно сокращать их использование.Метод компьютерной графики на самом деле предписывает вам сразу полностью остановиться, но мы можем представить, что это сложно. Делайте это в своем собственном темпе! Однако имейте в виду, что, вероятно, потребуется больше времени, прежде чем вы увидите полные результаты компьютерной графики.
  • Начни с простого! Вы заметили, что существует много разных типов продуктов и брендов. Дело не в том, что вы покупаете и используете как можно больше продуктов для своих локонов, а в том, что вы находите, какие из них работают, осваиваете и применяете новые техники и привычки.

Модификации компьютерной графики: метод ленивой девушки, метод волнистой девушки, эко-кудрявая девушка, метод кудрявой девушки

Не все на 100% следуют методу фигурной девушки, который также известен как «мод CG».Это означает, что вы используете метод кудрявой девушки в качестве основы для своей рутины, но отклоняетесь от правил там, где он вам лучше. Потому что он кажется подходящим для ваших волос. Вам могут понравиться изделия из водорастворимого силикона. Это совершенно нормально. Чем дольше вы применяете метод компьютерной графики, тем больше вы узнаете, будут ли ваши волосы максимально приближены к методу компьютерной графики или вы хотите идти своим собственным путем. Многие люди считают, что лучше всего избегать сульфатов, которые так сильно обезвоживают волосы.

Изучите наши любимые варианты метода Curly Girl

Нам любопытно, как вам нравится метод Curly Girl. Вы сообщите нам об этом в комментариях ниже? А если у вас есть вопросы, не стесняйтесь спрашивать!

Формирование, штурм, нормирование и выполнение

Модель Такмана для воспитания высокопроизводительной команды


Нельзя просто переключиться на командную работу. Новой команде нужно время, чтобы «закрепиться» и работать в полную силу.Более того, члены команды проходят этапы, переходя от незнакомцев к коллегам.

Модель Брюса Такмана «Формирование, штурм, нормирование и исполнение» описывает эти этапы. Когда вы поймете модель Такмана, вы будете знать, как помочь своей новой команде стать эффективной — быстрее. Посмотрим, как это сделать.

Нажмите здесь для просмотра стенограммы этого видео.

Откуда берутся формирование, штурм, нормирование и исполнение?

Психолог Брюс Такман придумал запоминающуюся фразу «формирование, штурм, нормирование и выполнение» в своей статье 1965 года «Последовательность развития в малых группах».»[1] Он описывает путь, которым следуют команды на пути к высокой эффективности. Позже он добавил пятый этап,« перерыв »(также известный как« траур »), чтобы отметить конец пути команды.

Что происходит на стадии формирования Такмана?

Вначале, когда формируется новая команда, люди будут не уверены в цели команды, в том, как они вписываются в нее и будут ли они хорошо работать друг с другом. Они могут быть обеспокоены, любопытны или взволнованы перед началом работы. Как бы они ни чувствовали, они будут обращаться за указаниями к руководителю группы.

Это может занять некоторое время, поскольку люди узнают своих новых коллег и способы работы друг друга.

Что Такман имел в виду под штурмом?

В стадии штурма люди начинают выходить за установленные границы. Конфликт или трение также могут возникать между членами команды, поскольку их истинные персонажи — и их предпочтительные способы работы — всплывают и вступают в противоречие с другими людьми.

На этом этапе члены команды могут оспорить ваш авторитет, стиль управления или даже миссию команды.Если это не остановить, это может привести к очной ставке или усилению напряженности в сети.

Если роли и обязанности еще не ясны, люди могут начать чувствовать себя перегруженными своей рабочей нагрузкой или разочаровываться из-за отсутствия прогресса.

Как распознать стадию нормирования?

Постепенно команда переходит в стадию нормирования. Люди начинают разрешать свои разногласия, ценить сильные стороны друг друга и уважать ваш авторитет как лидера.

Теперь, когда они лучше знают друг друга, члены вашей команды будут чувствовать себя более комфортно, прося о помощи и предлагая конструктивную обратную связь.Они будут разделять более сильную приверженность целям команды, и они должны добиться хорошего прогресса в их достижении.

Как выглядит исполнительская сцена?

Теперь ваша команда работает и полностью раскрывает свой потенциал. Благодаря упорной работе и структурированным процессам команда, скорее всего, эффективно достигнет своих целей.

Джудит Штайн из отдела кадров Массачусетского технологического института говорит об этом этапе: «Роли в команде, возможно, стали более плавными, и члены берут на себя различные роли и обязанности по мере необходимости.Различия между членами приветствуются и используются для повышения производительности команды »[2]

А как насчет стадии перерыва (или траура) Такмана?

Многие команды достигают этой стадии естественным путем. Например, проекты подходят к концу, или постоянные команды распускаются, а людей переводят на другую работу.

Людям, которые любят рутину или которые установили тесные рабочие отношения с коллегами, это время может оказаться трудным.

Использование инструмента формирования, штурма, нормирования и исполнения

Выполните следующие действия, чтобы убедиться, что вы делаете правильные вещи в нужное время:

  1. Определите стадию, на которой находится ваша команда, по описанию выше.
  2. Подумайте, что вам нужно сделать, чтобы перейти к следующему этапу.
  3. Запланируйте регулярные проверки того, где находится ваша команда, и соответствующим образом скорректируйте свое поведение и подход к руководству.

Модель Такмана не является улицей с односторонним движением — команды могут перемещаться между этапами. Когда вы выходите на сцену для выступлений, продолжайте наблюдать за прогрессом своей команды, если она не ускользнет. Например, новый член команды может нарушить динамику группы, или новое направление бизнеса может означать, что вам придется переоценить свои командные роли и цели.

Проведение этапов формирования, штурма, нормирования и выполнения

Получите бесплатную рассылку новостей!

Изучайте новые карьерные навыки каждую неделю и получайте бонус Контрольный список для успешного менеджера , бесплатно!

Прочтите нашу Политику конфиденциальности

От формирования к штурму

Чтобы установить четкие цели для группы на этом первом этапе, создайте устав команды .И помогать членам команды ставить личные цели чтобы они могли видеть, как их работа впишется в общую картину.

Стадия формирования — это еще и знакомство людей друг с другом. Если вы работаете удаленно, попробуйте виртуальную адаптацию упражнения для укрепления групповой связи и поддержки вашего видения.

От штурма до нормирования

Storming может создать или разрушить команду, поэтому важно, чтобы вы установили процессы для отслеживания прогресса и успеха задач.

Группа также должна чувствовать себя в безопасности, выдвигая идеи. Чтобы укрепить командное доверие , попробуйте попросить помощи по задачам. Таким образом вы побудите людей задуматься о том, что они могут предложить и что им нужно от других членов команды.

Не оставлять командный конфликт без контроля, но помните, что небольшое трение может быть хорошим делом — оно может выявить недостатки, которые группа может исправить вместе, и, в конечном итоге, приведет к инновациям.

Но, возможно, вам придется помочь более спокойным членам команды высказать свое мнение.Чтобы избежать доминирования громких людей на личных или виртуальных встречах команды , спросите и выслушайте точку зрения каждого.

От нормирования к исполнению

Заставьте свою команду сплотиться с помощью личных или виртуальных упражнений по тимбилдингу . Эти социальные связи особенно важны сейчас, поскольку все больше из нас работают из дома. Так что поддерживайте их в течение всего периода нормализации и после.

Используйте регулярные личные встречи, чтобы побудить людей отступить, пересмотреть свои цели и взять на себя ответственность.

Выполнение до отсрочки

Когда команда перешла на стадию исполнения, вы можете сосредоточиться на других целях и новых областях, которые принесут пользу бизнесу. Освободите больше времени для себя и повысьте вовлеченность команды, делегируя задачи и проекты.

Вы также должны уделять время личному развитию группы. Обсудите со своей командой, какие возможности и ресурсы им доступны, например, инструменты Mind Tools.

Перенос (или траур)

Найдите время, чтобы отметить достижения команды — обмен положительным опытом облегчит вам задачу, если вы снова будете работать с одними и теми же людьми в будущем.

Если кто-то из членов команды неуверен в том, что ждет впереди, повысьте его уверенность и карьерные перспективы, похвалив их на собраниях компании. И предложите предоставить LinkedIn рекомендации и ссылки, если они будут двигаться дальше.

Вы также можете попросить группу предоставить 360-градусный отзыв размышлять, учиться и лучше управлять будущими командами.

Ключевые моменты

Психолог Брюс Такман описал, как команды проходят этапы, известные как формирование, штурм, нормирование, исполнение и перерыв (или оплакивание).

Вы можете использовать модель Такмана, чтобы помочь вашей команде работать лучше. Сначала определите, на каком этапе находится ваша команда, а затем воспользуйтесь нашими советами, чтобы перемещать их по этапам.

Помните, команды тоже могут ускользнуть на сцену. Используйте модель Такмана, чтобы постоянно проверять, где находится ваша команда, и вносить любые необходимые изменения, чтобы вернуться на курс.

Прошлое и настоящее

Извлечение ДНК, РНК и белка — основной метод, используемый в молекулярной биологии.Эти биомолекулы можно выделить из любого биологического материала для последующих процессов, аналитических или препаративных целей. В прошлом процесс экстракции и очистки нуклеиновых кислот был сложным, длительным, трудоемким и ограниченным с точки зрения общей производительности. В настоящее время существует множество специализированных методов, которые можно использовать для извлечения чистых биомолекул, например протоколы на основе растворов и колонок. Ручной метод, безусловно, прошел долгий путь с течением времени с различными коммерческими предложениями, которые включали полные наборы, содержащие большинство компонентов, необходимых для выделения нуклеиновой кислоты, но большинство из них требует повторных этапов центрифугирования с последующим удалением супернатантов в зависимости от типа образца и дополнительная механическая обработка.Спрос на автоматизированные системы, предназначенные для средних и крупных лабораторий, за последние годы вырос. Это альтернатива трудоемким ручным методам. Технология должна обеспечивать высокую пропускную способность образцов; выход, чистота, воспроизводимость и масштабируемость биомолекул, а также скорость, точность и надежность анализа должны быть максимальными при минимальном риске перекрестного загрязнения.

Извлечение биомолекул, ДНК, РНК и белка — наиболее важный метод, используемый в молекулярной биологии [1].Это отправная точка для последующих процессов и разработки продуктов, включая диагностические комплекты. ДНК, РНК и белок могут быть выделены из любого биологического материала, такого как живые или консервированные ткани, клетки, вирусные частицы или другие образцы для аналитических или препаративных целей [1].

Две категории, которые участвуют в очистке ДНК, включают выделение конструкций рекомбинантной ДНК, таких как плазмиды или бактериофаги, и выделение хромосомной или геномной ДНК от прокариотических или эукариотических организмов [2].Как правило, для успешной очистки нуклеиновых кислот требовалось четыре важных этапа: эффективное разрушение клеток или тканей; денатурация нуклеопротеидных комплексов; инактивация нуклеаз, например, РНКазы для экстракции РНК и ДНКазы для экстракции ДНК; вдали от загрязнения [2]. Нуклеиновая кислота-мишень не должна содержать примесей, включая белки, углеводы, липиды или другие нуклеиновые кислоты, например ДНК без РНК или РНК без ДНК [3]. Качество, а также целостность выделенной нуклеиновой кислоты будут напрямую влиять на результаты всех последующих научных исследований [4].

С другой стороны, РНК является нестабильной молекулой и имеет очень короткий период полураспада после извлечения из клетки или тканей [5]. Существует несколько типов встречающихся в природе РНК, включая рибосомную РНК (рРНК) (80–90%), информационную РНК (мРНК) (2,5–5%) и транспортную РНК (тРНК) [3]. Особая осторожность и меры предосторожности требуются для выделения РНК, поскольку она подвержена деградации [3, 6]. РНК особенно нестабильна из-за повсеместного присутствия РНКаз, которые представляют собой ферменты, присутствующие в крови, всех тканях, а также в большинстве бактерий и грибов в окружающей среде [3, 5] . Сильные денатуранты всегда использовались при выделении интактной РНК для ингибирования эндогенных РНКаз [2]. Экстракция РНК основана на хорошей лабораторной технике и методе без РНКазы. РНКаза термостабильна и повторно складывается после тепловой денатурации. Их трудно инактивировать, поскольку они не требуют кофакторов [2]. Наиболее распространенные методы выделения можно разделить на два класса: использование 4 M тиоцианата гуанидиния и использование фенола и SDS [2].

Очистка белков — одна из наиболее важных частей в исследованиях белков для понимания их функции, поскольку они могут частично или полностью участвовать в любой деятельности по синтезу ДНК.Очистка белка необходима для определения его уникальных характеристик, включая размер, заряд, форму и функцию [7]. Экстракция на основе клеток — это начальный этап почти любой очистки белка. Белок может быть извлечен несколькими методами, такими как лизис детергентом, усилие сдвига, обработка солью с низким содержанием ионов (высаливание) и быстрые изменения давления, которые направлены на ослабление и разрушение мембран, окружающих клетку, чтобы позволить белкам уйти [7 ]. При работе с белками следует учитывать некоторые факторы.Обычно экстракция белка выполняется при очень низкой температуре (), поскольку белки легко денатурируются после того, как они высвобождаются из клеток. Состояние буфера — один из основных факторов, которые необходимо учитывать. Рекомендуется поддерживать определенные буферные условия из-за чувствительности белков к изменениям pH окружающей среды [4]. Чистота воды будет влиять на выход конечных продуктов, так как неочищенная вода содержит много микроорганизмов или протеаз, которые приводят к деградации белка [4].Ингибитор белка, который может существовать в растворе или буферах, вызывает гидролиз белков. Детергент, еще один важный фактор, которым нельзя пренебрегать при очистке белка, состоит из гидрофобной части линейного или разветвленного углеводородного «хвоста» и гидрофильной «головы» [4]. Они солюбилизируют мембранный белок и представляют собой амфифатические молекулы, которые образуют мицеллы с гидрофильной головкой белков [4]. Восстановители будут добавлены в раствор или буфер для экстракции и очистки белка, чтобы избежать потери активности белков или ферментов, вызванной окислением.Хранение белков важно, поскольку период полураспада белка обычно зависит от температуры хранения [4].

Для очистки белка требуется специальный анализ. Для очистки белка должен быть известен быстрый и простой метод анализа, чтобы можно было определить известную молекулярную массу, удельную аффинность или иммуноаффинность интересующего неферментативного белка с помощью соответствующего метода [7]. Есть несколько методов, обычно используемых для очистки белка. Это ионообменная хроматография, гель-фильтрация, аффинная хроматография и гель-электрофорез [4].

2. История
2.1. Экстракция нуклеиновой кислоты

Самое первое выделение ДНК было сделано швейцарским врачом Фридрихом Мишером в 1869 году [8] . Он надеялся разгадать фундаментальные принципы жизни, определить химический состав клеток. Он пытался изолировать клетки из лимфатических узлов для своего эксперимента, но чистота лимфоцитов была трудной и невозможно было получить в достаточных количествах. Поэтому он перешел на лейкоциты, где получил их из гноя на собранных хирургических повязках.

Первоначально Мишер сосредоточился на различных типах белков, из которых состоят лейкоциты, и показал, что белки являются основными компонентами цитоплазмы клетки. Во время своих тестов он заметил, что при добавлении кислоты из раствора выпадало вещество, которое снова растворялось при добавлении щелочи. Это был первый раз, когда он получил неочищенный осадок ДНК.

Чтобы отделить ДНК от белков в экстрактах своих клеток, Мишер разработал новый протокол для отделения ядер клеток от цитоплазмы, а затем выделил ДНК.Однако его первый протокол не дал достаточно материала для продолжения дальнейшего анализа. Ему пришлось разработать второй протокол для получения большего количества очищенного нуклеина, который позже его ученик Ричард Альтман назвал «нуклеиновой кислотой» [8].

2.2. Экстракция белка

В восемнадцатом веке белки были известны как отдельный класс биологических молекул Антуаном Фуркроем и другими. Они различали эту молекулу по ее способности коагулировать под воздействием тепла или кислоты.Однако первое описание белка было выполнено голландским химиком Герхардусом Йоханнесом Малдером в 1893 году [9]. Его исследования состава веществ животного происхождения, в основном фибрина, альбумина и желатина, показали присутствие углерода, водорода, кислорода и азота [9]. Более того, он признал, что сера и фосфор иногда присутствуют в животных веществах, состоящих из большого количества атомов, и установил, что эти «вещества» являются макромолекулами [9].

Большинство ранних исследований было сосредоточено на белках, которые можно было очищать в больших количествах.Например, кровь, яичный белок и различные токсины. Большинство белков трудно очистить в количествах, превышающих миллиграммы, даже с помощью современных высокотехнологичных методов. Большинство методов очистки белков были разработаны в рамках проекта, возглавляемого Эдвином Джозефом Коном, ученым-белком, во время Второй мировой войны. Он отвечал за очистку крови и разработал методы выделения фракции сывороточного альбумина из плазмы крови, которая важна для поддержания осмотического давления в кровеносных сосудах, что помогает солдатам выжить [10].

3. Текущая тенденция

После судьбоносного события, когда Мишеру удалось получить ДНК из клетки, многие другие последовали его примеру, что привело к дальнейшему развитию протокола выделения и очистки ДНК. Первоначальные рутинные лабораторные процедуры для экстракции ДНК были разработаны на основе стратегий центрифугирования в градиенте плотности. Мезельсон и Шталь использовали этот метод в 1958 г., чтобы продемонстрировать полуконсервативную репликацию ДНК [3]. В более поздних процедурах использовались различия в растворимости больших хромосомных ДНК, плазмид и белков в щелочном буфере [3].

В настоящее время существует множество специализированных методов извлечения чистой ДНК, РНК или белка. Как правило, они делятся на протоколы на основе решений или на основе столбцов. Большинство из этих протоколов были преобразованы в коммерческие наборы, упрощающие процессы экстракции биомолекул.

3.1. Тип экстракции нуклеиновой кислоты
3.1.1. Стандартный метод

Экстракция тиоцианата гуанидиния-фенола-хлороформа гуанидиния
Соль является обычной примесью в образцах нуклеиновых кислот.Всегда требовалось удалить его из образцов нуклеиновой кислоты до того, как можно будет проводить какие-либо последующие процессы и анализ. Следовательно, для обессоливания образца, содержащего нуклеиновую кислоту, необходимы однократные или многократные стадии разделения и / или очистки [11]. Общие этапы очистки нуклеиновых кислот включают лизис клеток, который разрушает клеточную структуру с образованием лизата, инактивацию клеточных нуклеаз, таких как ДНКаза и РНКаза, и отделение желаемой нуклеиновой кислоты от клеточного мусора [2].Органический растворитель — экстракция фенол-хлороформ является одним из примеров, который широко используется для выделения нуклеиновой кислоты.
Хотя фенол, легковоспламеняющаяся, едкая и токсичная карболовая кислота, может быстро денатурировать белки, он не полностью подавляет активность РНКазы [12]. Эту проблему можно решить, используя смесь фенол: хлороформ: изоамиловый спирт (25: 24: 1). Белки, липиды, углеводы и остатки клеток удаляются путем экстракции водной фазы органической смесью фенола и хлороформа [12, 13].При добавлении фенола и хлороформа образуется двухфазная эмульсия. Затем гидрофобный слой эмульсии осаждается на дне, а гидрофильный слой — наверху путем центрифугирования [3]. Собирают верхнюю фазу, содержащую ДНК, и ДНК можно осаждать из супернатанта путем добавления этанола или изопропанола в соотношении 2: 1 или 1: 1 и высокой концентрации соли [3]. Осадок ДНК собирают центрифугированием, избыток соли промывают 70% этанолом и центрифугируют, чтобы удалить надосадочную жидкость этанола.Затем осадок ДНК растворяют в буфере ТЕ или стерильной дистиллированной воде [3].
Использование изотиоцианата гуанидиния для экстракции РНК впервые было упомянуто Ulrich et al. (1977). Метод был трудоемким. Поэтому он был заменен одностадийной техникой, известной как экстракция тиоцианата гуанидиния-фенол-хлороформ, Хомчинским и Сакки (1987) [12], посредством которой гомогенат экстрагируется фенолом / хлороформом при пониженном pH. Тиоцианат гуанидиния — хаотропный агент, используемый при расщеплении белков.Принцип этого одностадийного метода заключается в том, что РНК отделяется от ДНК после экстракции кислым раствором, состоящим из тиоцианата гуанидиния, ацетата натрия, фенола и хлороформа [13]. В кислых условиях общая РНК будет оставаться в верхней водной фазе всей смеси, в то время как ДНК и белки останутся в межфазной или нижней органической фазе. Затем проводят восстановление общей РНК путем осаждения изопропанолом [12].

Метод щелочной экстракции
Щелочной лизис использовали для выделения плазмидной ДНК и E.coli [12]. Он хорошо работает со всеми штаммами E. coli
и с бактериальными культурами размером от 1 мл до более 500 мл в присутствии додецилсульфата натрия (SDS). Принцип метода основан на селективной щелочной денатурации высокомолекулярной хромосомной ДНК, в то время как ковалентно замкнутая кольцевая ДНК остается двухцепочечной [14]. Бактериальные белки, разрушенные клеточные стенки и денатурированная хромосомная ДНК объединены в большие комплексы, покрытые додецилсульфатом.Плазмидную ДНК можно выделить из супернатанта после удаления денатурированного материала центрифугированием.

CTAB Extraction Method
Для экстракции растений первым шагом, который необходимо сделать, является измельчение образца после его замораживания жидким азотом. Цель выполнения этого шага — разрушить материал клеточной стенки образца и предоставить доступ к нуклеиновой кислоте, в то время как вредные клеточные ферменты и химические вещества остаются инактивированными. После измельчения образца его можно ресуспендировать в подходящем буфере, таком как CTAB.
Бромид цетилтриметиламмония (CTAB) — неионный детергент, который может осаждать нуклеиновые кислоты и кислые полисахариды из растворов с низкой ионной силой [15]. Между тем в этих условиях белки и нейтральные полисахариды остаются в растворе. В растворах с высокой ионной силой CTAB не осаждает нуклеиновые кислоты и образует комплексы с белками. Поэтому CTAB полезен для очистки нуклеиновой кислоты от организмов, которые продуцируют большие количества полисахаридов, таких как растения и некоторые грамотрицательные бактерии [15].
В этом методе также используются органические растворители и осаждение спиртом на более поздних этапах [12]. Нерастворимые частицы удаляют центрифугированием для очистки нуклеиновой кислоты. Растворимые белки и другие материалы разделяются путем смешивания с хлороформом и центрифугирования. После этого нуклеиновую кислоту необходимо осадить из надосадочной жидкости и тщательно промыть для удаления загрязняющих солей. Затем очищенную нуклеиновую кислоту ресуспендируют и хранят в буфере ТЕ или стерильной дистиллированной воде.

Градиентное центрифугирование бромида этидия () -хлорида цезия ()
Градиентное центрифугирование — это сложный, дорогой и трудоемкий метод по сравнению с другими протоколами очистки.Это требует крупномасштабного бактериального культивирования. Следовательно, он не подходит для минипрепаратов плазмидной ДНК [4]. Нуклеиновые кислоты можно концентрировать центрифугированием в градиенте после осаждения спиртом и ресуспендирования. Интеркаляция изменяет плавающую плотность молекулы в высокомолярные ковалентно замкнутые круговые молекулы, которые будут накапливаться при более низких плотностях градиента, поскольку они включают меньше на пару оснований по сравнению с линейными молекулами. После экстракции гидрофобные вещества удаляют соответствующими гидрофобными растворителями.Очищенную нуклеиновую кислоту переосаждают спиртом [1].

Очистка поли РНК с помощью хроматографии Oligp (dT) -целлюлозы
Поли РНК является матрицей для трансляции белка, и большинство эукариотических мРНК несут ее участки на своих 3’-концах [4, 15]. Он составляет от 1 до 2% от общей РНК и может быть разделен с помощью аффинной хроматографии на олиго (dT) -целлюлозе. Поли (A) хвосты образуют стабильные гибриды РНК-ДНК с короткими цепями олиго (dT), которые прикрепляются к различным поддерживающим матрицам [4, 15].В хроматографический буфер необходимо добавить большое количество соли для стабилизации дуплексов нуклеиновых кислот, поскольку образуются только несколько пар оснований dT-A. Буфер с низким содержанием соли используется после того, как неполиаденилированные РНК были отмыты от матрицы. Этот буфер помогает дестабилизировать двухцепочечные структуры и элюировать поли РНК из смолы [15].
Существует два метода, обычно используемых при выборе поли РНК — колоночная хроматография на олиго (dT) колонках и периодическая хроматография. Колоночная хроматография обычно используется для очистки больших количеств (> 25 г) нерадиоактивной РНК поли (A) + , выделенной из клеток млекопитающих.При работе с небольшими количествами (<50 г) тотальной РНК млекопитающих предпочтительным методом является периодическая хроматография. Его можно использовать, когда нужно обработать много образцов РНК, радиоактивных или нет. Периодическая хроматография проводится с олиго (dT) целлюлозой тонкой очистки при оптимальных температурах для связывания и элюирования [15].

3.1.2. Твердофазная экстракция нуклеиновых кислот

Твердофазная очистка нуклеиновых кислот можно найти в большинстве имеющихся на рынке коммерческих наборов для экстракции.Он обеспечивает быструю и эффективную очистку по сравнению с традиционными методами [16]. Многие проблемы, связанные с экстракцией жидкость-жидкость, такие как неполное разделение фаз, можно предотвратить. Твердофазная система будет поглощать нуклеиновую кислоту в процессе экстракции в зависимости от pH и содержания соли в буфере. Процесс абсорбции основан на следующих принципах: связывающее водород взаимодействие с гидрофильной матрицей в хаотропных условиях, ионный обмен в водных условиях посредством анионита, а также механизмы сродства и исключения по размеру.

Твердофазную очистку обычно проводят на спин-колонке, работающей под действием центробежной силы [17]. Этот метод позволяет быстро очистить нуклеиновую кислоту по сравнению с обычными методами. Матрицы из диоксида кремния, частицы стекла, диатомовая земля и анионообменные носители являются примерами, которые использовались в методе твердофазной экстракции в качестве твердого носителя. Четыре ключевых этапа твердофазной экстракции — это лизис клеток, адсорбция нуклеиновых кислот, промывка и элюция [6].

Первым шагом в процессе твердофазной экстракции является подготовка колонки для адсорбции пробы.Кондиционирование колонки может быть выполнено с использованием буфера при определенном pH для преобразования поверхности или функциональных групп твердого вещества в определенную химическую форму. [17]. Затем образец, который был разрушен с использованием буфера для лизиса, наносится на колонку. Желаемая нуклеиновая кислота будет абсорбироваться колонкой с помощью высокого pH и концентрации соли связывающего раствора [17]. Другие соединения, такие как белок, также могут иметь прочную специфическую связь с поверхностью колонки. Эти загрязнения могут быть удалены на стадии промывки с использованием промывочного буфера, содержащего конкурентный агент [17].На стадии элюирования вводится ТЕ-буфер или вода, чтобы высвободить нужную нуклеиновую кислоту из колонки, чтобы ее можно было собрать в очищенном состоянии [17]. Обычно на этапах промывки и элюирования процесса очистки требуется быстрое центрифугирование, вакуумная фильтрация или разделение колонок.

Были описаны твердофазная экстракция нуклеиновой кислоты в смешанном слое и ее использование для выделения нуклеиновой кислоты [18]. Твердые фазы смешанного слоя по настоящему изобретению представляют собой смеси, по меньшей мере, двух различных твердых фаз, могут быть твердыми или полутвердыми, пористыми или непористыми.Каждая твердая фаза может связываться с нуклеиновой кислотой-мишенью в различных условиях раствора и высвобождать нуклеиновую кислоту в аналогичных условиях элюирования [18].

Матрицы кремнезема
Основой для большинства продуктов, связанных с очисткой нуклеиновых кислот, являются уникальные свойства матриц кремнезема для избирательного связывания ДНК. Типы материалов из диоксида кремния, включая частицы стекла, такие как стеклянный порошок, частицы диоксида кремния и стеклянные микроволокна, полученные путем измельчения фильтровальной бумаги из стекловолокна, включая диатомовую землю [19].Матрица из гидратированного диоксида кремния, которую получали кипячением диоксида кремния в гидроксиде натрия или гидроксиде калия при молярном соотношении от примерно 2: 1 до 10: 1 в течение по меньшей мере примерно 48 часов, была введена в процесс очистки ДНК. ДНК связывается с неорганической матрицей и выделяется в нагретой воде [20].
Принцип очистки матриц кремнезема основан на высоком сродстве отрицательно заряженной основной цепи ДНК к положительно заряженным частицам кремнезема [21]. Натрий играет роль катионного мостика, который притягивает отрицательно заряженный кислород в фосфатном остове нуклеиновой кислоты [22].Катионы натрия разрывают водородные связи между водородом в воде и отрицательно заряженными ионами кислорода в кремнеземе в условиях высокой концентрации соли (pH ≤7) [22]. ДНК прочно связана, и тщательная промывка удаляет все загрязнения. Очищенные молекулы ДНК могут быть элюированы при низкой ионной силе (pH ≥7) позже с использованием буфера ТЕ или дистиллированной воды [21].
Известно, что, помимо матриц кремнезема, нитроцеллюлозные и полиамидные мембраны, такие как нейлоновые матрицы, связываются с нуклеиновыми кислотами, но с меньшей специфичностью.Эти материалы часто используются в качестве твердофазных матриц для переноса нуклеиновых кислот и гибридизации [23]. Полиамидные матрицы более долговечны, чем нитроцеллюлоза, и, как известно, необратимо связывают нуклеиновые кислоты. Нуклеиновые кислоты можно иммобилизовать на полиамидных матрицах в буфере с низкой ионной силой [23].

Стеклянная частица
Стеклянные частицы, порошок и шарики пригодны для очистки нуклеиновых кислот. Например, выделение ДНК из агарозных гелей включает использование хаотропных солей для облегчения связывания ДНК с обычным силикатным стеклом, бесцветным стеклом и боросиликатным стеклом (стекловолоконный фильтр).Адсорбция нуклеиновой кислоты на стеклянную подложку, скорее всего, происходит по механизму и принципу, аналогичному адсорбционной хроматографии [24]. Очистку нуклеиновых кислот можно также проводить на смеси силикагеля и стекла [19]. В этом изобретении было обнаружено, что смесь силикагеля и стеклянных частиц может использоваться для отделения нуклеиновой кислоты от других веществ в присутствии раствора хаотропных солей.

Диатомовая земля
Диатомовая земля, также известная как кизельгур или диатомит, содержит до 94% кремнезема [25].Он использовался для фильтрации и в хроматографии, и он полезен для очистки плазмид и другой ДНК путем иммобилизации ДНК на ее частицах в присутствии хаотропного агента. Полученная ДНК, связанная с диатомовой землей, затем промывается спиртосодержащим буфером. Затем спиртосодержащий буфер удаляется, и ДНК элюируется малосолевым буфером или дистиллированной водой [25].

Очистка нуклеиновых кислот на основе магнитных шариков
Магнитное разделение — это простой и эффективный способ, который в настоящее время используется для очистки нуклеиновых кислот.Многие магнитные носители сейчас коммерчески доступны. Частицы, обладающие магнитным зарядом, могут быть удалены с помощью постоянного магнита в приложении магнитного поля. Часто для процесса выделения используются магнитные носители с иммобилизованными аффинными лигандами или полученные из биополимера, демонстрирующего сродство к целевой нуклеиновой кислоте. Например, магнитные частицы, которые производятся из различных синтетических полимеров, биополимеров, пористого стекла или магнитных частиц на основе неорганических магнитных материалов, таких как оксид железа с модифицированной поверхностью.Для связывания нуклеиновых кислот предпочтительно использовать материалы с большой площадью поверхности. Материалы с магнитными частицами, такие как шарики, более предпочтительны в качестве основы в процессе изоляции из-за их большей связывающей способности. Процесс связывания нуклеиновой кислоты может поддерживаться нуклеиновой кислотой, «обертывающей» подложку. Магнит может быть приложен к стороне сосуда, который содержит смесь образцов для агрегирования частиц у стенки сосуда и выливания остатка образца [26].
Частицы, обладающие магнитными или парамагнитными свойствами, используются в изобретении, где они заключены в полимер, такой как намагничивающаяся целлюлоза [27]. В присутствии определенных концентраций соли и полиалкиленгликоля намагничивающаяся целлюлоза может связываться с нуклеиновыми кислотами. Небольшая нуклеиновая кислота требует более высоких концентраций соли для прочного связывания с намагничивающимися частицами целлюлозы. Следовательно, концентрацией соли можно выборочно управлять для высвобождения нуклеиновой кислоты, связанной с намагничивающейся целлюлозой, в зависимости от размера.Намагничивающаяся целлюлоза, связанная с нуклеиновой кислотой, будет промыта подходящим промывочным буфером перед их контактом с подходящим элюирующим буфером для отделения желаемой нуклеиновой кислоты от целлюлозы. Отделение намагничивающейся целлюлозы от надосадочной жидкости на всех этапах очистки может быть выполнено путем приложения магнитного поля, которое притягивает или притягивает их к стенке сосуда [27]. Намагничивающаяся целлюлоза, используемая в этом изобретении, имеет содержание оксида железа примерно до 90% по массе от общей массы целлюлозы.Магнитный компонент целлюлозы также может быть заменен другими магнитными соединениями, такими как оксид железа или оксид никеля [27].
Набор для экстракции, основанный на принципе очистки нуклеиновых кислот с помощью магнитных шариков, коммерчески доступен на рынке [28]. Особенностью этого набора является то, что поставляемые реагенты предназначены для использования с магнитными инструментами. Этот магнитный инструмент рекомендуется использовать при работе в формате микропробирки. Это практичное устройство для разделения на основе технологии магнитных частиц.Набор не требует каких-либо органических растворителей и исключает необходимость повторного центрифугирования, вакуумной фильтрации или разделения колонок. Протокол основан на модифицированной процедуре щелочного лизиса с последующим связыванием нуклеиновой кислоты с магнитными частицами. Магнитный инструмент используется для захвата магнитных частиц со связанной нуклеиновой кислотой, а загрязнения удаляются промыванием с помощью предусмотренного промывочного буфера. Затем нуклеиновая кислота элюируется с магнитных частиц буфером для элюции [28].
Другой набор для экстракции работает по тому же принципу, что и описанная выше экстракция, в которой для очистки нуклеиновых кислот использовалась технология магнитных частиц [29]. Он сочетает в себе скорость и эффективность очистки ДНК на основе диоксида кремния с удобством работы с магнитными частицами. Магнитный стержень, защищенный крышкой стержня, используется для захвата магнитных частиц. Он попадает в сосуд с образцами и притягивает магнитные частицы. Затем крышка магнитного стержня помещается над другим сосудом, и магнитные частицы высвобождаются [29].
Очистка нуклеиновой кислоты с использованием гранул диоксида циркония — это еще один тип очистки на основе магнитных гранул. Эти микросферические парамагнитные шарики имеют большую доступную поверхность связывания и могут быть диспергированы в растворе. Эта характеристика позволяла тщательно связывать, промывать и элюировать нуклеиновую кислоту. В комплекте для выделения полной нуклеиновой кислоты, в котором используется эта технология очистки нуклеиновых кислот, используется механическое разрушение образцов гранулами диоксида циркония в растворе на основе тиоцианата гуанидиния, который не только высвобождает нуклеиновую кислоту, но и инактивирует нуклеазу в матрице образца [ 30].После стадии лизиса образцы разбавляются изопропанолом. Парамагенетические гранулы добавляют к образцам для связывания нуклеиновых кислот. Смесь гранул и нуклеиновой кислоты иммобилизуют на магнитах и ​​промывают для удаления белка и загрязнений. Удаление остаточного связывающего раствора выполняется вторым промывочным раствором, и, наконец, нуклеиновая кислота элюируется буфером с низким содержанием соли [30].
Твердофазная технология на основе парамагенетических шариков с обратимой иммобилизацией была использована в системе очистки ПЦР для получения качественной ДНК.Это требует простого протокола без центрифугирования и фильтрации. ПЦР-ампликоны связываются с парамагенетическими частицами, которые выводят их из раствора, позволяя смывать такие загрязнители, как dNTP, праймеры и соли [31].
Магнитный олиго (dT) шарик является альтернативой другим олиго (dT) матрицам для очистки поли РНК из образца тотальной РНК [4]. Поли РНК можно экстрагировать путем введения магнитных шариков, покрытых олиго (dT). РНК с поли-А-хвостом присоединяется к олиго (dT). Затем шарики будут вытягиваться на дно пробирки, удаляя мРНК непосредственно из общей РНК.Специально обработанные магнитные шарики минимизируют неспецифическое связывание других нуклеиновых кислот и обеспечивают чистоту мРНК [32].

Анионообменный материал
Анионообменная смола — один из популярных примеров, в котором используется принцип анионного обмена [33]. Он основан на взаимодействии между положительно заряженными группами диэтиламиноэтилцеллюлозы (DEAE) на поверхности смолы и отрицательно заряженными фосфатами основной цепи ДНК. Анионообменная смола состоит из определенных гранул диоксида кремния с большим размером пор, гидрофильным поверхностным покрытием и высокой плотностью заряда [34].Большая площадь поверхности смолы позволяет плотно связывать группы DEAE. Смола работает в широком диапазоне условий pH (pH 6–9) и / или концентрации соли (0,1–1,6 M), что может оптимизировать отделение ДНК от РНК и других примесей [34]. Следовательно, концентрация соли и условия pH буферов являются одними из основных факторов, определяющих, связана ли нуклеиновая кислота или элюируется из колонки. ДНК может связываться с группой DEAE в широком диапазоне концентраций соли. Примеси, такие как белок и РНК, отмываются от смолы с использованием буферов со средним содержанием соли, в то время как ДНК остается связанной до тех пор, пока не будет элюирована буфером с высоким содержанием соли [34].
Метод использования анионообменных материалов для выделения нуклеиновой кислоты был раскрыт в изобретении [35], где использовались коммерчески доступные сильные или слабые положительно заряженные анионообменные материалы с выбранными растворами с известной ионной силой для адсорбции и элюирования. Большинство водорастворимых компонентов, таких как белок, можно промыть через колонку, используя раствор с известной ионной силой для связывания нуклеиновых кислот с материалами анионообменной колонки.Ионная сила для элюирования генерируется с использованием известной концентрации соли, которая смешивается с буфером для контроля силы pH, в идеале соответствующей самой низкой ионной силе, при которой нуклеиновые кислоты будут полностью элюироваться [35].

3.2. Тип экстракции белка Метод

Первым этапом очистки белка является лизис клеток. Чтобы эффективно очищать и анализировать белок, они должны быть сначала высвобождены из клетки-хозяина в растворимой форме. Плазматическая мембрана клеток млекопитающих, состоящая из фосфолипидов и белков, легко разрушается [36].Для сравнения, экстракция белка из грибов и бактерий кажется более сложной задачей из-за их стабильной клеточной стенки, которая прочнее плазматической мембраны.

Ткани растений содержат широкий спектр белков, которые различаются по своим свойствам. Некоторые специфические факторы должны быть приняты во внимание при разработке протокола экстракции белка для растений [37]. Например, наличие жесткой клеточной стенки из целлюлозы необходимо разрезать, чтобы высвободить содержимое клетки. Конкретные загрязняющие соединения, такие как фенольные соединения и ряд протеиназ, могут приводить к деградации или модификации белка.Поэтому для экстракции и очистки белка из растений требуются особые условия [38].

Для удаления клеточной стенки используются методы механического разрушения, такие как French Press или стеклянные шарики, с последующей экстракцией общего белка на основе детергента [39].

3.2.1. Ионообменная хроматография

Ионообменная хроматография разделяет белки на основе их поверхностного ионного заряда с использованием смол, которые модифицированы положительно или отрицательно заряженными химическими группами [4, 7].Большинство белков имеют общий отрицательный или положительный заряд в зависимости от их изоэлектрической точки (pI) при заданном pH, что позволяет им взаимодействовать с противоположно заряженной хроматографической матрицей [7]. Если чистый заряд белка положительный при pH ниже значения pI, белок будет связываться с катионитом; при pH выше значения pI чистый заряд белка отрицательный, и белок будет связываться с анионообменником [38].

Белки, которые слабо взаимодействуют со смолами, например, слабый положительно заряженный белок, пропущенный через смолу, модифицированную отрицательно заряженной группой, элюируются в буфере с низким содержанием соли.С другой стороны, белки, которые сильно взаимодействуют, требуют для элюирования большего количества соли. Белки с очень похожими зарядовыми характеристиками могут быть разделены на разные фракции по мере их элюирования из колонки путем увеличения концентрации соли в элюирующем буфере [7].

Ионообменная колонка — одна из технологий, использующих принцип ионообменной хроматографии [33]. Он использует мембранно-абсорбционную технологию в качестве хроматографической матрицы для разделения белков. Мембранные абсорбенты в колоннах изготовлены на основе стабилизированной целлюлозы с высокопористой структурой, которая обеспечивает легкий доступ белков к заряженной поверхности.Взаимодействие между молекулами и активными центрами на мембране происходит в конвективных сквозных порах. Следовательно, адсорбционные мембраны могут поддерживать высокую эффективность при очистке больших биомолекул с низкой диффузией [33].

3.2.2. Гель-фильтрационная хроматография

Гель-фильтрационная хроматография, также называемая эксклюзионной или гель-проникающей хроматографией, разделяет белки в соответствии с размером и формой молекул, при этом молекулы не связываются с хроматографической средой [39].Это процесс, при котором большие молекулы проходят через колонку быстрее, чем маленькие. Маленькие молекулы могут проникать во все крошечные отверстия матрицы и получать доступ к большей части столбца. Белки небольшого размера будут проходить через эти отверстия, и им потребуется больше времени, чтобы вытечь из колонки, по сравнению с белками большого размера, которые не могут попасть в эти отверстия, но выходят прямо из колонки через пустое пространство в колонке [4, 7].

Набор для гель-фильтрационной хроматографии использует принцип гель-фильтрационной хроматографии [40].Целевой образец наносят поверх столбца, который содержит пористые шарики, пример матрицы в столбце. Молекулы разделяются, когда молекулы проходят через столбик пористых шариков. Разделение молекул можно разделить на три основных типа: полное исключение, избирательная проницаемость и общий предел проницаемости. Полное исключение — это та часть, из-за которой большие молекулы не могут проникать в поры и быстро элюироваться. Для области избирательного проникновения промежуточные молекулы могут проникать в поры и могут иметь среднее время пребывания в частицах в зависимости от их размера и формы.Что касается предела общего проникновения, то маленькие молекулы имеют наибольшее время пребывания после того, как они попадают в поры колонки [40]. Преимущество хроматографии на основе гель-фильтрации заключается в том, что она подходит для биомолекул, которые могут быть чувствительны к изменениям pH, концентрации ионов металлов и суровым условиям окружающей среды [39].

3.2.3. Аффинная хроматография

Аффинная хроматография зависит от конкретного взаимодействия между белком и твердой фазой, которое влияет на отделение от примесей.Он состоит из тех же этапов, что и ионообменная хроматография [38]. Он позволяет очищать белок на основе его биологической функции или индивидуальной химической структуры [41]. Белки, которые имеют высокое сродство к определенным химическим группам, таким как лиганды, будут ковалентно присоединяться и связываться с матрицей столбца, в то время как другие белки проходят через столбец [38]. Электростатические или гидрофобные взаимодействия, силы Ван-дер-Ваальса и водородные связи — это биологические взаимодействия между лигандами и белками-мишенями [41].Связанные белки будут элюированы из колонки раствором, содержащим высокую концентрацию растворимой формы лиганда [36].

Биоспецифический лиганд, который может ковалентно присоединяться к хроматографической матрице, является одним из требований для успешной аффинной очистки. Связывание между лигандом и молекулами белка-мишени должно быть обратимым, чтобы белки могли быть удалены в активной форме [41]. После смывания загрязнителей связанный лиганд должен сохранять свое специфическое сродство связывания с целевыми белками.Некоторые примеры биологических взаимодействий, которые обычно используются в аффинной хроматографии, перечислены в таблице 1 (см. [41]).

6

Типы лигандов Целевые молекулы

Фермент Субстратный аналог
Лектин Полисахарид, гликопротеин, рецептор клеточной поверхности, клетка
Нуклеиновая кислота Комплементарная последовательность оснований, гистоны, полимераза нуклеиновой кислоты, белок, связывающий нуклеиновую кислоту
Гормон-носитель Рецептор витамина
Глутатион Слитые белки глутатион-S-трансферазы или GST
Ионы металлов Слитые белки Poly (his), нативные белки с гистидином, цистеином и / или остатками триптофана на их поверхности 9049
900 04 Хроматографическое разделение по дифференциальному сродству к лигандам, иммобилизованным на гранулированной пористой смоле, является фундаментальным для исследования белков [42].На рынок был представлен полный набор, который содержит шариковые колонки с аффинной смолой, основанный на принципе аффинной хроматографии [42]. Аффинную смолу можно использовать в формате периодической или микроцентрифужной спин-колонки в зависимости от масштаба и типа проводимого эксперимента. Кроме того, он может быть упакован в какую-либо более крупную гравитационную колонну [42].

3.2.4. Гель-электрофорез

Гель-электрофорез — это метод разделения белков в соответствии с их размером и зарядовыми свойствами.Частично очищенный белок из хроматографических разделений можно дополнительно очистить с помощью неденатурирующего электрофореза в полиакриламидном геле (PAGE) или электрофореза в нативном геле [4]. В PAGE белки управляются приложенным током через гелеобразную матрицу [43]. Движение белка через этот гель зависит от плотности заряда (заряда на единицу массы) молекул. Молекулы с зарядом высокой плотности быстро мигрируют. Размер и форма белка — еще два важных фактора, влияющих на фракционирование в ПААГ [43].Размер пор акриламида играет роль молекулярного сита для разделения белков разного размера [4]. Чем больше белок, тем медленнее он мигрирует, поскольку он больше запутывается в геле [43]. Форма также является одним из факторов, поскольку компактные глобулярные белки перемещаются быстрее, чем удлиненные волокнистые белки сопоставимой молекулярной массы [43].

ПААГ обычно проводят в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН) [44]. Белок, обработанный SDS, обычно устраняет вторичную, третичную и четвертичную структуру белка [4, 7].Белки разворачиваются в подобную стержнеобразную форму из-за электростатического отталкивания между связанными молекулами SDS. Количество молекул SDS, которые связываются с белком, приблизительно пропорционально молекулярной массе белка (около 1,4 г SDS / г белка) [43]. Каждый вид белка имеет эквивалентную плотность заряда и проходит через гель с одинаковой силой [43]. Кроме того, PAGE может минимизировать денатурацию белков. Многие белки все еще сохраняют свою биологическую активность после выполнения PAGE [7].Однако более крупные белки удерживаются в большей степени, чем более мелкие белки, потому что полиакриламид сильно сшит [43]. Следовательно, белки разделяются с помощью SDS-PAGE на основе их молекулярной массы. SDS-PAGE можно использовать для определения молекулярной массы смеси белков путем сравнения положений полос с полосами, продуцируемыми белками известного размера [43]. SDS, используемый в электрофорезе, разрешает смесь белков в соответствии с длиной отдельных полипептидных цепей [7].

Метод, называемый двумерным гель-электрофорезом, был разработан Патриком О’Фарреллом в 1975 году. Он используется для фракционирования сложных смесей белков с помощью двух различных методов — изоэлектрического фокусирования и SDS-PAGE [43]. Сначала белки разделяются в соответствии с их изоэлектрической точкой в ​​трубчатом геле. После этого разделения гель удаляют и кладут на пластину полиакриламида, насыщенного SDS. Белки перемещаются в пластинчатый гель и разделяются в соответствии с их молекулярной массой [43].Двумерный гель-электрофорез подходит для обнаружения изменений белков, присутствующих в клетке в различных условиях, на разных стадиях развития или клеточного цикла или в разных организмах [43].

3.2.5. Юго-западный блоттинг (иммуноблоттинг)

Юго-западный блоттинг — это метод, который используется для выделения, идентификации и характеристики ДНК-связывающих белков по их способности связываться со специфическими олигонуклеотидными зондами [44, 45]. Многие ДНК-связывающие белки в клетке необходимо выделить индивидуально и охарактеризовать, чтобы определить функцию гена [44].Этот метод состоит из трех этапов. Сначала экстракты ядерных белков разделяют электрофорезом в SDS-PAGE. Затем разделенные белки переносятся на нитроцеллюлозный фильтр, поливинилидендифторид (ПВДФ) или катионную нейлоновую мембрану [12]. Затем фильтр будет инкубирован с олигонуклеотидными зондами для анализа адсорбированных белков [44, 45]. Однако этот метод сталкивается с такими проблемами, как необходимость в больших количествах ядерных белков (обычно 50–100 мг), деградация белка во время выделения, трудности в достижении эффективного электрофоретического разделения и переноса белков в широком диапазоне молекулярных размеров [45]. .

3.3. Экстракция биомолекул «все в одном»

Как правило, доступные на рынке методы экстракции или очистки или наборы позволяют извлекать только один тип нуклеиновой кислоты, ДНК или РНК, или белка из целевого организма. Когда клеточный материал ограничен, желательно извлекать ДНК, РНК и белок из одного источника.

Вариант одностадийного метода выделения Хомчинского и Сакки (1987), в котором гомогенат тицианата гуанидиния экстрагируется фенолом: хлороформом при пониженном pH, позволяет получать ДНК, РНК и белок из ткани или клеток.Этот метод включает лизис клеток изотиоцианатом гуанидина и фенолом в однофазном растворе. Вторая фаза образуется после добавления хлороформа, где ДНК и белки экстрагируются, оставляя РНК в водном супернатанте. ДНК и белки могут быть выделены из органической фазы осаждением этанолом или изопропанолом, а РНК осаждена из водной фазы изопропанолом [15].

В настоящее время на рынке представлено несколько комплектов для экстракции «все в одном».Например, набор для экстракции на основе колонки, предназначенный для одновременной очистки геномной ДНК, общей РНК и общего белка из одного биологического образца без использования токсичных веществ, таких как фенол или хлороформ, и осаждения спиртом [46]. Он совместим с небольшими количествами широкого спектра культивируемых клеток и собранных тканей животного и человеческого происхождения. Целевой образец не нужно разделять на 3 части перед очисткой ДНК, РНК и белка [46].

Набор для экстракции 3-в-1 на основе раствора, доступный на рынке, является еще одним примером набора для неорганических растворов, который может извлекать и очищать ДНК, РНК и белок из различных организмов любых типов и размеров [47] .Его протокол из трех простых шагов, который занимает от 15 до 30 минут, обеспечивает быстрый и простой способ извлечения различных биомолекул. Следовательно, можно ожидать более высокого выхода, поскольку меньшее количество шагов приводит к меньшим потерям [47].

3.4. Автоматическая система экстракции

Автоматизированная система экстракции, большая, дорогая и сложная аппаратура, разработанная для высокопроизводительной обработки образцов, помогла упростить выделение нуклеиновых кислот [48]. Эта система была разработана для средних и крупных лабораторий, количество которых выросло за последние годы [49].Автоматизация процесса экстракции нуклеиновых кислот потенциально выгодна по ряду причин, в том числе для сокращения рабочего времени, снижения затрат на рабочую силу, повышения безопасности труда, а также дает возможность повышения воспроизводимости и качества результатов [50]. Кроме того, это ключевое решение для повышения эффективности лаборатории [48] .

В клинических лабораториях очистка высококачественных биомолекул, таких как ДНК, РНК и белок, от различных исходных материалов будет использоваться в последующих испытаниях.Очень важно получить очищенные образцы достаточного качества и чистоты [48]. Следовательно, автоматизированные экстракции должны быть более последовательными и воспроизводимыми. Скорость, точность и надежность всего процесса экстракции должны быть максимальными и в то же время минимизировать риск перекрестного загрязнения [49]. Необходимо найти решение для повышения эффективности пробоподготовки без ущерба для качества. Возможность перекрестного загрязнения должна быть уменьшена, и системы должны быть приспособлены для отслеживания образцов со штрих-кодом [51].

Система экстракции, доступная на рынке, удовлетворяет указанным выше требованиям. Он предлагает лабораториям судебной экспертизы быструю и надежную обработку образцов наряду с высококачественной автоматической очисткой ДНК [52]. Это система обработки парамагнитных частиц для обработки проб и обеспечения постоянного выхода и чистоты, поскольку нет обнаруживаемого перекрестного загрязнения между пробами. Весь процесс экстракции занимает около 20 минут от начала до конца, потому что нужно всего три простых шага: добавить жидкие образцы в картридж с реактивами; поместите картриджи с реактивами в аппарат; нажмите кнопку Пуск.В конце процесса ДНК элюируется в буфер для элюции [52].

Был представлен еще один пример автоматизированной системы, которая является гибкой и эффективной для экстракции нуклеиновых кислот и белков [53]. С помощью этой системы можно обрабатывать различные исходные материалы, которые предназначены для малых и средних проб. Он использовал функционализированные на поверхности парамагнитные частицы для адсорбции выделенной нуклеиновой кислоты [53]. Гибкость этой системы позволяет извлекать нуклеиновую кислоту из двенадцати образцов одновременно.Процесс экстракции занимает от 20 до 40 минут в зависимости от области применения. Наборы, оптимизированные для этой системы, могут извлекать геномную ДНК, клеточную РНК, вирусные или бактериальные нуклеиновые кислоты [53].

4. Возможное направление в будущем

Извлечение биомолекул — это первый шаг, который необходимо выполнить для последующего анализа или процесса манипуляции. Требование обращения с жидкостью — самый сложный аспект. Следовательно, любая автоматическая система должна включать в себя не только автоматическое оборудование для каждой стадии экстракции, но и оборудование для автоматизации передачи жидкости между машинами.Автоматизация помогла увеличить производительность и надежность процесса, но эти системы по-прежнему предназначены для использования только в лабораторных условиях. Некоторые из доступных на рынке систем экстракции нуклеиновых кислот имеют большие размеры и требуют ручной предварительной обработки лабораторным персоналом с техническими знаниями [54]. Таким образом, роботизированные рабочие станции для экстракции нуклеиновых кислот должны выполнять настоящую автоматизацию «от руки», что означает полностью автоматизированный процесс [49].Комбинация универсального раствора и метода экстракции биомолекул с полностью автоматизированной системой экстракции может стать перспективным изобретением в будущем. Очистка ДНК, РНК или белка от различных организмов может выполняться одновременно с использованием этого типа экстракционной системы с помощью всего лишь одного метода экстракции.

Часто бывает неудобно отправлять образец целевых биомолекул животного, растения или даже клинический образец в лабораторию для его извлечения и анализа [54].Образцы, особенно клинические образцы, такие как кровь, необходимо охладить и передать в ближайшую лабораторию для извлечения и анализа. Следовательно, портативная система экстракции биомолекул, которая дает несколько преимуществ, таких как сокращение трудозатрат, уменьшение количества отходов и повышение скорости процесса экстракции, может быть потенциальной разработкой в ​​будущем [54]. Комбинация портативной системы экстракции с анализатором ДНК, РНК или белков может быть создана в будущем, чтобы помочь исследователям сократить рабочее время и повысить эффективность работы.

Дальнейшее совершенствование миниатюризации станет будущей тенденцией роботизированной автоматизации в лаборатории [28]. Многие клинические лаборатории проводят анализ рабочего процесса и обнаруживают, что системы меньшего размера с меньшей пропускной способностью больше соответствуют рабочей нагрузке клинических лабораторий. Кроме того, эта система автоматизации может быть реализована с относительно низкими затратами, что сокращает время выполнения работ, а также снижает трудозатраты [55].

5. Заключение

Поскольку первое выделение ДНК было успешно выполнено Фридрихом Мишером в 1869 году, а первоначальная экстракция ДНК была разработана Мезельсоном и Шталем в 1958 году на основе стратегий центрифугирования в градиенте плотности, было разработано множество методов очистки биомолекул.От экстракции тиоцианат-фенол-хлороформ гуанидиния до колоночной технологии, которая широко используется при экстракции ДНК и РНК, и метода очистки хроматографии до иммуноблоттинга, который используется для экстракции белков, экстракция биомолекул помогла исследователям и ученым в манипулировании последующим анализом молекулярной биологии, чтобы чтобы лучше понимать биологические материалы Земли.

Автоматизированная система экстракции нуклеиновых кислот была разработана благодаря влиянию быстрого роста технологий автоматизации в настоящее время.Автоматизация процесса экстракции нуклеиновых кислот потенциально выгодна по ряду причин, в том числе для сокращения рабочего времени, снижения затрат на рабочую силу, повышения безопасности труда и в то же время дает возможность повышения воспроизводимости и качества результатов. Однако устранение недостатков некоторых инструментов необходимо проводить постоянно. Между тем, универсальная система экстракции биомолекул или изобретение миниатюрной и портативной системы экстракции может стать перспективным развитием в будущем.

Концепция: как это работает | Обучение пациентов

Чтобы забеременеть, необходимо выполнить следующие действия:

Эти шаги описаны ниже.

Транспортировка спермы

Транспортировка спермы зависит от нескольких факторов:

  • Сперма должна быть способна продвигаться через среду женского влагалища и шейки матки.
  • Эта среда, которая находится под циклическим гормональным контролем, должна быть благоприятной для приема сперматозоидов без их разрушения.
  • Сперма должна обладать способностью преобразовываться в форму, способную проникать через клеточную мембрану яйцеклетки (капситация).

После эякуляции сперма образует гель, который защищает ее от кислой среды влагалища. Гель разжижается в течение 20-30 минут ферментами предстательной железы. Это разжижение важно для высвобождения сперматозоидов, поэтому может произойти транспортировка. Семенная плазма остается во влагалище.

Защищенные сперматозоиды с наибольшей подвижностью проходят через слои цервикальной слизи, которые охраняют вход в матку.Во время овуляции этот барьер становится тоньше и меняет кислотность, создавая более дружелюбную среду для сперматозоидов. Слизь шейки матки действует как резервуар для длительного выживания сперматозоидов.

После того, как сперматозоид попал в матку, сокращение продвигает сперму вверх по фаллопиевым трубам. Первые сперматозоиды попадают в пробирки через несколько минут после эякуляции. Однако первая сперма, скорее всего, не является оплодотворяющей спермой. Подвижные сперматозоиды могут сохраняться в женских половых путях до пяти дней.

Транспорт для яиц

Транспортировка яйца начинается при овуляции и заканчивается, когда яйцо достигает матки. После овуляции бахромчатый или похожий на палец конец маточной трубы проходит над яичником. Адгезивные участки на ресничках, которые расположены на поверхности фимбрий, отвечают за захват и перемещение яиц в трубку. Реснички внутри трубки и мышечные сокращения, возникающие в результате движения яйца, создают движение вперед. Транспортировка по трубке занимает около 30 часов.

Такие состояния, как инфекции органов малого таза и эндометриоз, могут необратимо нарушить функцию маточных труб из-за рубцевания или повреждения фимбрий.

Оплодотворение и развитие эмбриона

После овуляции яйцеклетка способна к оплодотворению только от 12 до 24 часов. Контакт между яйцеклеткой и спермой носит случайный характер.

Как только яйцо достигает определенного участка трубки, называемого ампулярно-истмическим переходом, оно остается в покое еще на 30 часов.В этой части трубки происходит оплодотворение — соединение сперматозоидов с яйцеклеткой. Затем оплодотворенная яйцеклетка начинает быстро спускаться в матку. Период покоя в трубке, по-видимому, необходим для полного развития оплодотворенной яйцеклетки и для подготовки матки к приему яйца.

Дефекты маточной трубы могут нарушить транспорт и увеличить риск трубной беременности, также называемой внематочной беременностью.

Оболочка, окружающая яйцо, называемая zona pellucida, выполняет две основные функции при оплодотворении.Во-первых, блестящая оболочка содержит рецепторы сперматозоидов, специфичные для человеческой спермы. Во-вторых, после проникновения сперматозоидов мембрана становится непроницаемой для проникновения других сперматозоидов.

После проникновения серия событий подготовила почву для первого деления клеток. Одноклеточный зародыш называется зиготой. В течение следующих семи дней человеческий эмбрион претерпевает множественные деления клеток в процессе, называемом митозом. В конце этого переходного периода эмбрион становится массой очень организованных клеток, называемой бластоцистой.Сейчас считается, что по мере взросления женщины этот процесс раннего развития эмбриона все больше нарушается из-за ухудшения качества яйцеклеток.

Имплантация

Когда эмбрион достигает стадии бластоцисты, примерно через пять-шесть дней после оплодотворения, он вылупляется из блестящей оболочки и начинает процесс имплантации в матку.

В природе 50 процентов всех оплодотворенных яйцеклеток теряются до того, как у женщины наступит менструальный цикл. В процессе экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) эмбрион также может начать развиваться, но не дожить до стадии бластоцисты — первой стадии, на которой эти клетки, которым суждено стать плодом, отделяются от тех, которые станут плацентой.Бластоциста может имплантироваться, но не расти, или бластоциста может расти, но перестать развиваться до истечения двух недель, когда беременность может быть обнаружена.

Posted in Разное

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.