Бондер для ногтей

Бондер: особенности и назначение

Прозрачная жидкость во флакончике, похожем на обычный лак для ногтей, имеет довольно сложный состав. В него входят: органические растворители, спирты, смолы, парафин, пластификатор, полимерный клей, искусственная клетчатка.

Уже по списку веществ понятно назначение бондера для ногтей. Эта гелеобразная субстанция склеивает все слои маникюра. Бондер наносят под шеллаки, биогели, акриловые пластины. Его можно использовать в многослойном нейл-арте с обычными лаками или накладывать как самостоятельное покрытие.

Бондер выполняет в маникюре ту же роль, что цемент в строительстве. Без этого средства искусственные ногти будут выглядеть неаккуратно, и через 2-3 дня отслоятся. Шеллак, выполненный с бондером, гораздо дольше сохраняется без сколов.

Бондер: отличия от праймера

В правилах выполнения любого сложного маникюра упоминаются праймер и бондер. Ни одно из этих веществ невозможно исключить. Нельзя также заменять одно средство другим. Они различаются по составу и функциям.

• Праймер – это самый нижний слой. Он создаёт правильный pH-баланс, выравнивает ногтевую пластину, предохраняет её от химического воздействия. Если нанести бондер на ногти, не покрытые праймером, маникюр будет неровным и нестойким. Праймер подсыхает быстрее, чем обычный лак, без специальных приспособлений.
• Бондер фиксирует декоративное покрытие к ногтю. Он густой и липкий, не сохнет самостоятельно. Замена бондера клеем для типсов или праймером приводит к быстрому разрушению маникюра.

Правила применения бондера для ногтей

Существует несколько вариантов использования средства. Классический способ (под гелевые ногти):

• бондер наносят на покрытый праймером ноготь, ведя кисточку от себя;
• промокают излишки гладким спонжем;
• сушат под УФ-лампой 2 мин.

Бондер можно применять в качестве клея под типсы. В этом случае, его не сушат в лампе.

Для шеллак-системы есть особые нюансы. Здесь бондер наносят очень тонким слоем. Предпочтительно втереть его кончиком кисточки и спонжем. После сушки лампой ногти должны приобрести лёгкую матовость. Затем наносят шеллак.

Важно подобрать тип бондера правильно. Для здоровых ногтевых пластин подходит бескислотный вариант. Он сочетается с любой маникюрной системой. Если же ногти сильно сточены и истощены частыми химическими процедурами, лучше применять кислотный бондер. Он имеет желтый оттенок, поэтому сверху наносят только непрозрачные лаки.

В магазине TverNails представлены бондеры от лучших изготовителей – Ibd, Irisk Professional, RuNail, Emi и др. 

Читайте также:

Почему не сохнет гель-лак в лампе: возможные причины, варианты решения, отзывы

И у дипломированных мастеров, и у домашних умелиц, которые делают гелевый маникюр только себе, порой просто опускаются руки. Вроде бы все хорошо: куплены дорогое оборудование и качественные материалы, досконально изучена технология. Но возникает вопрос о том, почему не сохнет гель-лак в лампе. Все старания, вся аккуратная работа идет насмарку, поскольку покрытие либо сразу же, либо через несколько часов вздувается пузырями.

Возможно, стоит просто бросить любимое дело? Наш ответ – нет! Нужно искать причины проблемы и устранять их.

Загрязнение лампы

Чистые инструменты – это не только визитная карточка мастера и обеспечение стерильных условий. Грязная лампа может стать причиной ослабления эффекта полимеризации.

Поэтому протирать лампу необходимо ежедневно следующими жидкостями:

• Жидкостью для снятия липкого слоя при средней загрязнённости;
• Жидкостью для снятия гель лака при повышенной загрязнённости.

Жидкость для снятия липкого слоя

Насыщенный оттенок лака

Столкнувшись с проблемой, когда гель лак становится мягким после сушки, прочитайте инструкцию аппарата. Возможно, существующая мощность не предназначена для сушки полигеля или гель материала.

Обратите внимание на длительность высыхания продукта, заниженное время лучше увеличить до полной полимеризации.

Лампа не подходит типу гель лака

Чаще всего, тип лампы для просушки указан специальной маркировкой на баночке лака (UV для ультрафиолета, LED для LED-лампы). Последнее поколение гелевых покрытий выпускает лаки, которые могут полимеризоваться в обоих типах ламп.

Если же способ полимеризации лака не указан, то при покупке изделия об этом стоит расспросить продавца.

Важно! В LED-лампах светодиоды не перегорают и не теряют своей мощности, поэтому, если выбранное покрытие не требует использования УФ лампы, лучше отдать предпочтение именно лампе LED.

Надо ли сушить базу

Базу сушить надо обязательно, в отличие от праймера. В ее составе есть полимеры, каучук, другие светоотверждаемые компоненты, иногда силикон. Средство застывает только в лампе в течение 2 минут, если она ультрафиолетовая, и за 30-60 секунд в LED-устройстве. При сокращении времени выдерживания средства под излучением оно плохо просыхает. И потом могут возникнуть проблемы:

• цветной гель-лак не удастся нанести ровно, а при полимеризации он иногда сморщивается;
• покрытие не продержится до коррекции, может отойти целиком задолго до истечения 2-3 недель;
• отслойки также появляются местами, бывают малозаметными, но высок риск, что под ними заведется грибок, или в полость попадут бактерии.

Базу наносят непосредственно на просохший праймер. Иногда руку приходится помещать в лампу после ее использования для каждого ногтя, а не всех сразу. Так делают неопытные мастера или те, у которых средство жидкой консистенции. В обоих случаях оно быстро растекается, может попасть на кутикулу. Поэтому лучше сушить каждый ноготь отдельно.

Если базу не заполимеризовать под лампой, она так и останется липкой. Наносить на нее гель-лак будет нельзя, он просто стечет, смешавшись с прозрачной субстанцией. Но сушить базу следует после использования ее второго слоя. Первый наносят тонко, втирающими движениями. А второй –каплей, выравнивая ногтевую пластину.

Вышел срок годности лака

Не стоит пренебрегать сроком годности, указанным на дне флакона или на этикетке. Как правило, срок годности лака составляет от 1 до 3 лет с момента открытия флакона.

Важно! Часто лак может просто застояться или стать густым, если долго его не использовать, от этого он также долго не сохнет. В таком случае следует сначала проверить, не истёк ли его срок годности, а затем «реанимировать» его путём перекатывания в ладонях. Такой лак не рекомендуется взбалтывать.

Все гель лаки имеют ограниченный срок годности

Отслойки у кутикулы и основания

Избежать неприятных сюрпризов можно, проверив сроки годности средств перед их использованием. Гель-лак теряет свои свойства со временем, особенно, если он хранится в ненадлежащих условиях. Вас должна насторожить слишком густая текстура и наличие комков в баночке. Перед применением флакон со средством необходимо взболтать – пигменты со временем оседают на дно. Противопоказано хранить гель-лаки под прямым солнечным светом, например, на подоконнике. Лучше поместить их в специально отведенный шкафчик или коробку. Применение испорченных материалов чревато отслойками у основания и кутикулы.

Но даже самые качественные и свежие средства не гарантируют безупречный результат, если вы не удалили птеригий в начале процедуры. Делать это нужно даже при европейском необрезном маникюре. Очистить зону кутикулы можно с помощью размягчающих составов и апельсиновой палочки. Классический способ – использование ножниц и кусачек для кутикулы, а также фрез и аппарата. Затем ногтевую пластину необходимо просушить с помощью дегидратора и качественно обезжирить. Обязательно используйте праймер – без него обеспечить надежное сцепление не удастся. Поверх праймера можно наносить бондер – эти два продукта хорошо дополняют друг друга.

Неправильное хранение лака

Данный продукт особенно чувствителен к свету, поэтому для правильного хранения гель лака необходимо следовать правилам:

• Всегда закрывать флакончик с лаком, чтобы избежать вредного воздействия как светаУф лампы, так и солнечного света. Воздействие света может спровоцировать изменения в структуре продукта. Именно поэтому большинство производителей выпускают лаки в тёмных бутылочках;
• Делать маникюр при искусственном свете, чтобы защитить лак от вредного воздействия дневного света;
• Хранить лаки в тёмных местах;
• Избегать перепада температур. Хранить лак в месте, которое гарантирует постоянную температуру в 26 градусов. При нарушении температурного режима значительно сокращается срок действия лака.

Кроме того, гель лак не любит встрясок. При встряске во флаконе образуются пузырьки воздуха, которые являются причиной плохого качества поверхности.

Как сушить праймер, когда наносить

Сушить праймер следует просто на воздухе. Чтобы спиртовые компоненты жидкости быстрее испарились, необходимо положить руку на стол ладонью вниз. Пальцы при этом лучше держать разомкнутыми. И нужно постараться не заваливать руку набок. Не стоит также трясти пальцами. Если жидкости нанесено лишком много, от этого она может растечься на ногтях неравномерно.

Праймер используют после того, как выполнен гигиенический маникюр:

• ногтям придана форма;
• убрана отросшая часть кутикулы, вычищен птеригий;
• ошлифована кожа вокруг ногтей;
• поверхности обработаны бафом, их протерли обезжиривателем.

Нанесение праймера – следующий шаг. Его мажут на чистые ноготки, то есть на их поверхностях не должно быть опила и частиц кожи.

Смотрите на виедо о том, что такое праймер, как его наносить и сушить:

Неправильная обработка ногтя

Часто мастера нарушают порядок подготовки ногтевой пластины к маникюру, что приводит к тому, что гель лак не сохнет в лампе.

Порядок обработки ногтя следующий:

• Обработать ногти бафом, который создаст шероховатую поверхность для нанесения лака. Обрабатывать ноготь полировщиком – это большая ошибка, так как слишком гладкая поверхность ногтевой пластины препятствует равномерному нанесению лака и, следовательно, затрудняет его полимеризацию;
• Нанести масло для кутикулы после нанесения лака. Гель лак требует сухой и слегка шероховатой поверхности. Масло для кутикулы делает ноготь жирным, что создаёт дополнительный слой между лаком и ногтем.

Причины отслоек у боковых валиков

Материал может отходить в зоне боковых валиков – это случается реже и зачастую обусловлено недостаточной эластичностью. Сколы и трещины во многом зависят от формы и длины ногтей – на квадратной и длинной пластине они образуются чаще. Избежать этого можно с помощью акриловой пудры, созданной специально для укрепления. Она наносится на мокрый состав, высушивается в лампе, затем излишки удаляются щеточкой и все покрывается базой. Пудра образует дополнительную защиту от сколов и трещин.

Важно также правильно подобрать форму – иногда оптимальный вариант может расходиться с желанием клиента. Задача мастера – убедить в необходимости более короткой длины или округлой формы, которая устойчивее к нагрузкам и механическим повреждениям. Практика и профессионализм в сочетании с качественными материалами – гарантия положительного результата.

Не тот лак

Сегодня просторы интернета изобилуют предложениями различных брендов гель лаков разных ценовых категорий. В этом разнообразии легко ошибиться и купить базу гель лака плохого качества, которая не сохнет даже при строгом соблюдении всех правил. Поэтому перед выбором гель лака следует внимательно изучить отзывы покупателей на продукт, а также репутацию самой фирмы-производителя.

Не стоит также экономить на материалах и инструментах для маникюра. При их выборе лучше всего опираться на качество продукции. Материалы хорошего качества облегчают работу мастера, а соблюдение вышеперечисленных условий способствует не только улучшению полимеризации, но и гарантируют более долгий маникюр.

UV/LED лампа: польза и вред

Казалось бы, УФ-лампа лишена недостатков, ведь на 100 % справляется со своей функцией – полимеризацией гель-лака. Но использование прибора окружено домыслами о его вреде. Многие девушки до сих пор не решаются на такой маникюр из-за недоверия и незнания. В первую очередь, их пугает сама фраза «ультрафиолетовое излучение». Ему приписывают различные кожные заболевания вплоть до онкологии. Доля правды в этом есть – ультрафиолет и в самом деле приносит вред организму, но только в больших дозах. Степень его воздействия в таких лампах крайне низкая, и никак не сказывается на здоровье. Современные производители позаботились о том, чтобы приборы работали не только эффективно, но и абсолютно безопасно. Перед использованием ознакомьтесь с инструкцией – там всегда указана допустимая продолжительность процедуры.

Главное – отдавать предпочтение качественной продукции. При выборе обязательно обращайте внимание на сертификацию оборудования. Если таковой не имеется, лучше отказаться от покупки. Лампы кустарного производства могут навредить ногтевой пластине и коже рук, вызвать раздражение или аллергическую реакцию. Сертифицированные товары европейских брендов можно найти в интернет-магазине «Роял Гель». Нельзя использовать гель-лак для клиентов с индивидуальной непереносимостью ультрафиолета, хотя такое случается крайне редко. На нее указывает зуд и покраснения кожи после сушки в лампе. Как правило, люди знают о такой особенности своего организма, ведь подобная реакция происходит и на солнце.

В норме процедура должна проходить без дискомфорта и болевых ощущений. Обладатели истонченной ногтевой пластины могут почувствовать небольшое жжение в области ногтей, которое проходит через несколько секунд. Оно обусловлено выделением тепла во время полимеризации базы. Этот побочный эффект никак не сказывается на здоровье и беспокоит далеко не всех клиентов. Чтобы его минимизировать, следует наносить базу тонким слоем. Чем толще слой, тем больше тепла выделяется и больше вероятность неприятных ощущений. Важно соблюдать технологию, и мифы о «минусах» UV-ламп не коснутся ни вас, ни ваших клиентов.

Долгая процедура маникюра

Уход за руками требует времени. Очень обидно, когда оно уходит впустую только потому, что маникюр нужно начинать сначала, так как ногти выглядят неопрятно, на них появились пузырьки, рисунок смазан, декоративное покрытие лежит неровно.

Все это может случиться, если технология проведения процедуры нарушена, или ее закончить поторопились. Сколько сохнет лак для ногтей и возможно ли ускорить процесс, на который – почему-то – постоянно не хватает терпения?

Содержание:

Почему долго сохнет обычный лак?

• В составе меньше закрепителя, чем требуется, то есть качество не очень высокое;
• Была нарушена технология окраски ногтей – их предварительно не обезжирили;
• Слой лака очень толстый;
• Срок годности у косметического средства истек, или его неправильно хранили.

Что делать, чтобы ускорить процесс высыхания?

Перед наложением покрытия достаточно помыть руки с мылом и высушить, лак высохнет быстрее.

Наносить лак лучше плотной кисточкой с коротким ворсом, несколькими тонкими слоями. После нанесения каждого требуется дождаться его затвердения.

Через несколько минут после нанесения покрытия и схватывания последнего слоя, на ногти наносят слой любого растительного масла или окунают кончики пальцев в емкость с холодной водой. Можно подержать пальцы и под струей холодной воды, но от напора покрытие может смазаться.

Сохнет ли обычный лак в УФО лампе?

Да, если ее конструкция оборудована вентилятором. Можно обойтись даже без ультрафиолетового излучения, если имеется вентилятор – охлаждение потоком прохладного воздуха поможет покрытию быстрее застыть.

Только не следует махать руками, как крыльями, или направлять на ногти струю теплого воздуха из фена. Лак от этого течет, размягчается, на нем появляются пузырьки.

Что еще можно делать, если лак не сохнет? Купить специальное средство, ускоряющее высыхание лака. Это может быть специальный лак или спрей, какой-то закрепитель.

К выбору лака требуется ответственный подход: не приобретайте дешевые средства и отбраковывайте тюбики, в которых красящий состав начинает густеть.

Для покрытия ногтей в настоящее время часто применяется гель-лак. Обычно такое покрытие сушат с помощью специальной лампы. Но бывает и так, что приобретена лампа, а ногти остаются липкими, и ровного маникюра добиться практически невозможно.

Почему не сохнет гель-лак в лампе?

Существуют различные виды покрытий этого типа. Лампа нужна только для светочувствительных видов. Но некоторые сорта гелей будут высыхать только тогда, когда его нанесли на специальный дисперсный слой.

Если этого слоя не нанесли, в лампе можно держать кончики пальцев долгое время, но гель останется липким. Он поляризуется изнутри, и верхний слой лака не перестанет клеиться. В этом случае нужно приобрести специальную жидкость для удаления липкого слоя и его убрать. Останется твердый ноготок.

Как можно видеть, без посещения магазина косметики обойтись невозможно. Что придется приобрести: дисперсный слой, который обеспечивает надежное высыхание изнутри, или покрытие-катализатор. Катализатор продается расфасованным в тюбики или в виде спрея. Его основное составляющее – цианакрилат.

В некоторых случаях покрытие размазалось потому, что лампа недостаточно мощная. Например, в лампе УФО мощностью 9 Вт, кончики пальцев нужно держать не менее 2 минут, а мощностью 36 Вт – всего 30 секунд.

Также существуют гели-лаки, которые сохнут без лампы.

Это, как уже упоминалось, средства, для отвердения которых необходим катализатор, и новейшие гели – для них достаточно в качестве закрепителя применить холодную воду.

Сколько сохнет гель-лак в холодной воде, без лампы?

Если его правильно нанесли – то есть, обезжирив ногти и тонким слоем – то максимум 7 минут. Нельзя сушить покрытие под проточной струей. Нужно налить воду в емкость, кинуть туда несколько кубиков льда, и аккуратно опустить в жидкость кончики пальцев.

Одним из самых безвредных декоративных покрытий считается акриловый лак.

Он защищает ногтевые пластины от неблагоприятных внешних воздействий, они перестают ломаться, меньше слоятся. В этом действии акрила можно убедиться на практике. Но!!!

Несмотря на то, что в этом средстве нет толуола и формальдегида, защита только механическая и осуществляется за счет свойств синтетического покрытия – никакого оздоравливающего воздействия акрил не оказывает.

Ногти будут выглядеть как здоровые, но здоровее не станут. Когда декоративное покрытие придется удалить, они опять вернутся к прежнему состоянию и даже их качество может ухудшиться – лак плотно покрывает ногтевую пластину, закрывая доступ воздуха.

Сколько сохнет акриловый лак? Достаточно быстро, если его правильно использовать.

Ногти обязательно следует обезжиривать, вымыв руки перед маникюром мылом, или протерев специальным веществом.

Акриловую массу наносят на ногти так:

• сначала кисточку обмакивают в специальную жидкость, называемую ликвидом, и тщательно отжимают;
• затем на конец кисти наносят шарик акриловой пудры;
• когда она пропитается, массу наносят на ногти тонким слоем;
• ждут, пока слой затвердеет;
• все неровности отшлифовываются специальной пилочкой, по застывшему слою;
• точно так же наносят 2-й тонкий слой – и этого достаточно.

Можно на акрил наносить декоративный лак – только сушить его следует потом естественным путем, или рисовать им.

Единственное неудобство маникюра с акрилом – покрытие требует корректировки при отрастании ногтевой пластины.

Ускорить высыхание любого лака поможет специальный закрепитель – его еще называют топовым лаком. Этот завершающий слой наносится после окончания маникюра через 2-3 минуты, он фиксирует верхний слой и дает возможность хорошо схватиться нижнему. В некоторых случаях на основное декоративное покрытие он оказывает неблагоприятное воздействие: цвет быстро тускнеет, поверхность растрескивается.

Маникюр будет держаться долго, если его делать правильно: выбирать лаки только высокого качества, вместе с лаками приобретать необходимые закрепители той же марки.

mjusli.ru

Что еще?

В фирменных нейл салонах мастера применяют особые профессиональные способы и средства сушки гель-лака без лампы, их можно приобрести и для дома в косметических магазинах, на сайтах интернет-магазинов.

Отметим некоторые из них:

• специальный спрей — обычно флакон с масляной жидкостью. Свежий маникюр необходимо полностью обрызгать этим составом и подождать 5-10 минут;
• особое масло для сушки. Продается в виде флакончика с пипеткой. На ногтевую пластину достаточно нанести каплю масла, распределить по всей поверхности, через 5 минут покрытие затвердеет;
• сушка вентилятором. Это вариант сушки специальным небольшим вентилятором, внутрь которого помещают пальцы с лаком «No Light gel», и они обдувается воздухом;
• сушка прозрачным лаком. Обычный лак наносят через две минуты после нанесения цветного гель-лака. Спустя 5 минут покрытие застынет, этот способ увеличивает стойкость маникюра.

Надо ли сушить топ в лампе

В последнее время в продаже появились особые разновидности топа: когда он наносится на ногти, он ускоряет процесс высыхания цветного покрытия. Он не нуждается в специальном просыхании (и об этом будет обязательно сказано в инструкции).

Важно! Топ-покрытия разных фирм содержат в своем составе разные химические вещества, поэтому осуществлять сушку нужно в строгом соответствии с инструкцией на флаконе.

Остальные виды завершающего покрытия можно сушить точно так же, как лак и базу, при помощи осветительных приборов различной мощности. Поскольку топ обычно наносится более тонким слоем, по сравнению с цветным покрытием, для его сушки можно использовать лампочки небольшой мощности. Оптимальный вариант – ультрафиолетовый светильник мощностью в 18 ватт или светодиодный прибор мощностью в 9 вт. В этом случае завершающий слой маникюра просохнет быстро и качественно, а ногти долго сохранят опрятный вид. Если топ содержит блестки, на просушку может понадобиться немного больше времени. Это время нужно обязательно выдержать, иначе структура блесток деформируется, и они утратят свою красоту.

что это такое и нужен ли он.

Зачем нужен праймер для гель-лака?

Праймер для гель-лака — что это такое, как он наносится на ногти? Многих женщин интересует такая информация. Сфера красоты и процедур ухода развивается изо дня в день. Ногтевая эстетика совершенствуется в технологиях и препаратах. Самой востребованной процедурой в салоне красоты остается искусственное моделирование ногтей, либо наращивание. Это довольно сложная и щепетильная процедура, требующая от мастера ногтевого сервиса профессионализма и четкого соблюдения всех этапов технологического процесса.

Конечный результат будет зависеть от многих составляющих:

1. качества материалов, используемых для наращивания гелем либо акрилом;
2. практических навыков и опыта работающего мастера;
3. правильного и поэтапного следования главным правилам при процедуре моделирования искусственных ногтей.

Можно точно сказать, что в любом деле основополагающим фактором для получения отличного и высокопрофессионального результата является правильная технология работы с материалами и подготовительный этап. Это корень любого дела, его стержень. Ведь если основа будет шаткой, все строение в итоге развалится. Так и в наращивании искусственных ногтей. Если нарушить технологию, то материал начнет давать отслойки, ногти будут отходить и ломаться.

Основы подготовительного этапа рук клиента и роль праймера в нем. Особое внимание перед началом работы мастер обращает на руки клиента, которому будет наращивать искусственный материал. Он осматривает кожу на наличие повреждений, а ногтевую пластину — на отсутствие грибковых образований. Когда руки мастера и клиента продезинфицированы, начинается самый важный этап подготовки ногтя к нанесению геля либо акрила. Если он видит, что у клиентки руки чересчур влажные, либо ногти слоятся, мягкие и слабые на вид, первое, что он обязан делать, -использовать праймер на подготовительном этапе наращивания.

Обязательно ли применять его на всех ногтях? Как было сказано выше, любой вид праймера применяется в зависимости от состояния ногтевой пластины у клиента. Ввиду того, что слабая и поврежденная ногтевая пластина будет обеспечивать слабое сцепление родного ногтя с искусственным материалом, и требуется использование праймера как главного связующего звена между ними.

В остальных случаях, отвечая на вопрос о том, нужен ли праймер в гелевом или акриловом наращиваниях, необходимо оценивать исходное состояние и здоровье ногтевой поверхности.

Этот шаг крайне важен для того, чтобы ногти крепко держались и эксплуатировались положенный им срок. Также необходимо помнить, что попадание кислотного праймера на типсу нежелательно, так как это приведет к ее повреждению. Это касается и покрытия гель-лаком.

Праймер для гель-лака — что это? Для чего нужен праймер для гель-лака? Лаковый маникюр уже давно перестал быть актуальным. Для тех, кто хочет воздержаться от наращивания искусственных ногтей, прочно вошел в обиход новый довольно удобный и практичный способ декорирования маникюра. Объединив в себе функцию лака для ногтей с прочностью гелевого материала, он завоевал сердца многих женщин. Особенно этот вид декора придется по вкусу любительницам всего натурального.

Это популярный гибрид гелевого покрытия и цветного лака для ногтей — гель-лак или, как его еще называют, шеллак. Возможно ли делать покрытие гель-лаком без праймера? Ситуация идет в полной аналогии с наращиванием, все действия и показания к использованию такие же.

Виды праймера и его технологические функции

Прежде чем перейти к детальному рассмотрению технологии нанесения и разновидностей праймера, необходимо упомянуть про обезживающее средство Nail Prep. Если последнего под рукой не оказалось, необходимо заменить его обычным аптечным спиртом либо спиртосодержащими салфетками. Одна из главных функций — обезжиривание, либо дегидрация, и антисептическая обработка поверхности ногтя. Поэтому спирт как нельзя лучше справится с этой задачей. Замененный вариант не совсем компенсирует все преимущества недостающего ингредиента, но на первый раз сгодится. Средства, которое способно заменить праймер, нет.

Существует 2 группы праймера, которые выбирают индивидуально под специфику ногтей:

1. бескислотный праймер;
2. кислотный праймер.

Бескислотный Праймер

Какой праймер лучше использовать при нанесении — кислотный или бескислотный? Гелевый маникюр будет держаться прекрасно при использовании бондера — бескислотного праймера.

Кислотный препарат больше подходит для акрилового наращивания ногтей. Это дополнительная страховка для клиентов с повышенной потливостью ладоней и для удобства работы мастера.
Кислотный праймер для гель-лака более агрессивен в сравнении с бескислотным вариантом. Его принцип действия прост — метакриловая кислота, содержащаяся в составе препарата, способствует поднятию чешуек ногтевой поверхности. Вследствие этого гель-лаку будет легче зацепиться и прочно взяться.

Кислотный Праймер

Это обеспечивает идеальную адгезию с ногтем. Этот способ показан всем, у кого слабые и ломкие ногтевые пластины. Это решение всех проблем. Так как в составе содержится кислота, следует предельно аккуратно наносить состав на поверхность ногтя, избегая попадания средства на кутикулу и боковые валики. Это позволит избежать раздражения и последствий химического ожога.

Бескислотный праймер подходит для людей с чувствительной кожей, склонной к аллергии и сыпи. Он более щадящий и мягкий, но от того не менее эффективный. Используется в гелевом наращивании и покрытии гель-лаками.

Техника нанесения праймера

Как наносить праймер? Основные правила нанесения праймера:

• Придать желаемую форму свободному краю ногтя.
• Проверить ноготь на отсутствие кутикулы и птеригия.
• Обезжирить и очистить ногтевую пластину специальным дезинфицирующим средством Nail Prep.
• Нанести тонкий слой бонда либо праймера.
• Подождать несколько секунд до полного высыхания препарата (обычно нанесение кислотного праймера при высыхании оставляет блестящий след на ногте).
• После нанесения праймера к ногтям нельзя прикасаться.

В основном все праймеры высыхают на воздухе, но есть некоторые фирмы, методология сушки которых предполагает использование LED либо УФ-лампы. При очень сложных и запущенных случаях разрешается нанесение второго слоя праймера.

После проведения всех вышеперечисленных этапов можно приступать непосредственно к процедуре нанесения базового слоя гель-лака, цвета и финишного покрытия. Благодаря использованию праймера гель лак будет надежно держаться на ногтях, без сколов и трещин.

Заключительные характеристики. Ценовая политика варьируется от бюджетных вариантов до дорогих профессиональных марок. Отличным соотношением цены и качества является марка Блюскай. Общим визуальным показателем любого качественного праймера является блестящий слой, оставленный на поверхности ногтя после высыхания (не считая кислотного праймера).

Очень важно выбрать правильный продукт, проверенный качеством и надежностью бренда и положительными отзывами клиентов. Нужный вид праймера поможет подобрать мастер ногтевого сервиса, оценив состояние ногтей, либо же методом проб и ошибок. Уже со временем ногтевые профи приспосабливаются к специфике ногтей своих постоянных клиентов и знают, какие материалы более адаптированы под их особенности.

Фото покрытия ногтей гель-лаком

Праймер для ногтей незаменим, без него не может быть осуществлена практически ни одна манипуляция специалистами нейл-арта. Сам праймер выполняет множество функций, которые будут напрямую зависеть от его вида. Для чего он нужен? Как его выбрать и использовать?

Что такое база, бонд и праймер для гель-лака?

Вопреки распространенному мнению, праймер, база гель-лака, бонд – не одно и то же, а разные субстанции. Девушки часто путают эти средства, не зная, в чём отличие каждого из них. Бонд сушит ноготь, он предназначен для лучшего сцепления геля или акрила при наращивании ногтей, также он будет способствовать схватыванию (адгезии) моделирующего материала с поверхностью ногтевой пластины на молекулярном уровне, и как следствие, препятствовать отслойке искусственных кончиков.

Праймер же это некая «грунтовка» , позволяющая скрыть недостатки ногтя, сделать его более ровным, обеспечив лучшее прикрепление искусственного покрытия к ногтевой пластине. Это тот материал, без которого невозможно представить современное наращивание гелем или акрилом. Его нанесение позволяет не только улучшить адгезию, но и обезжирить, удалить лишнюю влагу, уничтожить микроорганизмы под моделированием.

Базой же называют одно из средств подготовки ногтей к покрытию, как бы первый слой гель-лакового покрытия, однако это не гель-лак. База добавляет прочности и дополнительно выравнивает поверхность, что иногда просто необходимо, а иногда нет.

Для чего нужны разные виды праймера для гель-лака?

В специализированном магазине можно купить несколько видов праймера, каждый из них будет иметь особенности назначения и использования.

Преп (бонд) используется перед нанесением кислотного или безкислотного праймера, ведь при покрытии ногтевой пластины гель-лаком или акрилом одним препом не обойтись. Он способствует обезжириванию, удаляет лишнюю влагу, при этом не затрагиваются глубокие слои ногтя, т.е. водный баланс не нарушается, что является профилактикой ломкости и хрупкости ногтей.

Использование бонда перед покрытием обычным лаком будет способствовать более длительному сроку ношения. Специалисты нейл-арта рекомендуют использовать преп женщинам с повышенным потоотделением, ведь излишняя влага будет способствовать отслаиванию искусственного материала.

Бескислотный вид рекомендован при наращивании гелем. Состав лака убирает жировые отложения, способствует уничтожению патогенной микрофлоры, подсушивает ногтевую пластину, убирая излишки влаги. Его работа осуществляется по принципу двустороннего скотча, при правильном использовании результат будет ничуть не хуже, чем при использовании кислотных субстанций. Сам лак не влияет на цвет будущего моделирования, но в отдельных случаях может стать причиной раздражения кожи вокруг ногтя при несоблюдении методики покрытия.

Кислотный праймер изготовлен на базе метакриловой кислоты и чаще всего используется при наращивании акриловыми пудрами. Благодаря специальной формуле чешуйки верхнего слоя ногтевой пластины приподнимаются и сцепляются с искусственным материалом с формированием прочной связи.

Его запрещено использовать при плохом состоянии ногтей, а при попадании на кожу провоцирует сильное жжение за счет содержания кислот.

Как правильно наносить праймер для гель-лака?

Первым шагом к идеальному моделированию будет подготовка рабочего поля – обработать свободный край ногтя, удалить заусенцы и кутикулу. Для лучшего скрепления материала с ногтевой пластиной необходимо сошлифовать бафиком верхний слой ногтя с особым вниманием к боковым валикам. Ногтевую пыль необходимо удалить специальной щеточкой, после чего приступают к нанесению праймера, который был выбран.

Методика покрытия довольно проста:

1. На кисть набирается небольшое количество средства, круговыми движениями отжимается о край флакончика, а после и о салфетку – безворсовую. Важно не допустить попадания инородных тел, пыли в лак во время покрытия;
2. Приложив кисть на середину ногтя, лаку позволяют немного стечь с кисти. Производители будут давать конкретные рекомендации по покрытию: некоторыми видами необходимо наносить лак на весь ноготь, другими достаточно покрыть лишь его срединную линию. Главное, не допустить попадания лака на кутикулу и кожу. Покрытие тонким слоем материала позволит избежать таких ошибок;
3. Толщина покрытия не повлияет на конечный результат, но как показывает практика, тонкий и средний слой обеспечит лучшее сцепление ногтевой пластины и геля, толстый слой может препятствовать поднятию ногтевых чешуек;
4. После высушивания лака (см. инструкцию) можно приступать к моделированию.

Праймер для гель-лака: нужен ли?

Многих любительниц идеального маникюра, интересует только один вопрос: какой нужен праймер для гель-лака?

И можно ли обойтись без него? На данный вопрос можно ответить по-разному. Использовать праймеровое покрытие специалисты рекомендуют обладательницам тонких и слабых натуральных ногтей при наличии расслоений и ломкости, в таком случае можно достичь лучшего сцепления материала и ногтевой пластины, а само моделирование дольше продержится. В остальных случаях можно наносить гель-лак на ногти без праймера, но соблюдая все правила и методику покрытия и моделирования.

Только специалист во время работы, и после осмотра, может сказать какой именно праймер лучше всего подойдет. Его правильный выбор будет гарантом идеального моделирования и наращивания, которое продержится длительное время.

Новичок нейл-арта 100% запутается в обилии профессиональных терминов в ногтевом сервисе. Дегидраторы, бондеры, праймеры… Что это? Для чего? Самое ужасное, что сами мастера в салонах, порой, по-разному, применяют эти термины. У меня голова шла кругом, когда я пожелала окунуться в эти дебри.

Особенно меня заинтересовал вопрос, что такое праймер для ногтей. Потому, как именно в этом вопросе каждый человек давал свое определение. Вот так родилась идея этой статьи. В ней я расскажу все, что о нем узнала, для чего он нужен, и как его использовать.

Зачем нужен праймер для ногтей

Не буду умничать профессиональными терминами, скажу проще, как я поняла это сама. Праймер — это жидкость, либо гель, которую используют как «грунтовку», дабы подготовить свою родненькую ногтевую пластину к нанесению искусственного материала и к его прочному сцеплению. эта жидкость главная основа.

Под его воздействием чешуйки ногтевой пластины чуток приподнимаются и обезжириваются, что обеспечивает лучшее сцепление с наращенным ногтем.

Праймер применяется не только при наращивании, а также для покрытия ногтей гель лаком для большей долговечности.

Визуально он выглядит как обычный флакончик с лаком. Правда, стекло флакончиков темное. Это гарантирует его сохранность и определенную долговечность.

Эта жидкость не имеет ни цвета, ни запаха. Наносят его уже на подготовленный ноготь (после обработки кутикулы, подпиливания, полировки). Данное средство хорошо подсушивает и дезинфицирует ногтевую пластину, а также обеспечивает надежную защиту от отслоек искусственных ноготков. При этом не нарушается водный баланс, т.к. действие идет только на поверхности ногтя.

Таким образом, праймер:

— защищает

— обезжиривает

— сцепляет

Какие виды праймеров можно встретить на прилавке

Скорее всего, вы заинтересовались этой статьей, т.к. хотите сделать наращивание дома. Так ведь? Если так, то знайте, что праймеры бывают трех видов:

1. — кислотные
2. — бескислотные
3. — преп-праймер (он же бонд)

Какой лучше из них ответить сложно, т.к. каждый работает по-своему.

Кислотный имеет такое название, потому что в составе имеется метакриловая кислота, содержание которой колеблется от 30 до 90%. С помощью нее удается размягчить ногтевую пластину и максимально открыть чешуйки ногтя. Сцепление с искусственными материалами в этом случае получится мощным, долговечным.

Его чаще всего используют при . После высыхания этого праймера, на ногтях образуется белый налет. Это характерно для этого средства и означает, что оно высохло, пугаться не стоит.

Я бы не советовала вам использовать кислотный праймер самостоятельно. Из-за наличия в составе кислоты есть все шансы получить ожог. Уж лучше в салон к профессионалам. Здоровье дороже.

Кстати, его советуют тем, чьи ногти заражены грибковым заболеваниям. А также тем, у кого деформированные ногтевые пластины. Так что, даже при заболевании ногтей, есть шанс для красивого маникюра.

Бескислотный безопасен для домашнего использования, т.к. не имеет в своем составе опасной кислоты. Он идеально подходит для чувствительных ногтей. Только есть нюанс: его можно использовать только если у вас крепкие, здоровые ноготки, в противном случае вы еще больше испортите их.

Однако будьте осторожны. Хоть он менее опасен, чем кислотный, но раздражение на коже вызвать может.

Это отличная основа для наращивания гелем. На каком-то форуме увидела сравнение его с двусторонним скотчем. Действительно, по сути, так и есть. Бескислотный праймер рекомендуют наносить на сухие ногти.

Об отличиях кислотных и безкислотных праймеров для ногтей и их правильном использовании очень хорошо рассказано в это видео:

Преп-праймер или бонд называют базовым покрытием, которое используется перед нанесением других видов праймеров. Самостоятельно без других средств он не справится, «силы» не хватит. Это легкое, гипоаллергенное и защитное средство, т.к. в составе вы не обнаружите отдушек и красителей.

Как видите, какого-то одного универсального средства нет.

Как пользоваться праймером для ногтей

• Привести в порядок кутикулу (отодвинуть ее) и форму ногтей
• Обработать пилочкой поверхность ногтя, чтобы убрать естественный блеск
• Щеточкой убрать остатки опила
• ТОНКИМ слоем (отожмите кисточку о край флакона) нанести средство на всю поверхность ногтя. Чтобы равномерно обработать всю поверхность, средство наносите кисточкой точечно, не оставляя необработанных участков.
• Ждем пару-тройку минут, чтобы праймер высох

Как определить, что праймер высох? Если используете бескислотный, то на ногте не должно остаться мокрых мест. А если кислотный, то после высыхания ногтевая пластина станет белёсой.
В некоторых салонах праймер наносят в два слоя. Видимо, чтобы надежнее было.

Можно ли обойтись без праймера

Когда я спросила у мастера, чем можно заменить праймер и можно ли исключить его совсем, она однозначно ответила «нет». Хотя призналась, что мастера маникюрного дела поначалу скептически отнеслись к новинке, считая ее бесполезной вещью, которая лишь увеличивает стоимость работы.

Но со временем мнение изменилось. Обезжирить ноготь можно обычным средством для снятия или даже уксусом, а вот приподнять чешуйки ногтевой пластины для того чтобы произошло сцепление под силу только ему родимому. Вот чем отличается праймер от базы для ногтей. Так что, увы, без него никак. Он в разы увеличивают качество наращивания.

Кстати, про уксус. Хоть праймеры и не имеют запаха, но близко к лицу ногти все-таки не подносите. Химия же в любом случае. Зачем лишний раз вдыхать вредные пары. Лучше без жертв, хоть красота этого и требует.

Как выбрать праймер?

Думаю, что после прочтения статьи, вы остановите свой выбор на бескислотном средстве для маникюра в домашних условиях. Это правильно! Самое то, чтобы как следует набить руку и стать домашним профи в этом деле. Что еще могу посоветовать?

Берите все средства из одной серии. Средства из одной серии (будь-то лаки, шампуни…) как бы дополняют друг друга. Т.е. составы этих средств не конфликтуют, и вы обезопасите себя от неожиданных реакций. Но это не панацея. Знаю девочек, которые без претензий пользуется разными средствами, не привязываясь к бренду. Но, думаю, так получится, когда уже руку набьешь. Или я ошибаюсь?
Не знаю, одним словом. Я не рисковала. Когда все флакончики из одной серии как-то спокойнее.

Отличие кислотного праймера от бескислотного: состав, преимущества

Чтобы выбрать оптимальный вариант для работы, важно понять, чем отличается кислотный праймер от бескислотного. В составе Acid Based средств (на основе кислот) одним из основных ингредиентов является метакриловая кислота, которая относится к категории умеренно токсичных веществ. Но вред она представляет лишь в больших концентрациях, а в праймер, предназначенный для обработки ногтей, она включена в разбавленном виде, да еще и дополнена другими компонентами.

Отличие кислотного праймера от бескислотного заключается в его следующих особенностях:

• Обеспечивает прочное сцепление материалов с ногтем за счет того, что делает пластину шершавой, открывая чешуйки.

• Рекомендован обладательницам жирной ногтевой пластины.
• Подходит женщинам, у которых часто потеют руки.
• Наносится под акриловые ногти (бескислотный праймер больше подходит для гелевого наращивания, с акрилом его связь будет недостаточно крепкой).

Выбирая кислотный или бескислотный праймер для гель-лака, важно понимать: оба средства обезвоживают ногти и растворяют кожный жир, благодаря чему исчезает благотворная среда для развития микробов, а поверхность становится пористой и шершавой. Вот только средство на основе кислот действует более агрессивно, в то время как бескислотный вариант (Ультрабонд) мягко и аккуратно обезжиривает пластину. Нельзя делать наращивание без использования — это может привести к возникновению и развитию грибковых поражений ногтя.

Чем отличается бескислотный праймер от кислотного: компоненты, особенности использования

Чтобы понять, какой праймер лучше — кислотный или бескислотный, стоит изучить состав и второго средства. Ультрабонд не содержит метакриловую кислоту, её успешно заменил этилацетат. Это вещество также является растворителем, но при этом более безопасно, и в отличие от компонентов Acid Based средств не вызывает аллергических реакций.

В чем разница между бескислотным и кислотным праймером? В том, что можно отнести к категории универсальных:

• Подходит даже для слабых, чувствительных, склонных к расслаиванию ногтей.
• Не меняет уровень кислотности ногтевой пластины, и не истончает её.
• Не оказывает воздействия на цвет базового покрытия.
• Быстро высыхает, что ускоряет рабочий процесс.

Как отличить кислотный праймер от бескислотного? Всё очень просто: первый вариант после высыхания создает на ногтях белый оттенок — это свидетельствует о том, что средство полностью просохло и можно переходить к следующему этапу наращивания. Ультрабонд не оставляет подобного «следа», поэтому мастеру предстоит ориентироваться на наличие влажных участков — если они исчезли, то можно продолжать работу над маникюром.

Важные нюансы при работе с кислотным и бескислотным праймером

Выбирая, что лучше — кислотный или бескислотный праймер, нужно ориентироваться на особенности кожи и ногтевой пластины, что поможет подобрать оптимальный вариант. Мастерам будут полезны и другие рекомендации, которые нужно учитывать при работе с любым видом праймера:

1. Оба средства опасны, поэтому при работе с ними нужно обязательно надевать респиратор или же маску с качественными защитными фильтрами, а также не допускать попадания праймеров на кожу.
2. Даже бескислотный праймер нужно наносить в минимальных количествах, действуя при этом очень аккуратно.
3. Любые манипуляции с ногтевой пластиной проводят только после того, как нанесенный слой праймера полностью просох.

Так, все-таки,какой праймер выбрать — кислотный или бескислотный? Мастеру, занимающемуся наращиванием, стоит приобрести оба варианта, подбирая средство в соответствии с особенностями ногтевой пластины клиентки. Обладательницам жирной ногтевой пластины больше подойдет , а людям, склонным к аллергии и страдающим от чрезмерной сухости кожи, рекомендованы бескислотные средства. Каждый из вариантов обладает как преимуществами, так и недостатками, поэтому стоит ориентироваться на личные предпочтения и особенности организма.

Перед нанесением на ногтевую пластину любого покрытия, необходима ее предварительная подготовка. Именно для такой цели служит праймер для ногтей. Его используют для обезжиривания поверхности натурального ногтя или же дегидратации, которые способствуют не только правильному нанесению конечного косметического материала, но также и его равномерному распределению по всей рабочей поверхности ногтя.

Стоит отметить, что современная косметология располагает несколькими разновидностями данных жидкостей, а именно:

• прейп-праймеры;
• кислотные;
• бескислотные.

Прейп-праймер

Используется перед нанесением безкислотного или кислотного составов. Его еще называют «бондом». Он необходим для произведения качественного обезжиривания ногтевой натуральной пластины. Нужно отметить, что в процессе обезжиривания также происходит и дегидратация ногтя, являющаяся обязательной в процессе наращивания ногтей или же приклеивания искусственных.

Подготовительный или бонд-состав обезжиривает исключительно верхний ногтевой слой без каких-либо нарушений водного баланса, что очень важно для исключения ломкости ноготка и его высыхания.

Вещество не содержит в своем составе каких-либо отдушек или красителей. Также не является гипоаллергенным.

Нанесенный на ногтевую пластину бонд-состав, обеспечивает лаку дополнительную стойкость, предотвращая его «сползание» на следующий день.

Главным показателем, который вынуждает применить данный праймер для ногтей, является повышенное потоотделение на руках клиента, которому производят наращивание ногтевых пластин.

Данный состав в косметологии применяется в процессе наращивания ногтей с помощью геля. Он создает на поверхности ногтя своеобразный шероховатый слой, который способствует более крепкому соединению используемого конечного материала с самой ногтевой пластиной. Благодаря его применению, наращенный ноготь не будет трескаться, отслаиваться и крошиться.

Бескислотный состав наносится исключительно на поверхность природного ногтя для препятствования попадания на кутикулу или ткани разнообразных используемых косметических средств.

Кислотный праймер

Изготавливается кислотный праймер для ногтей на основе метакриловой кислоты. Наносится на ногтевую пластину после ее обработки пилкой. Благодаря химическим элементам, входящим в его состав, провоцирует открытие чешуек ногтевых пластин. Поднимаясь, они создают отличную шероховатую поверхность, способствующую более надежному сцеплению материала для наращивания с поверхностью природного ногтя.

Данный состав применяют в процессе работы с акрилами. Перед началом работ ноготь должен быть покрыт данным средством дважды и с обязательным высыханием каждого слоя.

О высыхании нанесенного слоя кислотного праймера будет сигнализировать появление белого напыления на ногтевой пластине.

Только после данной реакции возможно нанесение материала для наращивания ногтей.

Секреты работы с праймером

Определенные секреты работы с данным веществом были раскрыты в процессе разговора. Тем не менее, остались еще некоторые, заслуживающие озвучивания:

• Удивительно, но данное вещество обладает своеобразным дезинфицирующим действием.
• Используя данную жидкость, необходимо избегать ее попадания на типсу. Это может спровоцировать трещину и поломку ногтя.
• Нанесение состава происходит с помощью специальной и удобной кисточки.
• В случае попадания жидкости на кожу, необходимо смыть ее большим количеством воды, чтобы предотвратить возникновение раздражения или покраснения кожи.

Среди разнообразия таких жидкостей стоит обратить внимание на товары компаний JessNail, LeChat, IBD Stick и Kinetics.

Необходимо отметить, что любой из существующих типов праймеров не нуждается в применении ультрафиолетовой лампы для подсушивания, поскольку высыхает на протяжении одной или двух минут с момента нанесения.

Технология нанесения праймера

Технология нанесения такого состава проста, но требует некоторых знаний, заключающихся в следующих шагах:

• готовим безворсовую салфетку;
• откручиваем крышку, после чего тщательно отжимаем кисточку;
• промокаем ее о салфетку и только после этого приступаем к нанесению.

Дальнейшие шаги будут выглядеть следующим образом:

1. Легко, ближе к центру, касаемся ногтевой пластины, предоставляя веществу растечься.
2. Следим за тем, чтобы праймер для ногтей не попал на кожу или кутикулы.
3. Покрыв составом всю поверхность ногтевой пластины, переходим к следующему ногтю.
4. После завершения процедуры плотно закрываем баночку и немедленно выбрасываем использованную салфетку.

Стоит уточнить, что любой праймер для ногтей представляет собой достаточно агрессивное вещество. Тем не менее, соблюдение техники безопасности позволит легко с ним работать.

Опытные косметологи рекомендуют, в обязательном порядке наносить кислотный праймер на «проблемные» ногти. Под словом «проблемные» стоит понимать обгрызенные, сильно сальные, глубоко посаженные, а также в случае крайне влажных рук из-за обильного потоотделения.

Данное средство является просто незаменимым в случае работы с ногтевыми пластинами, расположенными на ногах.

подскажите что первое надо наносить праймер или праймер бондер, и надо их сушить в УФ лампе? Фирма Global

подскажите что первое надо наносить праймер или праймер бондер, и надо их сушить в УФ лампе? Фирма Global

1. Бондер в лампе не сушат, а лучше идите и учитесь профессии) ) и кстати не обязательно гели, которые используются только с праймерами — помоечные.
2. Праймер и бондер совершенно разные вещи!!!! Праймер кислота которая ПРИПОДНИМАЕТ ЧЕШУЙКИ НОГОТКА ЧТОБЫ ЛУЧШЕ ДЕРЖАЛСЯ МАТЕРИАЛ!!! А бондер обезжиривает, нужен он для того чтобы подсушить ногтевую пластину, а праймер именно для сцепления!!! Вы правильно сделали что купили два средства! С начало вы наносите бондер, высыхает он моментально, а потом праймер, он также быстро сохнет. Только с праймером будьте аккуратнее, на кутикулу и вообще на кожу он попасть не должен. В лампе они не сушатся, хотя в некоторых фирмах бывает исключение, посмотрите по консистенции, если жидкий как вода то сушить не надо, если тянется и густой то надо сушить в лампе. 36v -2-4 мин; 9v-5-7 мин.
3. Лариса, без обид, а когда Вы покупали и праймер, и бондер, Вы это куда наносить собирались или в суп добавлять? А может на лицо намазать? Ну почему Вы покупаете профессиональные материалы не учась, ничего не зная?
   Значит так, если Ваш гель (Вы хоть гель купили или что? ) Global — помоечный, то без праймера он вряд ли на ногтях будет держаться. Просто не помоечные гели стоят на ногтях и без праймера. Праймер — это кислота, опасная жидкость, если попадет на кожу, то можно получить химический ожег, аллергенна. Функции праймера — суперобезжирить ногтевую, чтобы даже если Вы на ноготь плюнете, то все будет держаться, праймер выжигает верхний слой ноготка — это и есть обезжиривание. Наносить на ноготок его надо слегка смоченной кистью, ждать когда впитается и высохнет, потом на высохший ноготок наносить гель. Лампа УФ для этого не нужна. Она Вам понадобится для геля. Гель будет «сохнуть» с липким слоем, поэтому не надо сидеть до завтра и ждать, когда гель высохнет. Липкий слой с геля снимается специальной жидкостью. Наносить и праймер, и праймер бондер друг за другом в любой последовательности глупо, потому что бондер — это бескислотный праймер с меньшим эффектом. Это как бы Вы на бутерброд со сливочным маслом налили и подсолнечное, Так, что, если купили уже оба, то Вас — обманули. Но это и не удивительно — обманывать будут до тех пор пока не отучитесь.

Метод изотермической амплификации, опосредованный петлей (LAMP): недорогой и эффективный новый инструмент для молекулярного общественного здравоохранения

Этот метод не требует даже дорогостоящего оборудования (особенно ПЦР, GelDoc или холодильника). Конкретный набор праймеров LAMP состоит из F3 (прямой внешний праймер), B3 (обратный внешний праймер), FIP (прямой внутренний праймер) и BIP (обратный внутренний праймер). Эти праймеры будут разработаны с использованием программы Primer Explorer (http: // www.loopamp.eiken.co.jp) для амплификации гена 18S рибосомной РНК
(http: // www.ebi.ac.uk.com). Протокол может быть оптимизирован для каждой реакции; мой опыт изучения быстрой идентификации Acanthamoeba spp. 1,4 мМ дезоксинуклеозидтрифосфатов, 0,8 М бетаина и 1 мкл ДНК-полимеразы Bst в буфере (20 мМ Трис-HCl pH 8,8, 10 мМ KCl, 10 мМ (Nh5) 2SO4, 8 мМ MgSO4 и 0,1% Твин 20). Реакцию останавливали нагреванием (с использованием водяной бани или нагревательного блока) в течение 2 мин при температуре 80 ° C.Мутность реакции LAMP будет проверяться визуально в режиме реального времени. Продукты ДНК также можно было визуализировать в УФ-свете после добавления реагента для флуоресцентной детекции Loopamp (Eiken Chemical Co., Ltd.). Продукты LAMP подтверждали электрофорезом в 1,5% агарозном геле и визуализацией с помощью анализа окрашивания. Чувствительность и специфичность были 100%. (см. больше на: Usa Lek-Uthai et al. Быстрая идентификация Acanthamoeba из контейнера для контактных линз с использованием метода изотермической амплификации, опосредованной петлей.Experimental Parasitology Volume 121, Issue 4, April 2009, Pages 342-345). Тем не менее, изучение генотипирования и количества копий для специфических генов Plasmodium spp (для определения вида не требуется какой-либо метод экстракции ДНК из свежих или высушенных пятен крови) в различных эндемичных по малярии регионах Таиланда с 2007 года идут хорошо (не опубликовано) . Следовательно, этот метод может быть полезен для молекулярного общественного здравоохранения в программе борьбы с болезнями в развивающихся странах. LAMP занял меньше времени, чем qPCR, который потребовал 2 часа по сравнению с 1 часом для процедуры LAMP.Однако стоимость этого метода самая дешевая (около 70 центов США за образец по сравнению с 5-7 долларами США за образец при использовании амплификации ДНК с помощью ПЦР в реальном времени.

Одночасовой тест на Covid с использованием ЛАМПЫ

• 
  
• # proj-neb-lamp-test, # proj-нуклеиновая кислота-амплификация, # chlg-обнаружение-диагностика
• Папка Google с дополнительными материалами по проекту: https://drive.google.com/open?id=1ahzaeP2Z8Kh4TW0qkF1ijUBgGAvR7yZX. См. Также https: // www.facebook.com/onehourcovidtest.
• См. Раздел «Документы» этого проекта для получения дополнительных материалов, включая протоколы, литературу и бюджеты.
• Обратите внимание, что было три обновления проекта: одно в мае 2020 года; один в октябре 2020 года; и один — в марте 2021 года. Подробности приведены в конце этого документа.

Название проекта Одночасовой тест на Covid (ранее — Оптимизация теста NEB LAMP)

Краткое название 1 час Covid Test

Примечание: рецензенты для заявок на грант 5 раунда, см. Заявку на проект — проект 163 — 21_03_2021.pdf на вкладке Документы. Это предложение содержит последние обновления проекта. Краткую сводку автономных обновлений за март 2021 года также можно найти на вкладке Документы.

Проблема и предыстория (не более 200 слов)

Тестирование SARS-CoV-2 испытывает нехватку во всем мире. Протоколы тестирования, позволяющие диагностировать инфекции или выявлять заражение окружающей среды вирусом, еще не являются простыми, доступными или широко доступными. В настоящее время большинство диагностических тестов выполняется с помощью количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (RT-qPCR).RT-qPCR дорог, трудоемок, не масштабируется и не доступен для многих людей, живущих в условиях ограниченных ресурсов. Чрезмерная зависимость от этого сложного метода молекулярной амплификации не позволяет людям во многих регионах мира знать, присутствует ли вирус, и препятствует усилиям общественного здравоохранения. Петлевая изотермическая амплификация (LAMP) — это доступный, надежный, простой и открытый метод обнаружения, который требует только одной температуры инкубации и может выполняться в чашке с горячей водой. Недавний предварительный отчет

(см. Раздел «Документы») от New England Biolabs (NEB) использовал LAMP для обнаружения SARS-CoV-2 в сочетании с индикатором pH, чтобы визуализировать результаты путем простого изменения цвета за 30 минут или меньше.Если этот метод можно оптимизировать и сравнить с текущим тестом RT-qPCR, это будет метод амплификации нуклеиновой кислоты в одной пробирке, предлагающий быстрое, точное и экономичное обнаружение SARS-CoV-2, который можно использовать где угодно.

Краткое описание решения простым языком (ТЕКУЩИЙ) (не более 150 слов)

Мы разработали простой тест для SARS-CoV-2, возбудителя COVID-19. Тест безопасен, чувствителен и не требует дорогостоящего лабораторного оборудования. Результаты могут быть получены в течение одного часа после сбора образца и могут быть прочитаны невооруженным глазом как розовый (отрицательный) или желтый (положительный).

(Краткое описание исходного решения в простых терминах)

Предварительные данные о методе на основе LAMP показывают, что он чувствителен и может быть выполнен без сложного оборудования, с простым считыванием изменения цвета +/- с использованием коммерчески доступных реагентов NEB . Мы оптимизируем и проверим версию этого в нескольких лабораториях. Это первый этап разработки теста на SARS-CoV-2, который можно проводить где угодно, даже с ограниченными возможностями, и людьми без специального медицинского или биологического образования.

Краткое техническое описание решения ( ТЕКУЩИЙ ) (максимум 200 слов)

Когда этот проект начался в 2020 году, New England Biolabs (NEB) недавно опубликовала предварительные результаты простого теста SARS-CoV-2 основан на RT-LAMP, методе молекулярного обнаружения, который позволяет идентифицировать определенные нуклеиновые кислоты в образцах с колориметрической визуализацией результатов. Реакцию проводили в течение 15-45 минут при единой температуре (65 градусов Цельсия), и ее можно проводить в чашке с горячей водой с результатами, считываемыми невооруженным глазом или мобильным телефоном.

Мы оптимизировали протокол испытаний, варьируя метод сбора образцов, очистку и концентрацию РНК, последовательности и соотношения праймеров, концентрацию магния, буферы для образцов, а также температуру и время инкубации. Кроме того, мы проверили надежность метода в ходе межлабораторного исследования в трех лабораториях США (Западный Чикаго, штат Иллинойс; Бруклин, Нью-Йорк; и Атланта, штат Джорджия).

(Техническое описание оригинального решения) (не более 200 слов)

New England Biolabs (NEB) недавно опубликовали предварительные результаты простого теста SARS-CoV-2 на основе RT-LAMP, метода молекулярного обнаружения, который позволяет идентифицировать специфические нуклеиновые кислоты в образцах с колориметрической визуализацией результатов.Реакция проводится в течение 15-45 минут при единой температуре (65 градусов Цельсия) и может проводиться в чашке с горячей водой, а результаты считываются невооруженным глазом или мобильным телефоном. Цена за тест менее 3 €. [3] [4] Реагенты LAMP были успешно лиофилизированы с помощью NEB для обнаружения других заболеваний, что потенциально устраняет необходимость в холодовой цепи для их развертывания [5].

Первоначальные отчеты об этом тесте многообещающи, но на pH-зависимый репортерный механизм потенциально могут влиять условия образца, а сама реакция очень чувствительна к таким переменным, как время реакции.Таким образом, требуется дополнительная работа, чтобы тест стал широко доступным и чтобы пользователи имели разный уровень квалификации.

Мы могли бы оптимизировать протокол испытаний, варьируя соотношение праймеров, концентрацию магния, буферы для образцов и очистку РНК. Кроме того, мы проверили надежность метода с помощью межлабораторного исследования, по крайней мере, в четырех международных лабораториях.

Состояние продвижения проекта (ТЕКУЩИЙ) (не более 100 слов)

Мы успешно оптимизировали одночасовой тест на COVID-19 с помощью LAMP. Нам удалось обнаружить как положительные, так и отрицательные образцы вируса SARS-CoV-2 в мазках из полости рта как у лиц с симптомами, так и у бессимптомных людей. Некоторые из этих результатов сравнивались с результатами экспресс-тестов на антигены и тестов RT-qPCR, и результаты согласуются с результатами тестов RT-qPCR, которые являются золотым стандартом. Кроме того, мы смогли обнаружить положительный образец от бессимптомного человека, который был отрицательным с помощью экспресс-теста на антигены, но положительным с помощью теста RT-qPCR, который, по-видимому, предварительно предполагает, что OneHour COVID-19 Test с использованием LAMP более чувствителен, чем экспресс-тест на антиген.Мы отправили публикацию в Журнал биомолекулярных методов (JBT) с описанием нашего теста и предварительных результатов.

Теперь мы хотели бы подать заявку на одобрение поправок по улучшению клинических лабораторий (CLIA), чтобы мы могли начать масштабное тестирование сообщества. Для утверждения CLIA требуется директор лаборатории с определенной квалификацией. Мы определили такого директора лаборатории. Кроме того, лаборатории, одобренные CLIA, должны соответствовать стандартным рабочим процедурам (СОП) для клинических испытаний и особым требованиям к физическому лабораторному пространству.

Мы также хотели бы продолжить клинические валидационные испытания нашего одночасового теста на коронавирус непосредственно наряду с тестированием RT-qPCR. Методистская больничная система в Индиане готова собирать образцы пациентов с подозрением на COVID-19, которые обращаются в их отделение неотложной помощи.

(Исходное состояние проекта)

Мы испробовали как минимум дюжину различных методов сбора образцов и последующего извлечения РНК, как опубликованных в препринтах, так и наших собственных итераций этих методов.Большинство из них требует центрифугирования хотя бы в одну стадию, а те, которые этого не делают (например, экстракция на бумажной основе), не могли быть воспроизведены в наших руках. Протокол, который лучше всего сработал для нас, использует три продаваемых продукта, которые вряд ли станут дефицитными. Оптимизированный тест занимает один час только с пипетками и водяной баней.

График проекта (ТЕКУЩИЙ)

● Недели 1 и 2 — Подайте заявку на сертификацию CLIA (заполните документы и получите подписи владельца лаборатории и директора лаборатории).Изучите требования к физическому лабораторному пространству и СОП. Закажите лабораторную мойку и установите ее в лаборатории. Отправьте наборы для забора мазков из полости рта в систему методистской больницы в Индиане для клинической проверки. Закажите тестовые реагенты для последующего тестирования образцов мазков из полости рта.

● Недели 3 и 4 — создание защищенной базы данных для регистрации пациентов; записываться на прием; связать пациентов с их пробирками для забора образцов; и сообщить о результатах.

● Недели 5 и 6 — Выполните последующее тестирование образцов мазков из полости рта из системы методистской больницы в Индиане.

● 7 и 8 недели — начало масштабного тестирования пациентов.

(Исходный график проекта)

● Неделя 0 — Заказ реагентов (праймеры, ферменты, буферы, положительный контроль ДНК / РНК)

● Неделя 1 — Изменение соотношения праймеров и концентраций магния для оценки максимальной эффективности реакции и его обнаружение. Закажите синтетические РНК-положительные контроли.

● Неделя 2 — Тест, связанный с буферами и обработками для переноса / обработки / использования образцов с использованием контролей с синтетической РНК

● Неделя 3 и 4 — Окончательная проверка чувствительности и специфичности с контролями (к 28-му дню)

● Неделя 5 — Запишите данные и методологию передачи в партнерскую лабораторию с объектами BSL2 (партнерская лаборатория CDC и, возможно, другие)

● К 8 неделе — Выводы (достаточно ли надежен этот метод для работы с образцами в этой пандемии?) И широкое распространение открытых Информация.

Примечание. Это был исходный график, и мы потратили не менее двух месяцев на изучение множества различных методов сбора образцов и выделения РНК. Нам нужно было что-то совместимое с колориметрическим набором LAMP, поскольку мы хотели, чтобы результаты считывались визуально без необходимости в оборудовании.

Исследование: описать гипотезу и цели исследования (не более 1000 слов)

Мы проверим гипотезу о том, что недорогой и простой в использовании набор для обнаружения SARS-CoV-2 на основе изотермического усиления с колориметрическим выходом может быть оптимизирован и упрощен сверх того, что в настоящее время коммерчески доступно.Если бы тест можно было упростить и сделать более надежным, он мог бы позволить гораздо более широкое использование людьми с минимальной подготовкой и ресурсами, потенциально оказывая очень широкое влияние.

Обратите внимание, что по состоянию на сентябрь 2020 года мы объединили реагенты NEB LAMP с набором для мазков OR-100 и реагентом PreIT.Q2A от Genotek для разработки протокола с открытым исходным кодом, который может быть немедленно развернут в любом масштабе и использован любым набор пипеток и водяная баня (мы использовали дешевую кухонную плиту sous vide).

Мониторинг окружающей среды будет облегчен для всех, хотя использование любого образца пациента должно выполняться в соответствующих лабораторных условиях (BSL3).

Форма изотермической амплификации, известная как петлевая изотермическая амплификация (LAMP), была разработана в 2000 году (6), а позже стала еще более быстрой и способной обнаруживать РНК путем добавления обратной транскриптазы RT-LAMP. LAMP — это признанный метод амплификации нуклеиновых кислот в одной пробирке, предлагающий быструю, точную и экономичную диагностику инфекционных заболеваний (8) в изотермических условиях. Он использует вытесняющую цепь ДНК-полимеразу и 4-6 праймеров при 60-73 градусах изотермически и выполняется менее чем за час (9). 9 менее чем за час, даже если присутствуют большие количества нецелевой ДНК или других биологических веществ (11). Было показано, что RT-LAMP является чувствительным и достаточно специфичным для обнаружения РНК-вирусов в биологических образцах, таких как кровь, сыворотка, моча, спинномозговая жидкость, фекалии, ткани и мазки из носа, без необходимости очистки РНК (12). Недавно было сделано несколько значительных улучшений RT-LAMP, и New England Biolabs (NEB) недавно опубликовала протокол с использованием их WarmStart® Colorimetric LAMP 2X Master Mix (ДНК и РНК).

Это краткосрочный проект с несколькими четкими целями:

Задача 1. Проверить и оптимизировать опубликованный протокол NEB.

Мы будем проводить параллельные эксперименты в нескольких международных лабораториях, варьируя условия и реагенты, чтобы получить более быстрые, надежные и менее дорогие результаты, чем текущий протокол.

Задача 2. Сбор данных о прочности по оптимизированному протоколу

Мы проверим надежность теста в руках людей из нескольких международных лабораторий, чтобы убедиться, что результаты согласуются.

Цель 3. Проверить оптимизированный протокол на образцах пациентов с инактивированным Covid-19.

По крайней мере, одна из наших участвующих лабораторий (Центры по контролю за заболеваниями США) имеет необходимые средства обеспечения уровня биобезопасности для тестирования улучшенного протокола на образцах пациентов. Это актуально для потенциального развертывания теста в тех регионах мира, где мало машин для текущих тестов (для тестов ВОЗ и США требуется машина для количественной ПЦР).

Методология (не более 500 слов)

Сотрудничество и участие Interlab являются ключевой частью этой методологии.Все партнерские лаборатории будут пытаться проводить все эксперименты, если это позволяют их помещения и персонал. Цель состоит в том, чтобы проверить улучшенный протокол во многих различных лабораториях с различными возможностями и географическим местоположением.

1. Воспроизвести исходный протокол в нескольких лабораториях . В оригинальной публикации NEB с использованием RT-LAMP для обнаружения SARS-CoV-2 было протестировано пять наборов праймеров. Мы начнем с того, что лучше всего сработало в их руках и для которого имеется коммерчески доступный безопасный положительный контроль в виде плазмидной ДНК.Мишень представляет собой часть последовательности нуклеиновой кислоты белка N нуклеокапсида. Протокол будет таким, как описано в Basic NEB LAMP Protocol , который можно найти в разделе «Документы» этого проекта.

1. Различные параметры для оптимизации чувствительности и специфичности. Мы планируем оптимизировать и проверить наши праймеры RT-LAMP в сравнении с двумя различными коммерчески доступными синтетическими положительными контролями (плазмида и РНК) и коммерчески доступными контролями, чтобы проверить потенциальную перекрестную реактивность с MERS и предыдущими SARS.Мы будем измерять их чувствительность, специфичность, перекрестную реактивность и TTR (время до ответа), а также варьировать концентрацию праймера, время инкубации и концентрацию магния.

1. Влияние пробных буферов. Тестовые образцы собираются в различные буферы. Промежуточная очистка РНК часто является ограничивающим шагом в областях с ограниченными ресурсами, и поскольку даже в развитых странах эти наборы были в дефиците, важно определить, могут ли испытания образцов без предварительной очистки РНК дать приемлемые результаты.Мы проверим влияние различных буферов образцов на чувствительность и специфичность оптимизированного теста.

1. Начальная проверка на соответствие существующим методам с использованием образцов пациентов. Эта часть проекта будет осуществляться только лабораториями, отвечающими стандартам уровня биобезопасности своей страны для работы с инактивированными образцами инфицированных пациентов. Инактивация будет производиться с помощью буфера набора ДНК Genotek OR-100. На этом первом этапе проекта будет использовано ограниченное количество образцов пациентов для сравнения результатов оптимизированного теста с результатами, полученными с помощью используемых в настоящее время тестов на основе RT-qPCR.

Результаты / Ожидаемые результаты (не более 500 слов)

В конце этой фазы проекта у нас будет

1. Разработана оптимизированная версия протокола RT-LAMP от NEB для обнаружения SARS-CoV-2 .
2. Продемонстрировано, что протокол может использоваться в лабораториях с различными ресурсами и лицами с разным уровнем предыдущего обучения молекулярной биологии.
3. Документировал процесс и полученные данные, которые привели к пунктам 1 и 2 выше, в ясной и доступной форме на JOGL
.
4. Проведено предварительное тестирование оптимизированного метода на человеческих образцах в партнерской лаборатории с соответствующими мерами биобезопасности.

Какие шаги вы предприняли для обеспечения безопасности вашего решения?

Каждая участвующая лаборатория соблюдает инструкции по уровню биобезопасности в своей стране. Большая часть работы будет связана с использованием синтетических положительных контрольных образцов в области BSL1. Если проект дойдет до точки, где требуется более высокий уровень биобезопасности (например, инактивированные образцы человека), он будет осуществляться только в участвующих лабораториях, которые оборудованы для работы с образцами на этом уровне биобезопасности.Весь персонал, проводящий эксперименты, прошел соответствующую подготовку по технике безопасности в принимающих лабораториях, чтобы обращаться с химическими реагентами с минимальным риском, используемыми в этом протоколе, и использовать надлежащие лабораторные методы гигиены.

Обратите внимание, что ключевым решением было использование набора для мазков ДНК Genotek OR-100 для сбора образцов, поскольку буфер в пробирке инактивирует вирус и делает образцы очень безопасными для работы на первом этапе протокола.

На этой первой (только исследовательской) фазе проекта мы не будем взаимодействовать с регулирующими органами или медицинским персоналом.Мы не будем распространять наборы для тестирования.

Какое влияние, по вашему мнению, может оказать ваш продукт? (Не более 100 слов)

Тестирование SARS-CoV-2 ощущается во всем мире. Срочно необходимы новые методы испытаний, простые, доступные и широко доступные. Чрезмерная зависимость от этого сложного метода молекулярной амплификации не позволяет людям во многих регионах мира знать, присутствует ли вирус, и препятствует усилиям общественного здравоохранения.Если мы сможем оптимизировать простой метод RT-LAMP, который выгодно отличается от текущего теста RT-qPCR, он предложит быстрое, точное и экономичное обнаружение SARS-CoV-2, которое можно будет развернуть где угодно.

Как вы думаете, что могло бы сделать ваш проект успешным? (Не более 100 слов)

Успехом будет выполнение следующих задач:

1. Разработка оптимизированной версии протокола RT-LAMP от NEB для обнаружения SARS-CoV-2, которая является чувствительной и специфичной.
2. Продемонстрировать, что протокол может использоваться в лабораториях с различными ресурсами и лицами с разным уровнем предыдущего обучения молекулярной биологии.
3. Задокументируйте процесс и полученные данные, которые привели к 1 и 2 выше, в ясной и доступной форме на JOGL.
4. Провести предварительное тестирование оптимизированного метода на образцах человека в лаборатории-партнере с соответствующими мерами биобезопасности, показав, что он работает так же или лучше, чем используемые в настоящее время методы.

Перечислите известные проблемы, потенциальные риски, серые зоны и т. Д.в вашем проекте

-Оптимизация с помощью синтетических контролей может привести к тому, что тест не будет работать также с образцами пациентов

-Некоторые реагенты доступны только из отдельных источников, нам необходимо запланировать альтернативы, такие как мастер-миксы своими руками . Это также будет верно, если регенты окажутся недоступными или будут стоить слишком дорого за тест, чтобы быть полезными в областях с небольшими ресурсами.

— Может оказаться невозможным достичь хорошей чувствительности при использовании сырых образцов без экстракции РНК.В таком случае нам может потребоваться перейти к альтернативным методам очистки или новым буферам для образцов.

-Тест может быть нелегко доставить, несмотря на сообщения о том, что эти типы реагентов можно лиофилизировать.

Обновления этого первоначального проектного предложения можно найти на вкладке «Документы», а также ниже. Одно обновление проекта будет 17 мая 2020 года, а другое — 18 октября 2020 года (скоро).

Оптимизация теста NEB LAMP — Проект 163: https: // app.jogl.io/project/163

Краткое изложение проделанной на сегодняшний день работы

17 мая 2020 г.

Этот проект финансировался JOGL и AXA Research Fund в первом раунде. Средства были депонированы 23 апреля 2020 г., поэтому неделя 0 считается начались 23 апреля. 8 неделя завершится 17 июня. Тем не менее, мы уже достигли прогресса по всем предложенным нами этапам в течение 4 недель после получения финансирования.

Исходный график проекта 1 раунда.

См. Комментарии ниже для объяснения того, что было выполнено.

● Неделя 0 — Заказ реагентов (праймеры, ферменты, буферы, положительный контроль ДНК / РНК)

● Неделя 1 — Изменение соотношения праймеров и концентраций магния для оценки максимальной эффективности реакции и ее обнаружения. Закажите синтетические РНК-положительные контроли.

● Неделя 2 — Тест, связанный с буферами и обработками для переноса / обработки / использования образцов с использованием контролей с синтетической РНК

● Неделя 3 и 4 — Окончательная проверка чувствительности и специфичности с контролями (к 28-му дню)

● Неделя 5 — Запишите данные и методологию передачи в партнерскую лабораторию с объектами BSL2 (партнерская лаборатория CDC и, возможно, другие)

● К 8 неделе — Выводы (достаточно ли надежен этот метод для работы с образцами в этой пандемии?) И широкое распространение открытых Информация.

Оценка наборов грунтовок LAMP

На сегодняшний день мы оценили четыре набора грунтовок LAMP:

1. «Чжан Н-А» https://www.medrxiv.org/content/10.1101/2020.02.26.20028373v1

Этот набор праймеров нацелен на вирусный N-ген, на него имеется ссылка в приведенном выше препринте и ссылка на него непосредственно на веб-сайте NEB, где можно приобрести колориметрическую мастер-смесь LAMP WarmStart. Первый и последний авторы работают непосредственно в NEB.

1. «Мамонт N» https: // мамонт.bio / wp-content / uploads / 2020/03 / Mammoth-Biosciences-A-protocol-for-quick-detection-of-SARS-CoV-2-using-CRISPR-diagnostics-DETECTR.pdf

Этот праймер нацелен на вирусный N-ген и упоминается в приведенном выше препринте. Протокол был разработан Mammoth Biosciences.

3 и 4) «NEB N2» + «NEB E1». Эти наборы праймеров не опубликованы. Они нацелены как на вирусный N-ген, так и на E-ген. Последовательности были предоставлены непосредственно Натаном Таннером из NEB, который сказал нам, что они более чувствительны, чем набор праймеров Zhang N-A.Эти наборы праймеров оценивали отдельно и вместе в реакциях LAMP. Таннер также рекомендовал добавлять 40 мМ гуанидина HCl в реакции LAMP.

Результаты: мы смогли обнаружить SARS-CoV-2, используя все четыре из указанных выше наборов праймеров. Однако NEB N2 + NEB E1 вместе являются наиболее чувствительными с LoD между 10-50 вирусными копиями в трех лабораториях (будут проведены дополнительные тесты). Положительные результаты появляются уже через 20 минут, тогда как образцы отрицательного контроля остаются отрицательными в течение 60 минут.Оптимальными условиями были инкубация при 68 ° C (по сравнению со стандартными 65 ° C), двукратная концентрация праймеров Loop и добавление 40 мМ гуанидина гидрохлорида, pH 8. Набор праймеров для N-гена мамонта показал худшие результаты, причем многие ложноположительные результаты для отрицательных контролей. Набор праймеров Zhang N-A работал хорошо, но не был таким чувствительным (LoD ~ 300 вирусных копий), как наборы NEB N2 + NEB E1.

Оценка положительных контролей для SARS-CoV-2

После начала этого проекта были опубликованы данные, подвергающие сомнению информацию о концентрации, предоставленную поставщиками некоторых контролей (например,грамм. плазмиды IDT). Поэтому были испытаны сорта.

На сегодняшний день мы оценили 5 положительных контролей на SARS-CoV-2:

1. Синтетическая плазмида положительного контроля ДНК N-гена от IDT: https://www.idtdna.com/pages/landing/coronavirus-research-reagents
2. Контроль синтетической РНК от Twist: https://www.twistbioscience.com/resources/twist-synthetic-sars-cov-2-rna-controls
3. Термоинактивированный вирус в культуре клеток Vero от Zeptometrix: https: // www.zeptometrix.com/products/sars-cov-2-isolate-usa-wa1-2020-culture-fluid-heat-inactivated-05-ml
4. Теплоинактивированный вирус в культуре эпителиальных клеток человека из ATCC через ресурсы BEI: https://www.beiresources.org/Catalog/antigen/NR-52350.aspx
5. Извлеченная вирусная РНК из ATCC через ресурсы BEI: https://www.beiresources.org/Catalog/BEINucleicAcids/NR-52347.aspx

Результаты: Нам удалось обнаружить все пять этих положительных контролей на SARS-CoV-2 с помощью колориметрического анализа NEB LAMP.

Оценка перекрестной реактивности для близкородственных коронавирусов

На сегодняшний день мы оценили перекрестную реактивность для 2 положительных контролей для других близкородственных коронавирусов:

1. Синтетическая плазмида ДНК N-гена положительного контроля для SARS-CoV от IDT: https://www.idtdna.com/pages/landing/coronavirus-research-reagents
2. Синтетическая плазмида положительного контроля ДНК N-гена для БВРС-КоВ от IDT: https://www.idtdna.com/pages/landing/coronavirus-research-reagents

Результаты: Мы не обнаружили перекрестной реактивности ни для положительного контроля для SARS-CoV, ни для положительного контроля для MERS-CoV.

Следующие шаги:

Оценка методов сбора образцов, буферов и методов концентрации / очистки РНК с использованием синтетических клинических образцов с добавками

С начала этого проекта появилось несколько публикаций, в которых исследуется количество вирусных частиц в забор образцов с помощью тампона или жидкости, такой как слюна. Слюна — жидкость, которую легче всего собрать, но исследования показывают, что количество частиц на мл, особенно при разведении в среде для инактивации, слишком мало для того, чтобы прямое добавление к LAMP было значимым во всех случаях.Это также относится к тампонам, помещенным в среду, такую ​​как Viral Transport Media. Таким образом, хотя реакция LAMP кажется более жесткой, чем RT-qPCR в отношении интерференции со стороны среды для сбора образцов и компонентов образца, наиболее надежный тест, вероятно, должен будет включать этап экстракции РНК. Слюна — привлекательный метод сбора образцов, поскольку он неинвазивен и существуют коммерческие наборы для сбора образцов, которые облегчат сбор образцов в домашних условиях. Набор содержит среду для инактивации, и полученную пробирку можно безопасно отправить по почте.Затем РНК будет извлечена из пробирки. Помимо очистки РНК от потенциально мешающих компонентов, этап экстракции также концентрирует РНК и, следовательно, делает тест более чувствительным.

На сегодняшний день мы оптимизируем реакции LAMP в основном с использованием очищенных нуклеиновых кислот (синтетические плазмиды ДНК, синтетическая РНК и экстрагированная РНК). Мы полагаем, что теперь у нас есть оптимизированные наборы праймеров с использованием NEB N2 + NEB E1 и оптимизированной температуры 68 градусов C, плюс удвоенная концентрация праймеров Loop и добавление 40 мМ гуанидин гидрохлорида.Мы начали исследовать создание синтетических клинических образцов. Кроме того, поскольку существующие тесты на Covid-19 всегда включают положительный контроль для РНК человека, мы начнем оценку наборов контрольных праймеров, чтобы убедиться, что мы можем обнаружить РНК клеток человека в качестве положительного контроля, что наш тест LAMP работает правильно и образец действительно содержит материал от пациента.

Мы начали предварительные испытания, добавляя разведение необработанного вируса Zeptometrix в культуре клеток Vero (не экстрагированной) непосредственно в реакции LAMP, и получили положительный результат.Мы также добавили в слюну разведения сырого вируса Zeptometrix в культуре клеток Vero , затем экстрагировали вирусную РНК с помощью коммерческого набора (E.N.Z.A.), и мы получили положительный результат.

Мы определили несколько опубликованных методов экстракции для сравнения и стремимся разработать метод, который будет недорогим, эффективным и не зависит от реагентов, заказанных ранее. На данный момент мы определили следующие методы как перспективные и сначала протестируем их на синтетических клинических образцах с добавками.

1. Протокол на основе железных бусин (бусины Hillbilly)
2. кремнезем (стеклянное молоко) из Гарвардской бумаги
3. Протокол шприцевого фильтра

Валидация с использованием реальных клинических образцов в сотрудничестве с больницами

-Партнеры подлежат уточнению

Заключительный этап лабораторных работ будет заключаться в проверке эффективности оптимизированного метода от сбора образцов до получения результатов с использованием реальных клинических образцов и их сравнение к результатам с использованием проверенного метода, такого как RT-qPCR.Это повлечет за собой партнерство с доступом к клиническим образцам. В настоящее время мы устанавливаем контакты и имеем несколько возможных партнеров, в том числе Чирис Мейсон из медицинского центра Weill-Cornell, CDC и международных партнеров.

Одночасовой тест на Covid с использованием теста LAMP — Проект 163: https://app.jogl.io/project/163

(ранее оптимизация теста NEB LAMP)

Краткое описание проделанной работы на сегодняшний день

18 октября 2020 г.

Этот проект финансировался JOGL и AXA Research Fund в раундах 1 и 3.

Цели третьего раунда и результаты на сегодняшний день.

Наши цели по финансированию 3-го раунда включали: 1) Оценка методов сбора образцов, буферов и методов концентрации / очистки РНК с использованием синтетических клинических образцов с добавками; и 2) Валидация с использованием реальных клинических образцов в сотрудничестве с больницами — партнерами, которые подлежат уточнению. Для получения более подробной информации см. Сводку проделанной работы на дату 17 мая 2020 года.

Оценка методов сбора образцов, буферов и методов концентрации / очистки РНК с использованием синтетических клинических образцов с добавками

Создание и оценка клинических образцов синтетических образцов с добавками

Перед получением финансирования третьего раунда мы начали предварительное создание синтетических образцов с добавками клинические образцы с использованием инактивированной нагреванием культуры SARS-CoV-2, заражающей клеток Vero от Zeptometrix.К сожалению, оказалось, что с помощью этой культуры мы могли получить только качественные результаты, поскольку компания не предоставила технической информации о том, сколько эквивалентов вирусного генома на миллилитр содержится в культуре. Поэтому мы заказали еще одну инактивированную нагреванием, но количественно определенную культуру SARS-CoV-2 в клетках легких человека из Американской коллекции типовых культур (ATCC) через BEI Resources. Использование этой фактической вирусной культуры оказалось важным для моделирования фактического образца пациента по сравнению с использованием синтетической или очищенной вирусной РНК, потому что в реальной культуре капсид должен быть открыт, чтобы обеспечить доступ к РНК для тестирования.Мы постоянно находим гораздо более высокий LOD при использовании вирусной культуры по сравнению с использованием синтетической или очищенной РНК, что позволило нам быть более реалистичными в оценке нашего теста.

Оценка методов сбора образцов и буферов

Наша команда уже серьезно рассматривала первоначальное использование коммерческих наборов для сбора образцов с использованием набора, который включает буфер, который как инактивирует любые присутствующие вирусные частицы, так и стабилизирует РНК для тестирование.Были установлены контакты с торговыми представителями компании DNA Genotek, поскольку некоторые из их наборов для сбора уже были одобрены FDA для разрешения на использование в чрезвычайных ситуациях (EUA) и соответствовали нашим критериям инактивации и стабилизации. Для оценки были заказаны два типа наборов для сбора образцов: ORAcollect • RNA OR-100 оральный тампон (https://www.dnagenotek.com/ROW/products/collection-human/oracollect-rna/ORE-100.html) и OMNIgene • Набор для слюны ORAL OM-501 (https://www.dnagenotek.com/ROW/products/collection-microbiome/omnigene-oral/OM-501.html). У нас не было согласованных результатов с использованием набора OMNIgene • ORAL OM-501 слюны с нашим последующим тестированием, поэтому мы переключили наше внимание на набор для перорального мазка ORAcollect • RNA OR-100. Помимо получения стабильных результатов с OR-100, этот набор также удовлетворяет потребность, о которой мы узнали, когда разговаривали с передовыми работниками — медицинскими техниками, медсестрами и врачами, — которые просили провести тест с мазком из полости рта. Преимущества мазка из полости рта проявляются, когда невозможно собрать слюну. Мазок из полости рта можно использовать для тестирования пациентов, не отвечающих на лечение, пациентов с пищеводными трубками и пациентов с сухостью во рту (часто встречается у пожилых пациентов).Насколько нам известно, существует только один тест с FDA EUA, в котором используется мазок из полости рта. Используя набор для перорального мазка ORAcollect • RNA OR-100, мы теперь определились как с методом сбора образцов, так и с буфером, которые будут использоваться вместе.

Что касается буферов, мы также испробовали много разных буферов из множества выпущенных препринтов. Одна из проблем, связанных с использованием самодельных буферов, связана с безопасностью и временем. Любой новый используемый тип буфера должен быть протестирован в сторонней лаборатории уровня BSL-3, чтобы убедиться, что он может инактивировать вирусные частицы.Это может быть сделано путем добавления живых вирусных частиц в культуру клеток млекопитающих, инкубации и последующего доказательства того, что ни одна из клеток млекопитающих не инфицирована. Поэтому в целях экономии времени и безопасности (и стоимости) в настоящее время мы хотели рассматривать только те буферы, которые уже прошли это тестирование. Как упоминалось выше, буфер ДНК Genotek соответствует этому требованию. Еще один буфер, отвечающий этому требованию, — это DNA / RNA Shield от Zymo Research. DNA / RNA Shield продается в наборах для сбора, аналогичных DNA Genotek, но DNA / RNA Shield также продается производителем как отдельный реагент, который обеспечивает преимущество гибкости в методах сбора, особенно если мы в конечном итоге откажемся от готовых наборов или они становятся недоступными.Это способствовало бы более рентабельному тестированию в медицинских учреждениях, где использование буфера в недорогих универсальных пробирках для сбора с отдельно приобретаемыми тампонами могло бы легко заменить дорогостоящие наборы OR-100. К сожалению, результаты использования Shield несовместимы с нашим протоколом последующего тестирования.

Оценка концентрации РНК и методы очистки

Ранее мы определили важность очистки и концентрирования вирусной РНК.Очистка необходима для удаления ингибиторов, таких как компоненты слюны и клеточный мусор, а концентрация необходима, чтобы избежать ложноотрицательных результатов у пациентов с низким титром вируса. Этап очистки и концентрирования проходит между сбором / инактивацией / стабилизацией образца с использованием набора и колориметрической LAMP-реакцией для получения результата. В предыдущие месяцы мы потратили большую часть нашего времени на оценку большого количества как опубликованных протоколов, так и вариантов протоколов, которые мы разработали.

В разделе «Следующие шаги» для финансирования 3 раунда мы предложили попробовать: 1) протокол на основе железных бусин (бусинки Hillbilly); 2) протокол с использованием диоксида кремния (стеклянное молоко); и протокол шприцевого фильтра.Протокол извлечения на основе железных шариков оказался дорогостоящим, и не хватало шариков, которые требовали точного производства. Мы переключили наше экспериментальное внимание на кремнезем, бумагу, шприцевые фильтры, осаждение спиртом и другие методы. Из многих протоколов, которые мы пробовали, кремнезем лучше всего работал в наших руках. Мы начали с оценки протокола стеклянного молока из препринта Гарварда. Однако, как и в случае со многими из опробованных нами предпечатных протоколов, мы не смогли воспроизвести их результаты. Мы рассудили, что диоксид кремния должен работать для очистки вирусной РНК, потому что он обычно использовался в протоколах экстракции нуклеиновых кислот до того, как колоночные фильтры и наборы стали предпочтительным методом.После того, как мы опробовали множество итераций модифицированных протоколов с использованием стеклянного молока, мы нашли один очень простой и недорогой протокол, который работал очень хорошо.

Кремнезем недорог и легкодоступен, что делает его привлекательным компонентом для нашего теста. Одним из недостатков использования диоксида кремния является то, что пользователю с минимальной подготовкой в ​​лабораторных условиях может быть трудно его использовать. Стеклянное молоко быстро осаждается, гранулируется и его трудно дозировать, а также потому, что протокол стеклянного молока требует этапов центрифугирования; оба они идут вразрез с масштабируемостью, и мы чувствовали, что для того, чтобы тест был полезным, он должен быть масштабируемым.По этим причинам мы продолжали параллельно работать над другими протоколами очистки и экстракции РНК, которые не требовали стеклянного молока.

Мы подошли к тому моменту, когда мы подумали, что экстракция на основе диоксида кремния — наш лучший вариант, когда один из наших контактов в DNA Genotek предложил нам попробовать реагент препИТ • Q2A вместо экстракции РНК (этап очистки и концентрирования), чтобы увидеть если этот реагент может работать, чтобы сократить время для нашего протокола. Он хорошо работал в наших руках в модифицированном протоколе, и теперь мы заменили наш протокол стеклянного молока на протокол PrepIT • Q2A.Наконец, мы проверили, можем ли мы исключить некоторые шаги. DNA Genotek рекомендует предварительно нагреть образец до 56 ℃ после сбора, а затем сделать 10-минутный шаг при 75 ℃. Мы проводили сравнения с этими шагами и без них, и мы не определили, что ни один из них не нужен. Весь средний этап очистки и концентрирования вирусной РНК теперь занимает всего 20 минут, что означает, что весь наш тест от сбора образца до получения результата занимает всего 60 минут; поэтому мы изменили название нашего проекта — One Hour Covid Test Using LAMP.

Следующие шаги:

Проверка с использованием реальных клинических образцов

Этот шаг оказался более трудным, чем мы ожидали. Мы преследовали несколько связей, но сначала не смогли заставить какую-либо клиническую лабораторию взять на себя обязательство по оценке нашего теста. Благодаря Томасу Ландрейну из JOGL у нас теперь есть доступ к клиническим образцам для подтверждения нашего теста через больничную систему APHP в Париже. Мы находимся в процессе завершения логистики для этого проекта.

В августе было объявлено, что фонд XPRIZE спонсирует новую задачу по быстрому обнаружению Covid.В рамках конкурса командам, вышедшим в полуфинал, будет отправлено ~ 200 слепых проб для тестовой оценки. Эти образцы не являются клиническими образцами, а созданы с использованием материалов, которые в настоящее время продаются биотехнологическими компаниями-поставщиками в качестве положительного контроля для тестирования Covid-19. Двадцать команд, которые преодолеют это первое препятствие, будут отобраны для финального раунда, и их тесты будут подвергнуты полной клинической оценке с использованием образцов пациентов. Мы решили принять участие в конкурсе XPRIZE, чтобы привлечь внимание к JOGL и нашему тесту с открытым исходным кодом и, что более важно, чтобы у нас была возможность получить стороннюю проверку нашего теста.Наша команда вышла в полуфинал! Мы ожидаем проверки наших надуманных образцов и ожидаем их получить уже на следующей неделе. Если валидация пройдет успешно, мы будем чувствовать себя намного увереннее, приступив к валидации с использованием клинических образцов.

Кроме того, с нами недавно связалась группа исследователей во главе с доктором Моникой Пахуэло из лаборатории молекулярной микробиологии Университета Перуана Каэтано Эредиа в Лиме, ​​Перу. Они сказали, что прочитали о нашем одночасовом тесте на Covid в статье на Medium, написанной Марианной Лимас с JOGL: https: // medium.com / justonegiantlab / a-one-hour-covid-test-created-by-open-source-team-has-advanced-them-to-the-semi-finals-for-127b1781dd86. Они пытаются найти надежную альтернативу стандартному методу количественной ПЦР-тестирования на Covid-19 в Перу. У них есть доступ к клиническим образцам, и они заинтересованы в валидации нашего теста. Мы пока только обменивались электронными письмами и провели с ними одну встречу с Zoom, но сотрудничество кажется многообещающим.

Разработка более самостоятельной версии одночасового теста на Covid

С самого начала нашего проекта в марте этого года мы и большая совместная группа, которая общается через канал Nucleic Acid Amplification в JOGL Slack, установили конечной целью является разработка недорогого и доступного теста для обнаружения SARS-CoV-2, который максимально избегает использования коммерческих наборов и реагентов.Как упоминалось выше, наш OneHour Covid Test основан на коммерческих компонентах NEB и DNA Genotek, которые впервые используются вместе новым способом в протоколе. Мы сделали выбор в пользу этого пути, потому что член нашей команды из Чикаго работает над тем, чтобы в ближайшее время получить сертификат CLIA и сможет предложить остро необходимые испытательные мощности в районе Чикаго, что сделает легкодоступный тест, который массово производится, незамедлительно. Мы понимаем, что это не наша конечная цель, но она служит немедленной и неотложной цели — иметь доступный для использования протокол тестирования с открытым исходным кодом.И NEB, и DNA Genotek обязались производить достаточное количество наборов и реагентов, чтобы не было дефицита, который существует для столь многих других наборов, компонентов наборов и реагентов. Однако у нас все еще есть наша конечная цель, и с этой целью мы продолжим работать над протоколами, которые не зависят от такого количества коммерческих продуктов, как и наши партнеры JOGL.

Этот проект не мог бы продвинуться до этой стадии без существования платформы JOGL и без поддержки в виде мини-грантов от JOGL и AXA Research Fund.

Список участвующих лабораторий и членов их команд

BioBlaze Community Bio Lab, West Chicago Il, USA .

Сара Уэр имеет докторскую степень и 20-летний опыт исследований в качестве генетика / молекулярного биолога. Она является основателем двух независимых лабораторий в районе Чикаго: BioBlaze Community Bio Lab и Lizzy Blossom Ag Services. Сара также преподает биологию и гуманитарные науки в университете.

Изабелла Зорра имеет степень магистра в области строительства и управления и степень бакалавра архитектуры с акцентом на изготовление. В настоящее время она работает менеджером проектов в секторе энергетики. Кроме того, она увлечена наукой и постоянно улучшает условия жизни человека. Изабелла также работает с BioBlaze Community Bio Lab.

Lizzy Blossom Ag Services, Западный Чикаго, Иллинойс, США.

Aanika Biosciences, Бруклин, штат Нью-Йорк, США.

Эллен Йоргенсен имеет докторскую степень. в области молекулярной биологии и работал в биотехнологической отрасли более 30 лет, в том числе в разработке тестов, регулируемых FDA. Она основала две общественные лаборатории, Genspace и Biotech Without Borders. Ее дипломная работа была посвящена вирусу болезни Ньюкасла, парамиксовирусу с отрицательной цепью РНК. Она была одним из основателей Фонда вакцин Сабина, а в настоящее время является главным научным сотрудником Aanika Biosciences, компании, предлагающей экологические тесты на SARS-CoV-2.https://www.linkedin.com/in/ellenjorgensen/

Hackuarium, Лозанна, Швейцария.